05)；但患者空腹血糖、甘油三酯和低密度脂蛋白水平明显高于对照组(均P＜0.05。糖尿病患者收缩压(P=0.086)与舒张压(P=0.116)水平较对照组差异无统计学意义。 2．T2DM患者血浆CF6水平(262.1±49.9)pg／ml比对照组高23.9％(P＜0.01)，患者血浆6-keto-PGF1a水平(13.7±3.9)pg／ml比对照组降低16.5％(P＜0.05)。患者血浆6-keto-PGF1a水平与CF6水平呈显著负相关关系(r=-0.52，P＜0.01)。 3．分析临床危险因素发现，吸烟患者血浆CF6水平显著高于不吸烟患者(293.1±56.2pg／ml对255.6±46.4 pg／ml，P＜0.05)。但本组患者血浆CF6水平在有无高血压病分组间的差异无统计学意义。血浆CF6水平在不同性别间差别无统计学意义(男259.7±46.6pg／ml对女264.6±53.9pg／ml，P=0.687)。应用胰岛素治疗患者的血浆CF6水平显著低于非胰岛素治疗者(249.13±65.9pg／ml对281.75±55.4pg／ml，P＜0.05)。

4．单变量简单相关分析显示，患者血浆CF6水平与空腹血糖(r=0.535，P＜0.01)、GHbA_(1c)、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白及载脂蛋白B水平均显著相关；以CF6水平为因变量，选择年龄、性别、血糖、血脂及血压等指标为自变量进行多元回归分析显示：两步选入的变量分别为GHBA_(1c)和LDL，无变量从方程中剔除。回归分析第一步接受变量为GHBA_(1c)(r=0.553，R~2=0.306，P＜0.01)，第二步接受GHBA_(1c)和LDL(r=0.638，R~2=0.406，P＜0.01)；对方程检验有统计学意义(F=21.575，P＜0.01)；回归方程为CF6=105.95+12.24×GHBA_(1c)+16.44×LDL。即，GHBA_(1c)和LDL是影响T2DM患者血浆CF6水平的独立因子。 17-AAG小白鼠 血浆6-keto-PGF1a水平与空腹血糖、GHbA_(1c)及CF6水平均显著相关。以血浆6-keto-PGF1a水平为因变量，多元逐步回归分析显示血浆CF6水平是影响T2DM患者6-keto-PGF1a水平变化的独立因子(r=-0.521，R~2=0.27，P＜0.01)。

5．离体实验发现，排除渗透压影响后，高浓度葡萄糖孵育内皮细胞，CF6基因表达和蛋白释放水平均呈时间和浓度依赖性增加。分别给予10mmol／L，20mmol／L和30mmol／L浓度葡萄糖孵育24h后，培养基中CF6浓度比对照组(123.8±14.7pg／ml)分别增高28.5％(P＜0.05)，116.2％(P＜0.01)和125.5％(P＜0.01)。以含30mmol／L葡萄糖培养基孵育细胞后，时间依赖性增加CF6分泌水平(6h 163.5±20.4 pg／ml；12h 201.0±35.0pg／ml；24h 272.3±33.0 pg／ml和48h 266.5±13.2 pg／ml)，24h达到稳态水平，较对照组培养基中CF6浓度高2.2倍(P＜0.01)。CF6基因的表达有相似改变。 6．用30mmol／L葡萄糖孵育HUVECs显著促进p38 MAPK的磷酸化水平，而甘露醇对照组未发现该作用。并且，PKC抑制剂和p38 MAPK抑制剂能够抑制高糖诱导的p38 MAPK磷酸化。同时发现，高糖诱导的CF6分泌能够被PKC阻滞剂和P38 Doxorubicin订单 MAPK阻滞剂显著抑制，其抑制率分别为-45％(P＜0.01)和-23％(P＜0.018)；同样，上述阻滞剂也抑制高糖诱导的CF6mRNA表达(均P＜0.01)。 7．胰岛素抑制高糖刺激的CF6分泌，胰岛素(10~(-7)mol／L)与高糖共孵育HUVECs 24h后，培养基中CF6浓度较单纯高糖孵育组降低56.6％(P＜0.01)。同样，与单纯高糖组比较，加入胰岛素共孵育内皮细胞能够显著抑制高糖诱导的CF6mRNA表达增加(P＜0.01)。

结论及意义 1．T2DM患者血浆CF6水平升高，并与其PGI_2水平降低独立相关。提示T2DM患者CF6升高可能通过抑制PGI_2等途径参与糖尿病及其心血管并发症的发生，为体液因素参与糖尿病发病提供了新认识。 Stem Cell Compound Library体外 2．T2DM患者血糖水平与循环CF6升高显著正相关；体外高糖刺激HUVECs也能促进CF6表达与分泌。表明高糖可能是新发现的促进内源性CF6分泌的刺激因子。 3．PKC及P38MAPK等细胞内信号通路分子活化参与高糖诱导的内皮细胞CF6释放。提示探讨糖尿病CF6异常与PKC、MAPKs、PGI_2等相关因子的关系，可能具有重要理论和临床价值。 4．体内外实验均提示胰岛素抑制高糖诱导的CF6分泌，提示胰岛素治疗可能有助于降低糖尿病患者循环CF6水平异常。
目的:研究热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)磷酸化在血管紧张素II(angiotensinⅡ,AngII)与血小板源性生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移中的作用及其作用机制。 方法:采用体外培养SHR胸主动脉平滑肌细胞;用特异性的单克隆Phospho-HSP27抗体的蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSP27的活性;用FITC-鬼笔环肽标记F-actin并在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架的形态变化;采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验。 结果: 第一部分:AngII和PDGF-BB呈浓度依赖性诱导VSMCs的HSP27磷酸化,使VSMCs内F-actin数量明显增加,纵向平行排列,形成应力纤维丝,并促进细胞迁移。AngII(10-7mol/L)和PDGF-BB(30ng/ml)诱导后VSMCs的HSP27磷酸化水平在30分钟达高峰。AngII和PDGF-BB均能诱导VSMCs的HSP27磷酸化,作用峰值浓度分别为10-5mol/L和100 ng/ml,分别较对照组增高338.9%和159.1%(P<0.01)。HSP选择性阻断剂槲皮素以浓度依赖性方式抑制AngII和PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化,最大抑制率分别为71.7%和66.7%(P<0.01),对PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化的最大抑制率分别为85.0%、55.3%和41.0%(P<0.01),对PDGF-BB诱导的VSMCs迁移的抑制率分别为55.3%、55.6%和38.

05。5、ICPP儿童与正常儿童相比,血清NTproCNP及骨龄、IGF-1、BAP水平差异有统计学意义,其中前两者均P<0.05,后两者均P<0.01。6、原发性甲状腺功能减低症儿童与ICPP儿童血清NTproCNP、IGF-1差异有统计学意义,其中前者P<0.05,后者P0.05,身高、骨龄均有显著统计学差异,均P
目的:探讨p38MAPK信号通路在重症急性胰腺炎大鼠发病机制中的作用,以及吡格列酮对其活性的影响。

Tariquidar化学结构 方法:54只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,体重160-200g,随机分为假手术组(C组)、重症急性胰腺炎模型组(SAP组)和吡格列酮治疗组(P组),每组18只。采用5%牛磺胆酸钠(0.1ml/100g)逆行胰胆管内加压注射建立SAP模型。P组大鼠在术前2h腹腔内注射吡格列酮(50mg/kg)。分别于术后3、6、12h 3个时间点采用腹主动脉放血法将大鼠分批处死(每次每组6只),收集血标本和腹水送检血清、腹水淀粉酶;部分血清样本保存于-80OC,以备ELISA检测;观察术后胰腺大体病理改变,并留取胰腺组织分为两部分:第一部分放于4%中性甲醛溶液固定;第二部分立即放入液氮罐内冻存。采用Western blotting检测p38MAPK的活化程度,免疫组化法检测PPARγ蛋白的表达,并观察吡格列酮对上述各指标的影响。 结果: 1.血清淀粉酶变化:造模后SAP组、P组淀粉酶水平在各时间点均显著升高,与C组比较有统计学性(P<0.01);在6h、12hP组与SAP组比较,淀粉酶含量降低,有统计学意义(P0.05)。 3.胰腺大体评分变化:与C组相比,SAP组各时间点病理评分均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。P组评分较SAP组下降,在12h差异有统计学意义(P<0.01);P组评分较SAP组下降,在6h、12h差异有统计学意义(P<0.01);P组水平较SAP组明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01);而P组活性较SAP组下降,在3h、6h其降低水平有统计学意义(P0.05)。 结论:在SAP早期阶段p38MAPK信号迅速激活,并维持较长时间,与SAP的发生发展密切相关;吡格列酮可降低p38MAPK的活化程度,减轻炎症反应,发挥对胰腺的保护性作用。
目的:1.探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK,p38)和心锚重复蛋白(cardiac ankyrin

repeat protein,CARP)在大鼠心肌梗死(MI)后的表达变化,及其与MI后心肌重塑的关系;2.探讨辛伐他汀改善心肌重塑的作用是否与p38和CARP有关。 方法:结扎大鼠冠脉前降支致MI,术后24h存活大鼠随机分为MI组(n=25)、p38抑制剂SB203580组(SB组,10μmol/L.kg -1.d -1,n=25)、辛伐他汀组(Sim组,40 mg.kg -1.d -1,n=25)和假手术组(Sham组,n=15)。再将上述各组分为7d和28d二个亚组。各组均测定左心室重量指数(LVWI)、心肌细胞横切面面积(CSA),RT-PCR和免疫组化法测定p38和CARP在心脏的表达。 selleck化学 结果:1. MI组大鼠梗死区心肌细胞严重变性坏死,炎性细胞浸润,大量胶原纤维增生,非梗死区心肌细胞出现代偿性增生肥大;电镜显示,梗死交界区细胞溶解,线粒体明显增多,肌节中断,有明显收缩带肌丝溶解。SB组大鼠病变较轻,Sim组大鼠病变最轻。2. MI组与Sham组相比,前者LVWI和CSA明显增高(P0.05),但磷酸化p38(p-p38)表达明显升高(P<0.05)。Sim组与MI组相比,前者LVWI和CSA明显降低(P<0.01)。SB组与MI组相比,前者LVWI在7d时明显降低(P<0.01),CSA在7d和28d时均明显减小(P<0.01),p-p38表达在7d时高于Sim组(P0.05)。 结论: Doxorubicin购买 1.大鼠心肌梗死后p38和CARP表达增加; 2.抑制p38可抑制CARP的表达,CARP可能部分受p38信号通路调节; 3.辛伐他汀改善MI后心肌重塑的作用可能与抑制p38和CARP有关。
目的:通过白藜芦醇(Resveratrol,Res)体外培养人食管癌Eca109细胞,研究白藜芦醇对人食管癌Eca109细胞的促凋亡作用及其对凋亡相关基因survivin,bcl-2和bax表达的影响,进而探讨白藜芦醇作为潜在的治疗食管癌的抗肿瘤药物诱导食管癌细胞凋亡的机制,为今后临床治疗食管癌提供可靠的实验依据。

方法:本研究选用不同浓度,不同作用时间的白藜芦醇与人食管癌Eca109细胞于37℃,饱和湿度5%CO2条件下共同孵育。 1通过MTT法分析白藜芦醇对Eca109细胞生长增殖的抑制作用; 2通过倒置相差显微镜、透射电子显微镜、HE染色后光学显微镜观察白藜芦醇作用于Eca109细胞后细胞的形态学改变; 3用流式细胞术的方法检测白藜芦醇对Eca109细胞的促凋亡的作用及对细胞周期分布的影响; 4用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测白藜芦醇处理细胞后survivin,bcl-2和bax mRNA的表达水平; 5用流式细胞术的方法检测白藜芦醇对Eca109细胞的survivin,bcl-2和bax蛋白表达的影响。 结果: 1 MTT分析白藜芦醇抑制细胞生长的结果:0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、100μg/ml浓度的白藜芦醇分别作用于人食管癌Eca109细胞24h、48h和72h后,白藜芦醇抑制人食管癌Eca109细胞生长增殖呈一定的时间-剂量依赖性,生长抑制率最高可达76.42%±0.04%(p<0.01);0.91±0.03,0.74±0.04(p<0.01)。bax蛋白表达升高,荧光指数为1.05±0.03,1.17±0.04(p
目的研究川芎嗪(TMP)对肝星状细胞(HSC-T6)增殖、合成细胞外基质(ECM)成分及其一些相关细胞因子表达的影响,并探讨川芎嗪抗肝纤维化的可能机制。 方法培养肝星状细胞株(HSC-T6),以不同浓度的TMP以及转化生长因子-β1(TGF-β1)作用于HSC-T6 ,采用MTT比色法测定HSC增殖;采用ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及透明质酸(HA);用RT-PCR法检测基质金属蛋白酶13(MMP13)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)mRNA的表达;用Western印迹法检测结缔组织生长因子(CTGF)蛋白的表达水平。 结果一定浓度(100-1000mg/l)的TMP能抑制HSC的增殖,且呈剂量依赖性变化(P<0.01)。TMP可以使CTGF生成减少,并可抑制I型胶原、III型胶原和HA生成,二者下降程度呈正相关关系(r分别为0.861、0.807、0.868,P
目的:1.观察妊娠期高血压疾病(HDCP)患者胎盘绒毛显微结构的病理学改变,及合体滋养细胞(Syncytiotrophoblast cell, STB)和血管内皮细胞超微结构的病理学改变,并与正常妊娠组比较,明确妊娠期高血压疾病胎盘组织根本病理变化; 2.

实验动物来源：过表达人类Hsp27B基因的转基因鼠(Hsp27B transgenic mice,Hsp27 Tg)由本课题组、南京大学模式动物研究所共同构建,饲养于南京大学模式动物研究所的SPF级动物房中。2.心脏质量检测：称量并计算心脏重/体重比(Heat Weight/Body Weight, HW/BW)和心脏重/胫骨长比(heat

weight/tibialength,HW/TL),组织切片比较二尖瓣平面心脏大小。3.心功能及心脏结构检测：1)超声心动图检测左室射血分数(ejection 点击此处 fraction,EF%)及左室缩短率(fractional shortening,FS%)代表心功能；2)左室重构指标：舒张期/收缩期室间隔厚度(interventricular septal thickness at diastolic/systolic phase,IVSd/IVSs)、舒张期/收缩期左室内径(left ventricular internal diameter at diastolic/systolic phase, LVIDd/LVIDs)、舒张期/收缩期末期左室容积(left ventricle end-diastolic/systolic volume, LVVd/LVVs),左室质量(left ventricular mass,LV mass)。4.荧光定量PCR分析ATP能量代谢相关基因mRNA表达水平；心肌组织ATP含量测定。5.组织学及蛋白质印迹检测：1) 电镜观察心肌超微结构改变；2)心肌组织学检测：HE染色、免疫组化；3) Western Blot检测心肌蛋白质聚集；6. 心肌自噬水平检测及相关机制的研究：1) 电镜观察心肌自噬体数量；2) Western Blot检测LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、hVps34,Bcl-2、p-ERK/ERK;3) TUNEL检测心肌凋亡。结果：1.根据Hsp27表达水平的高低,将转基因小鼠分为两个转基因系,表达量较高的Tg10转基因系、表达量中等的Tg85转基因系。2.与野生型鼠相比,高表达Hsp27的转基因小鼠的心脏重／体重比(HW/BW)、心脏重/胫骨长比(HW/TL)增高；二尖瓣平面心脏肥大；而野生型小鼠和低度表达Hsp27的转基因小鼠HW/BV及HW/TL无统计学差异。3.与WT及Tg85小鼠相比,Tg10小鼠EF%及FS%明显降低(P<0.05或0.01)；IVSd(P<0.01)、LVIDd(P<0.05)、LVIDs(P<0.01)、LVVd(P<0.01)。4.逆转录PCR检测线粒体能量代谢基因mRNA水平,明显低于WT(P<0.01或0.05),Bcl-2显著下调(P
目的：本实验旨在探讨晚期糖基化产物(advanced

selleck激酶抑制剂 glycation end products, AGEs)对心肌细胞自噬水平的影响及自噬在AGEs诱导心肌细胞凋亡中的作用。方法：AGEs处理SD乳鼠原代心肌细胞,Western blot检测蛋白表达水平,透射电镜观察自噬小体,MTT实验检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果：与对照组相比较,AGEs处理原代心肌细胞后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达水平上调,SQSTM1/P62水平下降,电镜观察到自噬小体数量增多；AGEs处理组心肌细胞凋亡率升高,细胞活性降低。而用自噬抑制剂3-MA预处理后AGEs处理组细胞凋亡率进一步升高,细胞活性更低。AGEs能活化ERK、JNK和P38MAPK信号通路,并且抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路。ERK抑制剂PD98059或Akt激活剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)预处理能抑制AGEs诱导的心肌细胞自噬,而P38抑制剂SP600125或IGF-1预处理后能抑制AGEs诱导的心肌细胞凋亡。结论：本实验以乳鼠原代心肌细胞为对象,研究了AGEs对心肌细胞自噬与凋亡的影响。AGEs通过PI3K/AKT/mTOR和ERK/MAPK信号通路诱导心肌细胞自噬,通过PI3K/AKT/mTOR和P38/MAPK信号通路诱导心肌细胞凋亡。证明自噬在晚期糖基化产物诱导心肌细胞凋亡中具有保护作用。
急性肺损伤(acute lung injury, ALI)是由非心源性的各种肺内和肺外致病因素引起的急性进行性缺氧性呼吸衰竭,病情进一步发展将形成急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory 还有 distress syndrome, ARDS),最终引发多器官功能障碍,是临床常见病、多发病。由于对疾病发生发展过程认识的不足,目前临床对于改善ARDS患者严重的顽固性低氧血症的措施十分有限,现在依然没有理想的治疗手段,ARDS病死率始终居高不下。因此研究疾病的发病机制,在治疗ALI/ARDS、改善疾病的预后中显得尤为重要。ARDS发病机制错综复杂,研究表明其机制可能与机体正常炎症反应的过度激活有关。参与这种过度炎症的包括多种炎症细胞以及炎症介质。当炎症细胞接触到外源性、内源性刺激时会引起自身激活,同时释放更多的炎性因子使更多的细胞发生激活,这一细胞激活的过程与膜蛋白的活化有密切的联系。膜蛋白活化的一种重要的修饰方式是异戊二烯化修饰。常见的真核细胞中异戊二烯化修饰主要有香叶烯基化(GGPP修饰)和法尼烯基化(FPP修饰)两种,GGPP与FPP均来源于甲羟戊酸途径。既往研究发现使用他汀类(statins)药物即羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制齐(HMG-CoA

reductase inhibitor)有缓解炎症的作用,但具体作用原理尚不明确,其中的一种可能性猜测是他汀类对下游GGPP和FPP的合成发生抑制,减少了膜蛋白异戊二烯化,从而对炎症的进展起到抑制作用。本研究小组前期研究已证实在ARDS病程中肺泡上皮细胞内GGPPS1表达水平发生改变,且GGPPS1表达水平的变化程度与肺部炎症水平有直接相关性。查阅文献,在SCI中尚未有报道表明此改变在炎症细胞中的变化及作用。在众多炎症细胞中,单核巨噬细胞在炎症早期阶段即发生激活,并能释放多种炎症因子,在炎症的进程中发挥重要的作用。因此本文主要针对ARDS病程中外周血单核巨噬细胞内GGPPS1表达水平的变化及作用进行探索研究。通过本文的研究我们发现：1.在ARDS病人或内毒素(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤模型中外周血单核巨噬细胞内GGPPS1表达显著增高；2.体外实验中发现LPS通过TLR-4/p38/MAPK途径在鼠源巨噬细胞系(Raw264.7)和人源巨噬细胞系(THP-1)中引起GGPPS1表达增高。3.

0系统软件进行统计分析。 结果 在血浆BUN、Cr、DAO表达的比较方面，随着再灌注时间的延长,

IRI组的BUN、DAO及Cr值逐渐升高,3h达高峰,以后开始下降,12h仍高于Sham组(各时点均P<0.01)；SMB组与IRI组相比,前者各时点均明显降低(P<0.05)；而SMB组与IPO组比较，各指标在1h、3h、6h这三个时点均体现出SMB组在降低各指标方面优于IPO组，同时两组指标均有一定程度的降低；ELISA法检测肾组织中TNF-α、IL-1β含量也表现出与以上指标相同的趋势；肠缺血再灌注后肾组织p38MAPK的活化表达方面，选择指标变化最明显的3h作为研究对象，结果显示肠缺血再灌注3h后，肾组织中p38MAPKs活化明显增多，与假手术组比较差异有统计学意义（P<0.01），SMB组及IPO组较IRI组表达减少（P<0.05），SMB组与IPO组比较两组有统计学意义（P
目的 观察厄贝沙坦对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响，并探讨其与细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）通路的关系。 为什么 方法 健康雄性SD大鼠（体重250-300g）54只，随机分为5组：①假手术组（n=6）：在左冠状动脉前降支（LAD）下方穿线，但不结扎，观察150min；②缺血再灌注组（n=12）：结扎LAD30min，再灌注120min；③缺血预处理组（n=12）：缺血前阻断LAD5min，再灌注5min，重复3次，余同缺血再灌注组；④厄贝沙坦组（n=12）：厄贝沙坦30mg/kg·d灌胃1周后余操作同缺血再灌注组；⑤厄贝沙坦+PD-98059(PD)组（n=12）：PD-98059于再灌注前15min尾静脉注射，余同厄贝沙坦组。未给药组给予等量生理盐水灌胃。实验结束后用TTC染色测定心肌梗死面积；HE染色观察心肌组织形态结构；TUNEL法检测细胞凋亡指数；免疫组化法检测心肌组织Bcl-2、Bax蛋白表达；Western

BLU9931细胞系 blot法测定p-ERK的蛋白水平。 结果 1、厄贝沙坦对心肌梗死面积的影响 与缺血再灌注组比较，缺血预处理组和厄贝沙坦组心肌梗死面积明显降低（P<0.01），差异有显著统计学意义；与缺血再灌注组比较，缺血预处理组和厄贝沙坦组凋亡指数明显降低（P
目的 近年来大量研究表明，冠心病(coronary heart disease, CHD)的形成及发展过程中，内皮细胞的损伤起了推动作用，血管内皮祖细胞（Ensothelial ProgenitorCells,EPCs）是一类参与内皮损伤的修复过程的内皮细胞的前体细胞，脂联素（Adiponectin,APN）能否影响内皮祖细胞数量和功能，直接或间接提升血管内皮损伤的修复能力，促进内皮细胞数量和功能的恢复，进而延缓动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）病变的发生发展？本文通过酶联免疫吸附法（ELISA）、流式细胞术分析法测定冠心病患者外周血APN、CD34~+/CD309~+EPCs的水平，分析其在冠心病不同临床类型和不同病变程度中的变化趋势。同时选取正常人作为对照，观察冠心病上述两种指标在血管内皮损伤中的作用大小。通过给予口服降脂药物后随访2周，测定上述因子，探讨降脂药物除了调脂作用外的对APN、EPCs数量及功能恢复方面的作用。

方法 将来自2011年10月至2012年3月于我院心内科经皮冠状动脉造影术（CAG）确诊为冠心病的患者120例，其中急性冠脉综合症（ACS组）45例，稳定型心绞痛（SAP组）51例，并选择24例健康者为对照组，ACS组入院即刻、SAP组于入院次日清晨抽取空腹肘静脉血，送检血糖、血脂等基本指标；抽取新鲜的肝素钠抗凝外周空腹血标本各100μl，分别加入离心管中标记A、B管，取A管作阴性对照，B管加入10μl FTIC标记的CD34抗体及10μl Alexa Fluor标记的CD309（VEGFR-2）单克隆抗体，流式细胞术分析法检测CD34~+/CD309~+EPCs所占全血中的比例；上述抗凝血标本取2ml，即刻室温静置30min，3000r／min离心10-15min取血浆，置-80℃冰箱保存，采用ELISA法测定脂联素的水平；对所有冠心病患者给予瑞舒伐他汀钙（10mg1/晚）干预，2周后门诊随访，再次应用上述方法检测外周血APN和CD34~+/CD309~+EPCs所占全血中的比例，观察降脂药对APN、EPCs数量及功能改善方面的价值。 很少 结果 (1)研究对象的基线资料各个组别在年龄、性别、体重、吸烟、血脂、血压、肌酐、尿素氮、空腹血糖等危险因素方面均无明显的差别(P＞0.05)。 (2)应用瑞舒伐他汀钙干预前，ACS组外周血中脂联素、CD34~+/CD309~+EPCs水平均低于SAP组和对照组，差异显著，有统计学意义（P<0.01），SAP组与对照组其两种指标比较，亦有统计学意义(P0.

05);IPO组各指标较IR组显著下降(P
目的探讨IκB激酶(IκB kinase,IKK)催化亚基α(IKKα)在紫外线(ultraviolet radiation,UV)诱导的细胞反应中介导p53活化的信号转导机制。方法采用双荧光素酶报告基因分析系统检测在UVB诱导细胞反应中p53的转录激活活性。Western印迹检测IKKα、p53、p38K蛋白表达水平和诱导活化状态。结果 UVB在野生型小鼠成纤维细胞中能显著诱导p53发生磷酸化修饰反应;同时转录激活活性显著提高,IKKα基因敲除后,以上活化反应受到显著抑制,而恢复IKKα表达水平后这种活化反应得以恢复。同样条件下IKKα也能调节p38K的诱导活化,抑制p38K活性显著下调p53的诱导活化水平。结论 IKKα能通过调控p38K活化进而介导UVB诱导p53磷酸化修饰反应。
多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种中枢神经系统脱髓鞘性疾病,近年的研究已经证实遗传、环境、免疫等因素改变引起的免疫细胞比例失衡、机体的氧化应激等在MS发病中起到重要作用。髓鞘是有髓神经纤维外包绕的一层膜,它在中枢神经系统主要是由少突胶质细胞的片状突起包绕神经元轴突而形成的螺旋形多长膜性结构。病理染色及免疫组化染色可发现多发性硬化患者的病灶处大量的神经纤维脱髓鞘。
缺血预适应是机体对缺血性损伤的一种内源性保护机制。近来研究发现,p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)的激活参与了脑缺血预适应的发生发展过程。关于p38MAPK在脑缺血预适应中的作用,报道的结果并不一致。本文就近十余年来p38MAPK在脑缺血预适应中的作用进展进行综述。
The

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骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cell,BMSC)是一种具有多向分化潜能的成体干细胞,适量的力学刺激能促进BMSC向成骨细胞分化。近几年来,一些学者利用力学刺激作用于体外培养的BMSC,促进其向成骨细胞分化,并且对其诱导分化的机制进行了大量研究。尽管这一机制目前尚不十分清楚,但是已有的研究表明,多条信号通路参与了该力学信号传导。本文就国内外近几年来关于力学信号影响BMSC成骨分化的信号转导机制研究进展做一综述。
目的:探讨基因修饰过表达VCAM-1对小鼠间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响与作用机制。方法:将稳定过表达VCAM-1的MSC细胞(MIGR1-VCAM-1)和转入空载体的MSC细胞(MIGR1)分别向脂肪细胞诱导分化,以原位油红O染色和real-time 不 MLN2238临床试验 PCR检测成脂分化能力与相关关键转录因子C/EBPα和PPARγ的表达;Western

blot检测相关信号通路P38、ERK和JNK通路的活化。利用信号通路抑制剂处理MSC,观察其成脂分化能力的变化。结果:无论是自分化组还是诱导分化组,过表达VCAM-1的MIGR1-VCAM-1/MSC与对照组MIGR1/MSC相比,脂滴变大,脂肪细胞数量显著增加(P
为研究小型猪复合麻醉剂(XFM)对大鼠中枢神经系统p-p38蛋白表达的影响,将30只大鼠分为对照组(C组)和麻醉剂组(M组),M组又分为4个亚组:M1组(注射XFM后大鼠翻正反射消失即刻)、M2组(注射XFM后大鼠翻正反射消失后1h)、M3组(注射XFM后大鼠翻正反射恢复即刻)和M4组(注射XFM后大鼠翻正反射恢复后1h),各组大鼠到达预定的时间点后分别采取脑组织,应用RT-PCR法检测脑内p38 mRNA转录量,应用Western blot方法检测中枢神经系统中p-p38蛋白的表达量。大鼠注射XFM后,与对照组比较,试验组大鼠大脑皮层和丘脑p38mRNA转录量显著降低(P<0.05),在苏醒过程中有所恢复,但仍显著低于对照组(P<0.05);大脑皮层和丘脑内p-p38蛋白的相对表达量,在M1、M2组的时间点显著低于对照组(P<0.05或P<0.01);大鼠注射XFM后,与对照组比较,试验组大鼠小脑、海马、脑干内p38mRNA转录量显著升高(P<0.05),在苏醒过程中仍显著高于对照组(P<0.05);小脑、海马、脑干内p-p38蛋白的表达量,在M1组、M2组、M3组显著升高,与对照组相比差异显著(P<0.05或P0.

7)处于正常状态下不具有毒性,不影响其生长。但是当细胞接受脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)外来刺激发挥功能时,PEG@-AuNPs能够影响其功能分泌过多的一氧化氮(NO)而具有潜在危险性。通过实验进一步证明,PEG@-AuNPs能够使LPS诱导产生更多的诱导性NO合成酶(iNOS),而这种效应部分依赖于p38的磷酸化,不依赖于ERK的磷酸化。同时我们发现RAW264.7细胞主要通过内吞的方式摄入PEG@-AuNPs,而且在LPS刺激下RAW264.7细胞能够加快对金纳米颗粒的摄入,摄入量在24h内达到平衡。综上所述,本文通过实验验证了生物相容性很好纳米材料在细胞接受刺激状态下,能够影响细胞对刺激的应答进而产生潜在的危险。这些结果能够帮助更全面的评价纳米材料的安全性,从而为纳米材料的应用提供更坚实的基础。
目的

骨骼肌组织的生长环境极其复杂,不仅受到不同方式的力的作用,还受神经及各种细胞因子的影响。通过细胞及分子水平的相关研究,将有助于阐明力学因素调控成肌细胞分化的重要信号通路,并有望从不同信号通路之间的交叉对话(Cross-Talk)角度揭示力学信号通路的激活机制。本研究的目的即是探讨青春期大鼠翼外肌组织在受到张应力刺激时其生长(改建)在细胞水平上的体现,从而为功能矫形治疗和矫治效果的保持提供新思路和实验依据,具有深远的科学意义和潜在的应用前景。这是目前国际上尚未得出确切结论的新领域。此外,针对力学环境下骨骼肌成肌细胞机能表达的深入了解和研究,可以为力学刺激治疗肌肉萎缩症提供理论依据,亦能为骨骼肌损伤后治疗及康复提供科学建议。 也许 方法 本实验选用20只4周龄,雄性SD大鼠随机分为8组。其中实验组大鼠经戊巴比妥麻醉后佩戴可摘式上颌斜面导板,对照组未佩用。依据时间不同又分为四组：1d,7d,14d,21d。1.采用RT-PCR技术分析前伸青春期大鼠下颌后翼外肌组织中肌分化相关基因MyoD、myogenin mRNA的表达变化。2.通过western-blotting检测SD大鼠翼外肌组织核蛋白中p65的表达情况。

免疫荧光染色法分别检测佩戴矫治器1h和24h后,核因子κB (NF-κB, nuclear factor kappaB)的主要亚基p65是否转运到细胞核内从而确认NF-κB信号转导通路是否被激活。 结果 1.未施加功能矫形力的大鼠翼外肌组织中MyoD表达伴随其生长发育出现递减趋势,而myogenin在14d组出现表达上调。实验组大鼠,在施加功能矫形力后,MyoD在7d组的表达明显上调。同时,力学刺激后实验组动物翼外肌中myogenin的表达与相同应力作用下的对照组大鼠比较出现上调。 以及 2.免疫荧光染色检测结果显示在施加功能矫形力组的大鼠翼外肌组织内其NF-κB p65的被激活状况较未施加功能矫形力组明显升高。提示NF-κB的主要亚基p65转移到细胞核内,据此判断NF-κB已被激活。 3. Western印迹显示在实验组大鼠的翼外肌组织核蛋白中p65随张应力作用时间延长出现表达下调,而在对照组大鼠的翼外肌组织内p65的表达无明显变化。 结论 1.功能矫形力作用于翼外肌组织可以诱导肌发生相关基因MyoD和myogenin的表达上调从而诱导成肌细胞的分化。 2.翼外肌组织在应力刺激作用下可诱导其成肌细胞中NF-κB的核转运从而调控靶基因的转录过程。 3. NF-κB信号转导通路p65的活化可能参与抑制成肌细胞的分化过程。
目的:越来越多的研究表明,骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,MSCs)在体内有强大的迁移力和肿瘤趋向性。但转染外源基因的骨髓间充质干细胞在体内迁移力和肿瘤趋向性鲜有报道。胞嘧啶脱氨酶(Cytosine

一般 deamimase,CD)基因是近年被广泛关注的肿瘤治疗基因。本实验构建SD大鼠颅内C6胶质瘤动物模型,通过荧光显微镜观察转导胞嘧啶脱氨酶基因并携带有增强型绿色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞(MSCs-CD/eGFP)向胶质瘤迁移、分布的情况,探讨通过荷瘤同侧颈内动脉、肿瘤对侧脑内及肿瘤原位三种不同接种途径MSCs-CD/eGFP细胞对胶质瘤趋向性的影响,并探索一种理想的适合临床应用接种途径。 方法:使用颅内立体定向接种法建立SD大鼠颅内C6胶质瘤模型。术前12小时大鼠禁食禁水,用10 %水合氯醛(3 ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠后,头部用立体定位仪固定,剪去头顶毛发,碘酒、酒精消毒后铺洞巾,沿正中矢状线纵向切开头皮约1.5 cm ,分离暴露顶骨(头顶双侧眼裂连线后大约1.5cm处横向切开头皮,暴露前囟颅骨标志),按大囟中点前1.0 mm ,矢状缝右旁开3~3.5 mm ,大致定位,颅骨钻钻孔,孔径2.0 mm ,深达硬脑膜。微量注射器进针深度为硬膜下6.0 mm,后退回针1.0mm。按每只鼠1×106细胞悬液15μl于10 min内注入靶区,留针5 min ,使细胞充分沉积。缓慢拔针后用骨蜡封闭骨孔,用生理盐水冲洗术野,1号丝线缝合头皮切口。建模后的第6天,从24只大鼠中随机抽取8只,用10 %水合氯醛(3 ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠后,分别从矢状位、冠状位和水平位行MRI扫描,平扫完毕后大鼠经尾静脉注射0.

建立氯胺酮相关性大鼠模型及收集尿液、血液。取2个月龄健康、体重为180-200g的雄性Sprague Dawley(SD)大鼠20只,随机分为4组：空白对照(CON),生理盐水组(NS),低剂量组(LK)(10mg/Kg),高剂量组(HK)(50mg／kg),每组5只,饲养时间为16周。每日上午9时各实验组分别予腹腔注射0.9%生理盐水,10mg/Kg及50mg/Kg氯胺酮。生理盐水组大鼠同时注射等量体积生理盐水,空白对照组不予以任何处理。每周测量一次大鼠体重以调整注射剂量。大鼠单独饲养在自制的代谢笼中,利用自制的尿液染色试纸记录大鼠排尿频率。于第1,4,7,10,13,16周处死前在给大鼠注射药物后,收集大鼠24小时尿液。收集的尿液行尿常规检查。第16周处死时取深静脉血血清行肝、肾功能检查。 2.处死后,收集各组大鼠的膀胱和肾脏组织。膀胱用于HE染色、马松染色、免疫组化,观察膀胱粘膜层、粘膜下层及平滑肌层组织学形态,用以确定KC大鼠模型的建立。

selleck怎么样 3.大鼠肾脏洗净后,部分行HE染色,马松染色,TUNEL凋亡检测,用于分析大鼠肾脏形态学上的改变及细胞凋亡情况。液氮冻存部分用于后续的蛋白质组学研究,验证长期滥用氯胺酮可能导致肾脏损害及发生间质纤维化。 结果 1.大鼠行为学改变及体重变化 NS组大鼠在注射生理盐水后,饮水、进食、行为活动等和正常大鼠无明显区别；LK组(10mg/kg)大鼠在注射氯胺酮之后,10分钟内相比CON组和NS组出现轻微兴奋躁动和活动增加的状态,之后约20分钟恢复至正常；HK组(50mg/kg)大鼠在注射氯胺酮后,通常约1分钟即出现全身僵硬症状,疲倦嗜睡,随后10分钟开始出现共济失调,头尾不停摇摆晃动,左右跌倒,接着保持平静不动约1小时直到复原正常活动。我们观察到约12周左右开始HK组和LK组大鼠排尿的频数较NS组和CON组均有明显增多的趋势。大鼠体重变化趋势分析,从第2-6周开始,LK组的平均体重值就随着时间推移较HK组和NS组高；第6周到第16周,NS组和LK组大鼠体重总体趋势均比HK组高.(P0.05).第16周时,NS组和HK组大鼠尿比重的比较,NS组尿比重均值(1.005±0.0038)；HK组尿比重均值(1.006±0.0035)；两组比较无显著性差异(t=-0.346,P=0.738>0.05) Selleckchem Palbociclib 3.大鼠肝肾功能指标结果。

Scr、BUN、TP、ALB、G、ALT、ALP在各组之间比较并无显著性差别。只有UA在HK组和LK均较NS组降低,HK组降低更多。AST在HK和LK组较NS有所降低,但是HK和LK之间无显著差别。虽然各组Scr、BUN均数无差别,但是HK和LK组仍有7只(7/10)大鼠的Scr高于NS组的均值,两组有7只(7/10)大鼠的BUN高于NS组的均值,提示氯胺酮对大鼠肾脏滤过功能有损害作用。氯胺酮处理组几乎所有大鼠(9/10)的UA值都降低,提示经过氯胺酮长期作用的大鼠,可能发生贫血。正常ALT/AST≤1,HK组1只(1/5)大鼠出现ALT/AST≥1,提示滥用高剂量氯胺酮可导致肝炎的发生。 4.大鼠膀胱HE染色结果 在CON组和NS组中,大鼠膀胱组织在结构形态上未见明显的病理改变。实验组(HK、LK组)大鼠膀胱粘膜上皮层表现为膀胱黏膜上皮层增厚,黏膜下层出现明显水肿,可见大量炎症细胞浸润,部分上皮细胞层全层脱落。HK组的膀胱病理改变较LK组更加明显。各组间膀胱平滑肌未见明显病理学改变。 5.大鼠膀胱马松染色结果 CON、NS组大鼠膀胱组织未见明显的病理学改变。相比之下,长期注射氯胺酮的HK组及LK组大鼠膀胱黏膜下层和肌层之间均可见纤维组织含量增加和胶原沉积,染色深染,提示膀胱粘膜下层发生纤维化增加。半定量分析发现：CON组平均胶原面积比是(0.31±0.069)；NS组平均胶原面积比是(0.317±±0.073)；LK组平均胶原面积比是(0.639±0.102)；HK组平均胶原面积比是(0.737±0.066).LK组平均胶原面积比,较NS组显著增多(平均差±标准尿频率。于第1,4,7,10,13,16周处死前在给大鼠注射药物后,收集大鼠24小时尿液。收集的尿液行尿常规检查。第16周处死时取深静脉血血清行肝、肾功能检查。

2.处死后,收集各组大鼠的膀胱和肾脏组织。膀胱用于HE染色、马松染色、免疫组化,观察膀胱粘膜层、粘膜下层及平滑肌层组织学形态,用以确定KC大鼠模型的建立。 那个 3.大鼠肾脏洗净后,部分行HE染色,马松染色,TUNEL凋亡检测,用于分析大鼠肾脏形态学上的改变及细胞凋亡情况。液氮冻存部分用于后续的蛋白质组学研究,验证长期滥用氯胺酮可能导致肾脏损害及发生间质纤维化。 结果 1.大鼠行为学改变及体重变化 NS组大鼠在注射生理盐水后,饮水、进食、行为活动等和正常大鼠无明显区别；LK组(10mg/kg)大鼠在注射氯胺酮之后,10分钟内相比CON组和NS组出现轻微兴奋躁动和活动增加的状态,之后约20分钟恢复至正常；HK组(50mg/kg)大鼠在注射氯胺酮后,通常约1分钟即出现全身僵硬症状,疲倦嗜睡,随后10分钟开始出现共济失调,头尾不停摇摆晃动,左右跌倒,接着保持平静不动约1小时直到复原正常活动。我们观察到约12周左右开始HK组和LK组大鼠排尿的频数较NS组和CON组均有明显增多的趋势。大鼠体重变化趋势分析,从第2-6周开始,LK组的平均体重值就随着时间推移较HK组和NS组高；第6周到第16周,NS组和LK组大鼠体重总体趋势均比HK组高.(P0.05).第16周时,NS组和HK组大鼠尿比重的比较,NS组尿比重均值(1.005±0.0038)；HK组尿比重均值(1.006±0.0035)；两组比较无显著性差异(t=-0.346,P=0.738>0.05) 3.大鼠肝肾功能指标结果。 Scr、BUN、TP、ALB、G、ALT、ALP在各组之间比较并无显著性差别。只有UA在HK组和LK均较NS组降低,HK组降低更多。AST在HK和LK组较NS有所降低,但是HK和LK之间无显著差别。虽然各组Scr、BUN均数无差别,但是HK和LK组仍有7只(7/10)大鼠的Scr高于NS组的均值,两组有7只(7/10)大鼠的BUN高于NS组的均值,提示氯胺酮对大鼠肾脏滤过功能有损害作用。氯胺酮处理组几乎所有大鼠(9/10)的UA值都降低,提示经过氯胺酮长期作用的大鼠,可能发生贫血。正常ALT/AST≤1, HK组1只(1/5)大鼠出现ALT/AST≥1,提示滥用高剂量氯胺酮可导致肝炎的发生。 4.大鼠膀胱HE染色结果 在CON组和NS组中,大鼠膀胱组织在结构形态上未见明显的病理改变。实验组(HK、LK组)大鼠膀胱粘膜上皮层表现为膀胱黏膜上皮层增厚,黏膜下层出现明显水肿,可见大量炎症细胞浸润,部分上皮细胞层全层脱落。HK组的膀胱病理改变较LK组更加明显。各组间膀胱平滑肌未见明显病理学改变。 5.

632456vs.3.425000±0.636396；P<0.05),高压氧预处理组大鼠缺血脑组织IL-1β、TNF-α的含量明显低于模型组(P<0.05)。结论：高压氧预处理可能通过抑制NF-kB的活化使下游炎症介质靶基因表达下降进而抑制大鼠脑缺血后炎症反应,发挥神经保护作用。
衰老是正常细胞经过有限次数分裂,细胞形态和生理代谢发生显著变化的现象。衰老的人成纤维细胞核中有多个呈点状聚集的异染色质结构,这样的现象叫做衰老相关异染色质凝集(SAHF),SAHF的发现拓宽了人们对细胞衰老的认识,是研究细胞衰老的一个新的生物学标志。肿瘤发生过程中,细胞逃逸衰老和凋亡,获得无限增殖能力。通过诱导肿瘤细胞重新获得衰老特征是抑制肿瘤无限增殖的重要途径,对于我们进一步认识细胞衰老的分子机制有重要意义。我们的前期工作发现,化疗药物阿霉素(Dox)和喜树碱(SN-38)能够诱导肿瘤细胞衰老及形成SAHF,RB信号通路在药物诱导肿瘤细胞SAHF形成过程中是必须的。p16蛋白参与RB信号通路的调节,然而p16缺失的MDA-MB-231细胞也能形成SAHF,因此,我们推测有其他信号可以触发RB信号通路参与SAHF的形成。p38MAPK信号通路是细胞内众多信号通路的中转站,在肿瘤的发生、转移、凋亡中有重要作用。有研究表明,p38MAPK信号通路在细胞衰老中发挥作用。但是,关于p38MAPK信号通路在化疗药物诱导肿瘤细胞SAHF形成中是否发挥作用还不清楚。我们的研究发现,p38MAPK信号通路参与化疗药物诱导肿瘤细胞SAHF的形成。有报道,HBP1是p38MAPK信号通路下游与衰老相关的重要蛋白质。通过实验我们发现,HBP1在药物诱导的肿瘤细胞衰老中表达上调,下调HBP1的表达或抑制p38MAPK信号通路,SAHF形成的比例明显降低。进一步研究证实,HBP1通过与RB结合影响RB对E2F靶基因的调控,介导化疗药物诱导的肿瘤细胞衰老。本研究对于进一步了解化疗药物抗肿瘤的作用及对细胞衰老相关SAHF形成的机制具有重要的理论意义。
目的

C59数据表 用高糖刺激乳鼠心肌细胞模拟糖尿病诱导的心肌细胞损伤，给予吡格列酮处理观察高糖对心肌细胞炎症因子的影响，以p38MAPK通路的激化情况和NF-κB活性的影响。 方法 1.乳鼠心肌细胞的分离与培养以及实验分组 乳鼠心肌细胞原代分离培养48h后首度换液，再培养24h并进行无血清化6-8h后分成四组：1）正常对照组：使用5.5mmol/L的葡萄糖DMEM培养基作为对照组进行培养；2）高糖组：使用30mmol/L的葡萄糖DMEM培养基作为高糖组进行培养；3）低剂量组：使用30mmol/L的葡萄糖的DMEM培养基加入终浓度10μmol/L的吡格列酮为低剂量组进行培养；4）高剂量组：使30mmol/L的葡萄糖的DMEM培养基加入终浓度20μmol/L的吡格列酮为高剂量组进行培养，各组细胞均继续培养48h后收集细胞及培养基上清进行指标测定。 A-1210477分子量 2.指标检测 LDH试剂盒测定培养基中LDH的含量，反应心肌细胞受损程度，ELISA法测定培养基上清中的炎症因子IL-6、TNF-α的含量变化，反应心肌细胞中炎症因子产生的情况，用细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒提取胞核蛋白，Western

Blot法测定细胞胞核转录因子NF-κB亚基p65的蛋白表达情况，另将收集的细胞提取总蛋白同样用Western Blot法检测p-p38MAPK的蛋白表达情况。 结果 1.乳酸脱氢酶（LDH）含量的测定 结果显示，高糖组细胞培养液中LDH的含量显著上升（p<0.01），说明高糖对心肌细胞产生了损伤作用。细胞给予吡格列酮处理后培养液中LDH的含量显著的下降（p<0.05；p<0.01），提示高糖可引起心肌细胞炎症性损伤；而给予吡格列酮处理后（低剂量组与高剂量组），心肌细胞的炎症因子IL-6含量明显下降（p<0.05），TNF-α的含量也显著减少（p<0.01），而经吡格列酮处理后（低剂量组与高剂量组）p-p38MAPK蛋白表达升高明显得以改善（p<0.05；p
目的：采用自发性糖尿病肾病(Diabetic 所以 kidney disease, DKD) KKAy小鼠,对照药物为厄贝沙坦,观察糖肾平对DKD KKAy小鼠药效学和氧化应激水平的影响,并采用免疫组化、原位杂交和Western blotting方法观察糖肾平对DKD KKAy小鼠肾组织中Smad6、转化生长因子-β1 (Transforming growth factor-β1, TGF-β1)、BMP7、α-SMA、E-Cadherin蛋白及mRN A表达的影响。方法：1.糖肾平对DKD KKAy小鼠药效学的影响10只雌性C57BL/6J小鼠作为正常对照组。雌性10周龄KKAy小鼠60只,KK鼠配合饲料诱导10周后,血糖≥16.7mmol/L 24h尿蛋白≥0.4mg为糖尿病肾病动物模型。模型小鼠按血糖和体质量分层随机,分为模型组、厄贝沙坦组与糖肾平小、中、大剂量组,并进行相应药物的灌胃治疗。观察小鼠一般情况,检测体质量、24h尿蛋白定量。实验第26周,眼球取血,全血测血糖,分离血清,检测甘油三酯(Triglyeride, TG)、尿素氮(Blood urea nitrogen, BUN)、肌酐(Serum creatinine,

Scr)含量；称取小鼠肾重,计算肾重体重比；肾组织石蜡切片行HE、Mallory染色观察肾组织病理形态变化。2.比色法生化仪检测血清中丙二醛(Malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)和一氧化氮(Nitric oxide, NO)水平。3.免疫组化：检测小鼠肾组织中TGF-β1、Smad6、BMP7、α-SMA、E-Cadherin蛋白表达。4.原位杂交：检测小鼠肾组织中TGF-β1、Smad6、BMP7、α-SMA、E-Cadherin mRNA表达。5. Western blotting:检测小鼠肾组织中TGF-β1、Smad6、BMP7、α-SMA、E-Cadherin蛋白表达。6.实验数据用SPSS20.0软件进行统计学处理。结果：1.糖肾平对DKD KKAy小鼠药效学的影响与模型组比较,糖肾平小、中、大剂量组小鼠一般状态改善、体质量均有不同程度减轻,治疗16周后糖肾平中、大剂量组小鼠体质量明显减轻(P<0.01),肾质量与体质量比值显著降低(P<0.01),24h尿蛋白定量显著减少(P<0.01),血清BUN含量显著降低(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01)；且糖肾平大剂量组降低最明显。正常对照组肾小管上皮细胞胞浆Smad6、BMP7、E-Cadherin蛋白强阳性表达,明显高于模型组(P<0.01)；与模型组比较,各治疗组肾小管上皮细胞胞浆Smad6、BMP7蛋白表达明显增多,有显著统计学差异(P<0.01),糖肾平大剂量组肾小管上皮细胞胞浆E-Cadherin蛋白表达明显增多,有显著统计学差异(P<0.01),糖肾平小、中剂量组肾小管上皮细胞胞浆E-Cadherin蛋白表达增加,有统计学差异(P<0.

33±0.07)%及(51.67±0.04)%。三组细胞相比,F=3.055,P=0.12,无明显统计学差异。显微镜下计数每个克隆的细胞数,未转染、转染空质粒及转染IL-24真核表达载体的SKOV3细胞,每个克隆的细胞数分别为303±15.67、295±13.54及99±11.97,三组细胞相比,F=699.868,P=0.000,有统计学意义。经SNK-q法两两分析,转染空载体组与未转染组细胞每个克隆细胞数无显著统计学差异(P=0.326),两者与IL-24转染组细胞之间每个克隆细胞数有显著性差异(P=0.000)。表明IL-24可抑制SKOV3细胞的增殖。

7、倒置显微镜下观察细胞形态学改变,可见死亡细胞明显增多。Hoechest 33258荧光染色观察IL-24转染后细胞核的变化,可见未转染组及转染空载体组细胞发出较微弱的蓝色荧光,细胞核大小基本一致,为圆形或椭圆形,被染成均匀的淡蓝色,无明显的形态学改变,极少见到凋亡细胞和凋亡小体。IL-24转染组可见较多凋亡细胞,发出较强的蓝色荧光,细胞浆密度增大、颜色变深,细胞核体积变小,形态不规则,大小不一,见呈碎块状致密浓染,形状不规则的染色质,核膜呈境界分明的块状或新月形小体,有凋亡小体形成及核裂解。 8、流式细胞仪检测IL-24转染后细胞周期变化,未转染、转染空载体及转染IL-24真核表达载体后的SKOV3细胞,G2/M期平均分别为4.29%、4.79%和12.88%。转染IL-24后的SKOV3细胞与未转染及转染空载体的细胞相比,G2/M期细胞比例明显增加,有统计学意义(F=309.805,P=0.000)。两两分析表明,未转染、空载体转染与IL-24真核表达载体转染的SKOV3细胞之间,G2/M期的细胞数有显著差异(P=0.000)。未转染与转染空质粒的SKOV3细胞相比,G2/M期细胞比例无明显变化,无统计学意义(P=0.233)。 并且 9、流式细胞仪检测IL-24转染后细胞凋亡率变化,未转染、转染空载体及转染IL-24真核表达载体后的SKOV3细胞,细胞凋亡率平均分别为3.33%,3.60%,14.51%,差异具有统计学意义(F=1205.073,P=0.000)。两两分析表明,未转染、空载体转染与IL-24转染的SKOV3细胞之间,细胞凋亡率有显著性差异(P=0.000)。未转染与空载体转染组之间,细胞凋亡率无显著性差异(P=0.318)。

10、用RT-PCR法检测SKOV3细胞转染IL-24、转染空载体与未转染组细胞中p53 mRNA表达的变化,实验组和对照组均在600~+bp左右处扩增出p53 mRNA特异性条带,在550bp左右处扩增出β-actinmRNA特异性条带,SKOV3未转染组、空载体转染组和IL-24转染组p53 mRNA相对表达量分别为0.43±0.005、0.44±0.004和0.44±0.005。实验组及对照组上皮性卵巢癌SKOV3细胞中p53 确认细节 mRNA相对表达水平无显著性差异(F=3.000,P=0.125)。用RT-PCR法检测SKOV3细胞转染IL-24、转染空载体与未转染细胞中caspase-3 mRNA表达的变化,实验组和对照组均在260bp左右处扩增出caspase-3mRNA特异性条带,在550bp左右处扩增出β-actin mRNA特异性条带,SKOV3未转染组、空载体转染组和IL-24转染组caspase-3 mRNA相对表达量分别为0.26±0.005、0.20±0.004和0.64±0.003。实验组及对照组上皮性卵巢癌SKOV3细胞中caspase-3mRNA相对表达水平有显著性差异(F=1741.000,P=0.000)。 结论: 1.利用电穿孔转染可以将IL-24基因高效导入上皮性卵巢癌SKOV3细胞株; 2.选择培养后的IL-24转染组SKOV3细胞,能稳定表达IL-24mRNA和蛋白,即建立了IL-24稳定表达的上皮性卵巢癌细胞模型; 3.IL-24基因转染后对上皮性卵巢癌SKOV3细胞株的体外增殖有抑制作用; 4.IL-24基因能导致上皮性卵巢癌SKOV3细胞株G2/M期阻滞。 5.IL-24基因表达增高对上皮性卵巢癌SKOV3细胞株凋亡有促进作用。 6.IL-24促凋亡的作用与p53无关,与caspase-3有关。 目的:本部分拟观察将pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24真核表达质粒,稳定转染至上皮性卵巢癌SKOV3细胞表达后,是否能提高肿瘤细胞对放疗的敏感性。

方法:稳定转染IL-24并筛选出阳性克隆之后,采用进口西门子直线加速器,单次照射上皮性卵巢癌SKOV3细胞。MTT比色法观察细胞增殖抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果: 1、MTT比色法测SKOV3细胞各组的吸光度值。经析因设计的方差分析,经放射治疗后,IL-24基因的导入可使人上皮性卵巢癌细胞系SKOV3的生长受到明显抑制(P=0.000)。两两分析表明,转染pcDNA3.1-myc-his(—)B-IL-24真核表达载体的SKOV3细胞,细胞增殖能力与其它两组相比,差异具有统计学意义(P=0.000)。未转染和转染pcDNA3.1-myc-his(—)B空载体的SKOV3细胞相比,差异无明显统计学意义(P=0.184)。 寻找更多 2、未转染、转染空载体及转染IL-24后的SKOV3细胞,经6Gy放射线处理24小时后,流式细胞仪检测细胞凋亡率平均分别为6.90%,8.13%,20.12%。三组SKOV3细胞凋亡率的差异具有统计学意义(F=350.499,P=0.000),各组之间两两比较发现,未转染组、空载体转染组与IL-24转染组SKOV3细胞之间,凋亡率有显著性差异(P=0.000)。而未转染组与空载体转染组之间,凋亡率无显著性差异(P=0.053)。 结论: 1.外源IL-24基因的过表达,可提高上皮性卵巢癌SKOV3细胞株对射线的辐射敏感性。 目的:本部分拟建立上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤模型,用pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24真核表达质粒对上皮性卵巢癌荷瘤裸鼠进行治疗研究,观察IL-24是否能抑制上皮性卵巢癌荷瘤裸鼠癌细胞的生长。 方法:建立人上皮性卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤模型,瘤体直接注射pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24后,观察肿瘤体积、重量和抑瘤率。 结果: 1、pcDNA3.1-myc-his(—)B-IL-24真核质粒直接瘤体注射治疗上皮性卵巢癌荷瘤Balb/c nu/nu裸鼠后,肿瘤体积增长较慢,与未转染组及空质粒转染组相比,有显著差异(P=0.000)。 2、IL-24治疗后抑瘤率为63.21%。pcDNA3.1-myc-his(—)B-IL-24真核质粒直接瘤体注射治疗上皮性卵巢癌荷瘤Balb/c nu/nu裸鼠后,肿瘤重量增长较慢,与未转染组及空质粒转染组相比有显著差异(P=0.000)。 结论: 1.IL-24可抑制上皮性卵巢癌SKOV3细胞株荷瘤裸鼠的肿瘤细胞生长。 2.

05,P﹤0.05);实验组细胞的增殖能力显著降低,与阴性对照组和空白对照组比较差异有统计学意义(P﹤0.05);Transwell体外侵袭实验提示实验组的侵袭迁移个数为(135±11.79),显著低于空白对照组(186±14.98)及阴性对照组(178±12.53)(P﹤0.05);实验组细胞凋亡率(17.87±1.60)%高于阴性对照组(4.93±2.49)%及空白对照组(4.37±1.60)%,差异有统计学意义(P﹤0.05);实验组G0/G1期细胞(48.57±4.9 什么 1)%较阴性对照组(38.13±3.23)%和空白对照组(37.07±2.32)%增多(P﹤0.05),差异有统计学意义。结论:c-Met

siRNA可使食管鳞癌细胞的凋亡率增加,使其周期被阻滞在G0/G1期,可降低其增殖、迁移及侵袭的能力。
腹泻作为恶性肿瘤靶向治疗中常见的不良反应,具有较高的发病率,已成为影响临床用药的制约因素,并且对患者的生活工作造成不便。目前相关研究开展较少,临床治疗缺乏指导与规范。临床常用止泻药物具有较好的止泻效用,但存在作用时效短、不良反应多等问题,临床长期应用不便。中医治疗腹泻从人体气血阴阳着眼,通过整体功能的改善达到止泻目的,改善症状的同时有助于患者身体机能的恢复。为考察中医药在靶向治疗相关性腹泻治疗中的具体疗效,特进行本次临床试验研究。目的：观察中药腹泻方对非小细胞肺癌(NSCLC)患者靶向治疗引起的腹泻的治疗效果。方法：本研究为前瞻性随机对照研究。对70例服用靶向药物出现腹泻的NSCLC患者进行随机分组,试验组给与中药腹泻方治疗；对照组给与易蒙停治疗,在2疗程治疗(1周/疗)及2周的随访中,观察两种疗法对腹泻缓解率、腹泻相关症状、腹泻复发情况及患者KPS评分的改善作用,并对药物安全性进行考察。结果：研究共纳入患者70例,实际完成病例66例,试验组33例,对照组33例。入组患者的腹泻程度评级集中在NCI CTC AE分级的1-2级,程度较轻。患者的中医证候以气虚证和阴虚证所占的比例较高,其次为痰湿证和热毒证,血瘀证较少。主要疗效(腹泻缓解率)：第7天时对照组与试验组缓解率分别为60.61%和63.64%,二组差异无统计学意义(P=0.387)：第14天时对照组与试验组腹泻缓解率分别达到76.67%和81.82%,此时两组差异具有统计学意义(P=0.029)。次要疗效：(1)腹泻相关症状积分：2疗程治疗后,两组积分均较前下降,且试验组积分低于对照组,差异具有统计学意义(P=0.023),说明中药对靶向治疗相关性腹泻相关症状的缓解更有优势； (2)各项症状改善情况：对腹泻相关症状逐项分析,2个疗程后中药组在脘腹痞满和食欲不振两个方面的缓解优于易蒙停组,且优势具有统计学差异(P均0.05)； (4)KPS评分变化情况：治疗后两组相比未见明显差异(P均>0.05)。安全性评价：试验组未见明显不良反应,对照组中4例出现中度不良事件,停止试验用药后自行缓解。结论：中医药对NSCLC靶向治疗引起的轻、中度腹泻具有改善作用,在腹泻缓解情况、相关症状积分及脘腹痞满、食欲不振的改善优于易蒙停,且无明显不良反应。
科技竞争力是大型制药企业作为医药市场创新、新产品推广应用主体的必备能力之一,同时也是彰显技术密集型企业特性、应对竞争环境下机遇与挑战的重要能力。因此,研究大型制药企业科技竞争力具有一定的现实意义。指标体系作为科技竞争力研究的常用手段之一,能较为深入、全面地了解大型制药企业科技活动开展、科技资源配置情况,进而有效揭示其科技竞争力水平。

已经 论文运用文献调研法了解企业科技竞争力研究现状和大型制药企业特点,结合现有指标回顾和存在的问题分析,总结归纳出五大影响因素。在综合分析基础上,制定了相应的指标选择原则和设计思路,提出指标体系框架。通过专家问卷调查法进行指标修改完善,运用层次分析法确定各指标权重排序。最终的指标体系由4项一级指标和14项二级指标组成,其中一级指标包括科技投入要素、科技产出要素、科技管理要素和科技支撑要素,能较全面反映出大型制药企业整体科技活动情况,二级指标包括研发人员(团队)情况、研发资金投入、上市新药情况、专利情况、科技创新战略等,从不同角度相应地影响科技竞争力水平。通过两家企业预实验分析,验证指标体系具备一定的可操作性和可重复性,有一定应用价值。 Z VAD FMK 深入分析指标排序和验证结果后发现：研发团队是提升科技竞争力的源动力,大型制药企业本身已具备人员数量上的优势,应更注重合理有效的团队管理以增强科技创新竞争力；科研条件是应对研发资金“量”“效”竞争焦点转变的前提,随着对成本效益的关注,大型制药企业除了在研发资金数量上具备竞争力之外,还应配备仪器设备、研发基地、企业信息系统等高效科研条件以提高研发资金的利用率；科技创新策略是形成差异化竞争优势的资本,大型制药企业在持有一定数量新药和专利的基础上,需要研发、专利、市场应对等策略的有效支持,制定符合本企业特点和优势的竞争策略,从而有利于科技竞争实力最大化；战略性技术储备是占据科技竞争制高点的基石,大型制药企业在认清未来技术市场竞争的严峻形势后,应依靠技术竞争情报研究、科技创新战略、品牌及在研产品技术开发转化等手段来充分储备竞争力量。
背景与目的

肺癌是全世界癌症相关死亡的最常见病因,其中腺癌作为肺癌中最常见的组织学亚型近年来发生率逐渐增加。在过去的几年中,肺癌研究的主要进展大多都集中在肺腺癌这一亚型,尤其是EGFR相关的分子靶向治疗。肺腺癌组织异质性很大,亚型分类复杂多样,目前主要有2004年WHO分类标准和2011年IASLC/ATS/ERS分类标准。国外相关研究发现腺癌组织学亚型与EGFR突变状态关系密切,国内相关研究很少。本研究主要探讨中国肺腺癌患者组织学亚型与EGFR突变状态之间的关系,以及肺腺癌特异性标志物甲状腺转录因子-1(TTF-1)及表面蛋白A(SPA)的表达水平与EGFR突变的关系。 方法 收集郑州大学附属肿瘤医院2008年1月至2011年11月确诊的肺腺癌患者235例(包括71例活检标本及164例手术标本)。入组患者均有EGFR突变检测结果。其中206例患者的HE病理切片经病理学家重新进行亚型鉴定,分型标准参考2004年WHO分类系统和2011年IASLC/ATS/ERS分类方法。同时应用免疫组化方法检测122例术后混合性腺癌标本中TTF-1及SPA表达水平。采用SPSS17.0统计软件分析肺腺癌组织学亚型、TTF-1及SPA表达水平与EGFR突变之间关系。 结果 1.入组肺腺癌患者EGFR突变率为43.