Thomas停跳液后缺血40min,复灌K-H液60min；IPO组：灌注4℃ST.Thomas停跳液后缺血40min,于复灌开始前予以复灌K-H液10s、停灌10s的循环6次,续灌K-H液58min; 5-HD+IPO组：灌注4℃ST.Thomas停跳液后缺血40min,行5-羟葵酸灌注5min,继以K-H液复灌10s、停灌10s循环6次,续灌K-H液53min。观察并记录各组平衡末和续灌末心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVDEP)、以及最大dp/dt等心功能的变化。 Apoptosis抑制剂 2.以差速离心法及Nycodenz密度梯度离心法提取、纯化大鼠心肌线粒体,并以Western blot法验证其纯度。 3.按照2中方法获取纯化的心肌线粒体；提取各组线粒体蛋白并行纯化后定量；采用Cydye染料对各组荧光标记后行2D-DIGE分离。采用DeCyder V6.0软件分析对比组差异表达蛋白点并将差异蛋白质斑点进行全自动斑点处理工作站处理；最后进行MALDI-TOF-MS鉴定和数据检索。 结果： 1.平衡末各组间心功能无明显差异；续灌末Nor,

IPO组心功能显著优于Con组,5-HD+IPO组与Con组比较心功能无明显差异。 2.采用Nycodenz不连续密度梯度离心法提纯了大鼠心肌线粒体,并以Western blot法证实了所获线粒体纯度较高。 3.对各组进行2D-DIGE,得到聚焦良好、相似性高的图谱,在各组胶上平均检测出752±49个蛋白斑点；各组分析鉴定后得到28个较好的差异蛋白点图谱,本研究重点关注其中差异1.5倍以上的5个蛋白。 4.(1)Nor和Con组比较鉴定出：spot554 (NDUFA10, NADH dehydrogenase [ubiquinone] 1 alpha subcomplex subunit 10, mitochondrial; NADH脱氢酶亚基)表达水平降低3.84倍；spot555 (rCG55630,isoform CRA,推测为NADH脱氢酶亚基)表达水平降低3.76倍。 (2)IPO和Con组比较鉴定出：spot554(NDUFA10)、spot254(SDHA, Succinate dehydrogenase [ubiquinone]

flavoprotein subunit, mitochondrial;琥珀酸脱氢酶—黄素蛋白)两种蛋白表达水平显著分别降低3.33倍、1.68倍；spot645 (CoQ9,合成CoQ的必须酶)表达水平降低3.43倍、spot648 (CoQ9)表达水平升高2.42倍。 (3) 5-HD+IPO和IPO组比较鉴定出：spot254 (SDHA)表达水平升高1.65倍。 结论： 1.缺血后处理能改善大鼠心脏功能；而5-羟葵酸拮抗缺血后处理能抑制缺血后处理改善心功能的作用。 2. Nycodenz不连续密度梯度离心法可获得纯度较高心肌线粒体。 3.(1)心肌缺血再灌注损伤影响NDUFA10的活性。 (2)缺血后处理可维持线粒体NADH呼吸链稳定。 PLX4032半抑制浓度 (3) SDHA和线粒体敏感性K+通道(mitoKATP)存在着密切的关系；两者相互作用共同参与了缺血后处理内源性保护机制。 (4)缺血后处理用于缺血再灌注心肌时可能造成CoQ9发生剪切或修饰。
研究背景:在许多有活性的羰基化合物和糖化终末产物(AGEs)的前体中,甲基乙二醛(MG)可能对细胞内的AGEs的形成起着关键作用。以前的研究已经报道AGEs与阿尔茨海默病(AD)的发病机制有关,即与由异常磷酸化的tau聚合而成的神经原纤维缠结(NFTs)的形成有关。研究报道AD患者体内的MG水平是正常人体内的两倍,而其在脑脊液的浓度是血浆中的五到七倍。MG的特异清除酶——乙二醛酶I(Glyoxalase I)的表达在AD的早期阶段有减少,而在AD的中末期有增加。另外有研究证明乙二醛酶I在tau的转基因小鼠P301L中有明显的升高,这表明MG与tau之间有联系。而细胞内的AGEs与PHF-tau共定位,AGEs和糖化的tau蛋白培养可以诱导氧化应激并最终导致神经功能障碍和细胞死亡,暗示了AGEs和tau之间有某种内在联系。我们推测,MG作为AGEs重要的高活性的前体,可能是AD的tau病理性改变重要的上游致病因素之一。因此,探明其在tau蛋白异常磷酸化中的机制,对进一步理解AD和寻找新的防治途径具有重要意义。

目的:探讨MG对tau蛋白磷酸化的影响及其作用机制。 方法:用不同浓度的MG处理SK-N-SH细胞不同时间,观察在不影响细胞活性的MG浓度和处理时间的条件下,通过western blotting和免疫荧光等方法检测经MG处理后的细胞,tau蛋白磷酸化变化模式,并探讨tau磷酸化相关的蛋白激酶和磷酸酶活性及其在tau磷酸化中的作用;使用相关激酶的抑制剂和氨基胍阐明MG影响tau蛋白异常磷酸化的可能机制。 结果: 1.用不同浓度的MG处理SK-N-SH细胞1小时,或者用1.0 mM浓度的MG处理细胞不同时间,发现用少于5 mM的MG处理细胞1小时或者用1 mM的MG处理细胞时间低于4小时对细胞的活性无明显影响。 2.用不同浓度的MG分别处理细胞1小时,或者用1.0 mM浓度的MG处理细胞不同小时,可以观察到MG能够诱导tau在许多不同位点磷酸化。 3. GSK-3β和p38在MG诱导的tau异常磷酸化中激活。 4. JNK,Erk1/2,cdk5在MG诱导的tau异常磷酸化中不起作用。 5. PP2A的活性在MG诱导的tau异常磷酸化中未改变。 6.使用GSK-3β和p38的抑制剂能够减弱MG诱导的tau的异常磷酸化。 7.使用氨基胍(AG)处理细胞,能够改善MG引起的tau的异常磷酸化。 Selleck PF-2341066 结论:MG能够引起SK-N-SH细胞中tau蛋白的磷酸化,这可能是通过调节GSK-3β和p38,而氨基胍可以逆转tau蛋白的磷酸化。
目的: 制作大鼠四动脉结扎(four-vessel occlusion, 4-VO)全脑缺血(global cerebral ischemia, GCI)模型,研究延迟性脑缺血后处理(delayed ischemic postconditioning, PostC)介导的Akt/GSK3β信号通路对大鼠缺血性神经元损伤的保护作用及抗线粒体凋亡机制。 方法: 1. SPF级成年雄性SD大鼠,体重250～300 g,制作四动脉结扎全脑缺血模型,缺血8 min。实验动物随机分为:假手术组(sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、延迟性脑缺血后处理组(PostC组)、溶剂对照组(PostC + Vehicle组)、抑制剂组(PostC + LY294002组)。假手术组仅暴露双侧颈总动脉,但不进行缺血;缺血再灌注组暴露双侧颈总动脉并夹闭8 min;延迟性脑缺血后处理组于缺血8 min后,再灌注48 h后行二次缺血3 min,溶剂对照组及抑制剂组分别在二次缺血前20 min脑室注射DMSO及LY294002。实验分组和流程如Fig. 1所示。 2.

在低表达nodal的低侵袭性乳腺癌细胞t47d中稳定表达nodal基因后可促进细胞上皮-间质转化。另一方面,应用nodal受体抑制剂sb-431542处理高表达nodal的高侵袭性乳腺癌细胞bt-549,可抑制细胞增殖、迁移和侵袭,并证明可能与抑制基质金属蛋白酶mmp-2的表达和活性有关。5.应用基因定点突变产生的组成性激活alk7-ca可抑制乳腺癌细胞增殖,在低表达alk7的乳腺癌细胞中过表达alk7可恢复activinb抑制乳腺癌细胞增殖的作用。6.spearman等级相关性分析结果表明在导管原位癌中nodal与alk4的表达负相关(r=﹣0.378,p=0.047),在浸润性导管癌中alk4和alk7表达正相关(R=0.205,P=0.009),在淋巴结转移中这三种蛋白均无相关性。本文首次系统地分析了Nodal及其受体ALK4和ALK7三种蛋白质在不同类型乳腺组织中的表达、临床意义及其表达相关性,相应功能得到初步揭示。Nodal在浸润性导管癌中高表达,且随乳腺癌分化程度越低或临床分期越晚,Nodal蛋白阳性表达率则更高;体外实验也证实Nodal具有促乳腺癌功能,提示Nodal在乳腺癌中表达增加与乳腺癌的进展相关,可能作为乳腺癌诊断的标志分子和治疗靶点。此外,Nodal受体ALK4和ALK7在乳腺癌发展过程中分别有不同程度降低,特别是低分化乳腺癌中阳性表达率更低;相关性分析表明Nodal与受体ALK4或ALK7分别在浸润性导管癌和淋巴结转移中表达无相关性,提示ALK4或ALK7在乳腺癌中表达降低与乳腺癌的进展相关,也可能作为乳腺癌诊断的标志分子,但它们与Nodal促肿瘤作用的关系有待进一步研究。
肺癌已成为全球致死率最高的疾病之一。其中85%的患者为非小细胞肺癌。尽管肿瘤干细胞和肿瘤的发生,复发和耐药密切相关,但是只有非常少数的肿瘤干细胞标记物被证明可以功能性的鉴定出肺癌干细胞。我们发现了两种新的非小细胞肺癌标记物CD49f和CD104。CD49f高表达细胞,CD104阴性细胞和之前文献报道的CD166阳性细胞都可以特异性地富集肿瘤悬浮球其实形成细胞。在各种压型和不同常见基因突变类型的非小细胞肺癌样本中,CD166+CD49fhiCD104-Lin-细胞群体都稳定地存在,平均比例为1.4±0.4%。经过传代分选的CD166+CD49fhiCD104-Lin-细胞可以在体外形成肿瘤悬浮球,在免疫缺陷小鼠体内原位形成移植瘤,证明CD166+CD49fhiCD104-Lin-细胞具有成瘤能力以及自我更新能力。CD166+CD49fhiCD104-Lin-细胞表达较高水平的干细胞相关基因(GLDC,LIN28B,ALDH1和TGFβ1),拥有部分上皮-间质转化转化特性,对顺铂有很强的耐药能力。综上所述,CD166+CD49fhiCD104-Lin-细胞可以特异性地富集原代非小细胞肺癌干细胞,这一发现可以促进我们更好地研究肺癌的发生过程。
结直肠癌(colorectal

什么 www.selleckchem.cn/products/abt-199.html cancer, CRC)是一类危害严重的常见消化道恶性肿瘤。虽然目前我国人民的生活水平和医疗条件都得到了很大的提升,但由于社会发展带来的环境问题以及人们生活习惯和饮食结构的改变,结直肠癌的发病率依然呈现上升的趋势。目前对于结直肠癌早期诊断和治疗的研究虽然取得了很大进展,但对于晚期结直肠癌的治疗还没有取得令人欣慰的成果,这部分患者的生存并没有得到根本的改善,死亡率依旧居高不下。因此,深入研究结直肠癌的发生、发展和转移的机制,积极寻找新的分子标志物,对结直肠癌的预防、早期诊断和个体化治疗以及患者生存质量的提升均具有重要的意义。结直肠癌的发生发展是一个极其复杂的过程,它的形成机制目前还不十分清楚。我们实验室一直以结直肠癌为疾病模型研究肿瘤发生发展机制及筛选诊断预后标志物；2010年我们通过差异分泌蛋白质组学研究,发现生长分化因子15(Growth Cisplatin数据表 differentiation factor 15, GDF15)是结肠组织中高特异性表达的一个分泌蛋白,并且它在淋巴结转移灶细胞株SW620的培养上清及细胞裂解液中的表达显著高于来源于同一结直肠癌病人的原发灶细胞株SW480。这些结果提示,GDF15可能在结直肠癌的发生、发展中起到重要的作用。鉴于此,我们实验室在随后的工作中对GDF15在结直肠癌中的作用开始了一系列的研究。GDF15是转化生长因子(transforming growth factor, TGF-β)超家族成员,定位于19号染色体的p13.11上。我们的前期研究显示,结直肠癌患者血清中的GDF15水平明显高于正常人群,而且有淋巴结转移的病人又高于无转移的病人。mRNA水平也发现GDF15在结直肠癌组织中表达明显比正常组织高。免疫组织化学结果证实,有淋巴结转移的结直肠癌病人的癌组织GDF15表达水平明显高于无转移的患者。这些结果都表明,GDF15与结直肠癌的发生发展密切相关,可以作为结直肠癌转移的标志物。但GDF15在结直肠癌中的转移机制以及它对预后的影响仍不清楚。本课题在上述研究工作基础上,发现不同结直肠癌细胞GDF15

CDS (coding sequence)区第604位碱基存在C和G的不同,经查阅相关资料,发现这是一个单核苷酸多态性位点(rs1058587)。我们进一步对结直肠癌患者的肿瘤组织和其配对正常组织该位点进行检测,发现部分病人的基因型存在不一致的情况,比如肿瘤组织的基因型为CG,而其配对正常组织的基因型为CC。鉴于这种基因型差异的现象发生在同一个病人的肿瘤组织和配对正常组织之间,所以我们认为GDF15rs1058587不仅是一个多态性位点,而且还存在突变。rs1058587位于基因组的编码序列上,它编码的GDF15蛋白成熟体第六位氨基酸发生了组氨酸(H)和天冬氨酸(D)的转换,因此又叫H6D多态性,该位点的突变称之为H6D突变。这种GDF15 H6D多态性或其突变必然会导致GDF15蛋白质结构甚至功能发生改变。基于上述工作基础,我们设想,H6D多态性与结直肠癌的发生是否存在易感性?H6D多态性及其突变是否会影响到GDF15的表达,是否与转移和预后等临床病理特征存在某种联系?GDF15引起结直肠转移的机制又是什么?本课题的研究目的就是要解决上述这些问题。1.

以Ⅱ型胶原酶为主消化分离乳鼠窦房结细胞,配合差速贴壁及Brdu

纯化培养。 2.在原有模拟I/R 模型的基础上,通过四唑盐(MTT)比色及碘化丙啶(PI)染色检测细胞活性,选择最佳预适应方案,建立有效的模拟IP 模型。 3.以免疫荧光法标记F-actin、β-tubulin 、desmin、vinculin 等骨架蛋白,通过激光共聚焦显微镜检测模拟I/R 及模拟IP 后乳鼠窦房结细胞骨架蛋白荧光分布及荧光强度的变化,分析模拟IP 对乳鼠窦房结细胞骨架结构的影响。 4.以Ca~(2+)荧光探针负载细胞内Ca~(2+),通过激光共聚焦显微镜定量分析模拟I/R 及模拟IP 后鼠窦房结细胞内Ca~(2+)荧光强度的变化,探讨模拟IP 对乳鼠窦房结细胞Ca2+
目的 由免疫学或非免疫学因素引起的移植物早期损伤可影响移植物短期和长期有功能存活。肾脏缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)在肾移植中不可避免,作为主要的非抗原依赖性因素,严重时可引起移植肾脏失功、甚至受者死亡。随着目前等待移植的患者逐渐增多,临床上越来越多采用边缘供器官。而边缘供肾或无心跳供者,常难避免过长的热缺血时间。研究显示,30分钟的热缺血比24小时冷保存更具破坏性。因此,如何防治肾脏热缺血再灌注损伤对移植肾有功能存活的影响是摆在移植界面前的一大难题。若能揭示热IRI早期损伤机制,在损伤早期即行干预,其防治效果可能最佳。 目前国内外大多采用针对IRI某一损伤途径的拮抗剂的防治策略,如抗氧化剂、抗凋亡药物、黏附分子拮抗剂和选择素拮抗剂等。这些药物可针对IRI的某一特定环节发挥作用,但无法从多个环节同时作用而发挥整体疗效。肾脏IRI是由多途径、多环节共同导致的综合征,因此其理想的防治措施应为多管齐下的治疗药物或措施。与化合物类的西药通常只能针对疾病的一个靶环节不同,我国独有的含有多种成分的中药复方恰恰可同时作用于疾病发生的多个靶环节或多个靶部位。因此,从我国天然药物资源中寻找价廉、高效、低毒、能与免疫抑制剂协同作用的IRI拮
目的:了解非甾体类抗炎药Celecoxib对人卵巢癌SKOV3细胞生长的抑制作用,以及对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响和毒副作用,并初步探讨其抗肿瘤作用机制,评价Celecoxib作为卵巢癌辅助治疗和化学预防新方法的可行性。

3-MA溶解度 方法: 1.采用MTT法、流式细胞技术(flow selleck化学药品液面控制 cytometry,FCM)和缺口末端标记实验(TdT-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end labling,TUNEL),检测不同浓度(10~(-7)mmol/L～10~(-3)mmol/L)的特异性COX-2抑制剂Celecoxib对人卵巢癌SKOV3细胞株增殖和凋亡的影响,同时与不同浓度(10~(-5)mmol/L～10~(-1)mmol/L)的非选择性COX-2抑制剂Aspirin相比较。

2.建立人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成4组:对照组、实验1组(Celecoxib10mg/kg/day)、实验2组(Celecoxib25mg/kg/day)、实验3组(Celecoxib50mg/kg/day)。实验组连续口服给药8周,对照组饮用等容积灭菌蒸馏水,末次用药24小时后处
目的 已经 过去,人们比较重视心肌细胞主动收缩力的产生和影响机制,而忽略了心肌细胞被动生物力学特性。然而,根据近年来大量的研究结果,我们提出在心肌细胞病理情况下,后者可能更为重要。本研究目的就在于观察肥大心肌细胞骨架、生物力学特性的变化规律,并进一步阐明细胞骨架改变对肥大心肌细胞生物力学特性的具体影响及其调节机制。 方法 利用分步消化—差速贴壁法培养新生Wistar大鼠心肌细胞。将肾上腺素加入心肌细胞建立肥大心肌细胞模型后,再分别加入细胞骨架干预剂秋水仙素(Col,细胞骨架微管解聚剂)、细胞松弛素D(Cyto-D,细胞骨架微丝解聚剂)和紫杉醇(Taxol,细胞骨架微管聚合剂)。同时,在培养的肥大心肌细胞中加入Genistein以抑制蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性。光学显微镜下观察心肌细胞搏动频率;利用同步摄像技术和计算机图像分析系统测定心肌细胞收缩前后表面积,心肌细胞收缩幅度以心肌细胞收缩前后表面积的变化表示;通过微管吸吮法检测心肌细胞粘弹性。RT—PCR法检测心肌细胞骨架蛋白(包括微丝蛋白actin、α-actinin、微管蛋白α-tubulin以及结蛋白desmin)mRNA的表达。分别采用免疫细胞荧光化学与Western Blot检测细胞骨架蛋白的分布、密度及含量。同时,我们还通过Western Blot测定了细胞骨架蛋白磷酸化水平。此外,我们采用PTK活性检测试剂盒测定了细胞骨架相关蛋白激酶的活性。 结果 与正常心肌细胞比较,肾上腺素作用后12h心肌细胞的收缩频率增快,收缩幅度增强(P<0.05),其粘性系数显著增大(P<0.01),而弹性系数明显减小(P<0.01)。随着肾上腺素作用时间的延长(加入肾上腺素作用后12h、24h、48h及72h),心肌细胞的收缩频率及收缩幅度均不断增加,粘性系数持续增大,而弹性系数则不断减小;RT-PCR结果显示与正常心肌细胞比较,肥大心肌细胞内细胞骨架各成分mRNA表达显著增强(P<0.

0统计软件进行统计分析。实验所测得数据进行正态性检验和方差齐性检验,以“均数±标准差”表示。发病率用用卡方检捡进行统计学分析,以百分比表示。多组计量资料均数的比较：方差齐时应用ONE-WAY-ANOVA中SNK-q检验进行方差分析,方差不齐时立用非参数秩和检验。以P
研究背景：骨肉瘤(Osteosarcoma)源于间叶组织,是以能产生骨样组织的梭形基质细胞为特征的恶性肿瘤,是原发性恶性骨肿瘤中最常见、恶性程度最高的一类骨肿瘤,好发于儿童和青少年期。在手术切除的基础上辅助阿霉素(Adriamycin, 和 ADR)药物为主的联合化疗是目前临床主要治疗手段。尽管新型辅助化疗的应用极大地提高了骨肉瘤患者的5年存活率,但是骨肉瘤患者的预后一直很差,长期生存率仍徘徊不前。骨肉瘤易复发、易转移及患者对包括阿霉素在内的化疗药物产生原发或继发性耐药是目前导致临床化疗失败的主要原因。根据肿瘤干细胞理论,骨肉瘤肿瘤干细胞具有自我更新、强致瘤性、多向分化潜能、产生异质性肿瘤细胞及多重耐药性的生物学特征,因此骨肉瘤肿瘤干细胞的存在可能是临床化疗失败的关键原因之一。如果可以特异性的针对骨肉瘤肿瘤干细胞,尤其是化疗作用下骨肉瘤肿瘤干细胞相关特性的改变,可为深入认识骨肉瘤的发生发展提供新方向,并以此为基础寻找和发现靶向骨肉瘤肿瘤干细胞的药物,对于骨肉瘤的最终治愈具有不可估量的前景和价值。本论文通过考察一线化疗药物阿霉素对骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力的影响,发现人类Kruppel样因子4(K1f-4)是促进骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力的重要调控因子,进一步通过研究其调控骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力的作用及其分子机制,进而揭示调控骨肉瘤发生发展、转移和耐药等特性的新的关键因子；最后以Klf-4蛋白为潜在靶点筛选到以辛伐他汀为代表的他汀类药物能够抑制Klf-4蛋白,进而有效地拮抗了阿霉素促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力作用,为骨肉瘤的靶向治疗策略提供全新的思路。第一部分：阿霉素影响骨肉瘤细胞的干细胞特性及肿瘤转移能力的作用及机制研究一.研究目的：虽然包括辅助化疗和新辅助化疗在内的化疗方案的引入极大地提高了骨肉瘤患者的5年生存率,但是骨肉瘤患者的预后一直很差,长期生存率一直徘徊不前。骨肉瘤易复发、易转移及患者对包括阿霉素在内的化疗药物产生原发或继发性耐药是目前导致临床化疗失败的主要原因。根据肿瘤干细胞理论,骨肉瘤肿瘤干细胞的存在可能是其化疗失败的关键因素,目前针对骨肉瘤化疗与肿瘤干细胞具体关系尚未见报道。本课题旨在研究骨肉瘤一线化疗药物阿霉素(Adriamycin,

ADR)与骨肉瘤肿瘤干细胞特性及肿瘤转移能力的关系,阐明其作用机制,为临床靶向治疗骨肉瘤提供潜在靶点。二.研究方法：SRB法检测骨肉瘤细胞对药物的敏感性；siRNA干扰手段沉默目标蛋白；Western Blotting检测蛋白表达、qRT-PCR检测基因表达；流式细胞术检测干细胞标记物CD133的表达；肿瘤微球形成实验考察细胞的自我更新能力；细胞划痕修复和Transwell小室模型考察细胞迁移运动能力。三.研究结果：1.ADR对骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响：1)ADR可抑制骨肉瘤细胞的增殖能力且呈良好的剂量关系和时间关系；2)ADR能够引起KHOS/NP、U2OS和OS20三株骨肉瘤细胞的干细胞标记物CD133阳性表达率增加；3)ADR处理组的骨肉瘤细胞形成sphere的数目明显高于对照组；4)ADR作用能够显著提高骨肉瘤肿瘤干细胞标记物CD selleck怎么样 133、ALDHA1和ABCG2的转录水平。2.ADR对骨肉瘤细胞转移能力的影响：1)ADR处理组的骨肉瘤细胞划痕修复能力显著高于对照组；2)ADR处理组的骨肉瘤细胞迁移至Transwell下室的细胞数目显著高于对照组。3.ADR对干细胞转录因子的影响：1)ADR作用骨肉瘤细胞后能够选择地激活Klf-4的mRNA转录；2)ADR作用骨肉瘤细胞后能够上调Klf-4蛋白表达水平。4.Klf-4对ADR促进的骨肉瘤肿瘤干细胞特性的影响：1)沉默Klf-4能够明显抑制ADR引起的CD133表达增加；2)沉默Klf-4能够明显减少ADR所引起sphere数目增加；3)沉默Klf-4能够明显减少A_DR促进的肿瘤干细胞标记物CD133、

ALDHA1和ABCG2的mRNA表达。5.KIf-4对ADR促进的骨肉瘤细胞转移能力的影响：1)沉默Klf-4能够抑制ADR引起的骨肉瘤细胞划痕修复能力增强；2)沉默Klf-4能够明显减弱ADR引起的骨肉瘤细胞迁移运动能力增强。四.研究结论：本研究首次发现一线化疗药物ADR能够增强骨肉瘤细胞的肿瘤干细胞特性及肿瘤转移能力,且这种作用依赖于Klf-4的蛋白水平的上调。本研究从肿瘤干细胞角度为解释患者在接受阿霉素治疗的过程中出现骨肉瘤的复发和转移现象提供了新视角。第二部分Klf-4调控骨肉瘤肿瘤干细胞特性及转移能力的作用研究一.研究目的：人类Kruppel样因子4(Klf-4)是Spl/Kruppel样锌指转录因子家族的成员之一,参与调控细胞增殖、分化、胚胎发育等重要生命过程。与已知的TGF-β一样,Klf-4在不同的遗传背景的细胞中具有癌基因或者抑癌基因的不同功能,而Klf-4对骨肉瘤的调控作用尚未见任何文献报道。第一部分研究显示Klf-4参与调控ADR对骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力的影响,提示Klf-4可能可以作为靶向骨肉瘤肿瘤干细胞的潜在靶点,本课题将进一步研究Klf-4在骨肉瘤中的表达水平与其自身恶性程度的可能关系以及其在骨肉瘤干细胞样模型中的表达,并以此为切入点,较为全面地阐明其与骨肉瘤肿瘤干细胞特性和转移能力的相互关系,从而揭示调控骨肉瘤发生发展、转移和耐药的关键因子,为骨肉瘤的治疗提供新的潜在分子靶点,有望进一步推动骨肉瘤的临床治疗。二.研究方法：慢病毒转染细胞构建目的基因过表达模型,siRNA干扰手段沉默目标蛋白；肿瘤微球形成实验检测细胞的自我更新能力；Western 查找更多 Blotting检测蛋白表达、qRT-PCR检测基因表达；细胞划痕修复和Transwell小室模型考察细胞迁移运动能力；台盼蓝拒染法结合血细胞板计数描绘细胞生长曲线；SRB法检测药物对细胞的增殖抑制能力,PI染色结合流式分析检测细胞周期分布以及药物诱导细胞发生凋亡能力；软琼脂糖克隆形成实验检测细胞克隆形成能力；裸小鼠移植瘤实验检测细胞成瘤能力。三.研究结果：1.Klf-4在不同骨肉瘤细胞中的表达情况：1)Klf-4在骨肉瘤原代样本OS21细胞中的表达水平高于原代样本OS15和OS20细胞；2)Klf-4蛋白在骨肉瘤细胞系KHOS/NP中的表达明显高于U20S和MG63细胞；3)Klf-4蛋白在骨肉瘤细胞形成的sphere干细胞球中的表达高于相应贴壁培养的正常细胞。2.

Results:The application of icariin significantly

induced the cardiomyocyte differentiationof EB as indicated by the promoted expression of α-actinin and troponin T.Theexpression of PGC-1α,PPARα,and NRF-1 increased coincidently in early differ-entiation and the increase was dose-dependently 而且 upregulated by icariin treatment.The phosphorylation of the p38 MAPK peaked on d 6 and decreased after d 8,andthe activation was further enhanced and prolonged when the EB were subjectedto icariin,which was concurrent with the elevation of PGC-1α,PPARα,and NRF-1.Moreover,the inhibition of the p38 MAPK pathway by SB203580 efficientlyabolished icariin-stimulated cardiomyocyte differentiation and resulted 查找更多 in the cap-ture of the upregulation of PGC-1α,PPARα,and NRF-1.Conclusion:Takentogether,icariin promoted the expression of PGC-1α,PPARα,and NRF-1 duringcardiomyocyte differentiation of murine ES cells in vitro and the effect was partlyresponsible

for the activation of the p38 MAPK.
Aim:To investigate the effect of aspirin on the apoptosis of cultured bovineaortic endothelial cells(BAEC)and the signal pathways involved in this process.Methods:BAEC were cultured and passaged in Dulbecco’s modified Eagle’smedium culture medium.Morphologic changes and quantification of apoptoticcells were determined using fluorescence microscope after staining the cells withHoechst 33258.Cell viability was measured LY2835219订单 by 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)method.DNA fragmentation was visualizedby agarose gel electrophoresis.Phospho-p38 mitogen-activated protein kinase(MAPK)expression was detected by Western blotting.Results:Aspirin at lowconcentrations from 1×10~(-10)mol/L to 1×10~(-8)mol/L decreased the apoptosis andp38 MAPK pbosphorylation

induced by H_2O_2 in BAEC,while high doses of aspi-rin(1×10~(-7)-1×10~(-4)mol/L)induced typical apoptotic changes in BAEC and stimu-lated the expression of phospho-p38 MAPK in a concentration-dependent manner.SB203580,a specific p38 MAPK inhibitor,blocked such effects.Conclusion:Aspirin exhibits a biphasic effect on the apoptosis in BAEC,reducing apoptosisat low concentration and inducing apoptosis at high concentration,p38 MAPKmay be an important signal molecule mediating the effects of aspirin.
Aim:To characterize the molecular mechanisms of nitrofen-induced pulmonaryhypoplasia.Methods:After administration of nitrofen to cultured type Ⅱ A549pneumocytes,cell proliferation and DNA synthesis were investigated by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide colorimetry,colony forma-tion assay,flow cytometry and[~3H]-thymidine incorporation assay.Apoptosiswas measured by terminal transferase-mediated dUTP nick-end-labeling,acridineorange-ethidium bromide staining and flow cytometry.

05),部分抑制对NFκB信号通路的激活；在原代单核巨噬细胞内能够部分抑制LPS诱导的单核巨噬细胞THP1促炎因子TNF-α产生(P0.05)。体内实验中,穿膜融合多肽IP55能够部分抑制LPS诱导的肝脏细胞NFκBp65的核转位,降低LPS诱导的小鼠急性肝损伤造成的小鼠死亡率 结论：穿膜融合多肽IP55能有效进入细胞,抑制肿瘤细胞细胞周期进程,抑制DNA合成；在单核巨噬细胞系采用穿膜融合多肽IP55预处理能够显著抑制LPS诱导的促炎因子TNF-α,IL-6以及IL-1β产生；在原代单核巨噬细胞采用穿膜融合多肽IP55预处理能够部分抑制LPS诱导的单核巨噬细胞THP1促炎因子TNF-α产生；在LPS诱导的小鼠急性肝损伤模型采用穿膜融合多肽IP55预处理能够部分抑制LPS诱导的肝脏细胞NFκB p65的核转位以及减少急性肝损伤造成的小鼠死亡。
目的：放射导向的基因治疗是近年来提出的肿瘤治疗新策略，利用射线诱导治疗基因表达，二者协同作用杀伤肿瘤具有可喜的应用前景。但放射线虽然可严格控制治疗基因局限于照射野内表达，但照射野内不免包括瘤周正常组织，而治疗基因在瘤周表达将导致不必要的正常组织损伤。本研究利用肿瘤组织的缺氧特异性，设计一个以放射、缺氧为输入因子的“与门”基因电路，使其在放射、缺氧同时存在的条件下，治疗基因表达才得以启动，使治疗基因表达局限于受照射的缺氧肿瘤组织，增加了基因治疗的肿瘤特异性，最大限度的保护了正常组织。本实验的目的是利用连接天然存在的基因逻辑电路-热休克反应信号转导通路中各个信号反应元件和cArG启动子的辐射诱导特性，通过连接抑癌基因wtp53，构建辐射/乏氧双敏感性调控治疗基因表达的“与门”基因电路。

方法：在GenBank中查找放射敏感性反应元件cArG和酵母热休克反应元件HSE的基因序列，应用DNA合成仪，采用互补寡核苷酸退火方法分别合成双链增强子序列。采用反转录病毒载体plxsn-EGFP为骨架，在转录调控位点插入上述合成序列。应用PCR扩增技术扩增SNF1、HSF1和p53的cDNA序列，然后分别在cArG6的下游插入SNF1和HSF1的序列构成对照载体plxsn-EGFP；将位于HSE4下游的EGFP更换为wtp53的cDNA序列，构成治疗载体plxsn-wtp53。分别采用测序分析、单酶切和双酶切方法鉴定重组载体的构建是否成功。 以及 结果：经测序分析，重组载体的DNA序列结果与预期全相符，与NCBI公布的cArG、SNF1、HSF1、HSE、EGFP和p53序列的ORF进行比对，发现正确性高达100%。而SNF1、HSF1和p53的基因片段经单酶切和双酶切处理后，酶切产物经1%琼脂糖凝胶电泳可见与预期的基因片段大小相符的特异性片段。 一般 结论： 1、测序结果证明重组“与门”基因电路的各个反应元件未发生基因突变。 2、测序和酶切鉴定证明重组“与门”基因电路构建成功。 目的：验证前期构建的重组质粒能否产生“与门”效应，即是否仅在照射和缺氧条件下被激活。 方法：将前期构建的报告载体plxsn-EGFP和治疗载体plxsn-wtp53转染A549细胞株后给予不同处理，荧光显微镜下观察各处理组绿色荧光蛋白的表达，并采用western-blotting方法检测基因电路中各个反应元件SNF1、HSF1和p53的蛋白表达差异。 结果： 1、转染plxsn-EGFP质粒的A549细胞经6Gy照射与1%O_2处理24h后，可见绿色荧光蛋白表达，但表达量较低，48h后EGFP表达量急剧升高，满视野呈片状融合，72h呈持续高表达状态。但经单纯照射或缺氧处理的A549细胞内却未见EGFP表达。

2、western-blotting实验证明SNF1和HSF1蛋白在转染后并经照射与缺氧处理的A549细胞内表达最强（P<0.01），在转染后经照射处理的细胞内表达量也较其他组有明显升高（P<0.01），证明了射线能够激活SNF1和HSF1的表达。但p53表达情况则略有不同，虽然在转染经照射和缺氧处理后的细胞内表达量最高（P
C=N双键作为一类非常重要的官能团,被广泛地应用于天然产物全合成、杂环化合物以及功能材料的合成中。本文对C=N双键的形成及其参与的反应作了比较详细的综述,并在此基础上对两类原位产生C=N双键的反应体系——酰胺活化体系和N-磺酰基烯酮亚胺体系进行了研究,合成了多种具有重要应用价值的化合物,主要内容以及取得的结果如下： 1.发展了两分子酰胺在三氟甲磺酸酐和2-氯吡啶活化下的分子间二聚反应,合成了多取代的脒类化合物。随后又成功地将分子间的反应引入到了分子内,合成了多种对称的和不对称的苯并咪唑类化合物,嘧啶类化合物以及异吲哚酮类化合物,为这些化合物的合成方法作了很好的补充。

ERK inhibitor订单 2.发展在溴化亚铜催化的2-甲基吲哚、磺酰基叠氮和端炔在氩气中的三组分串联反应,得到了3-官能团化的吲哚类化合物Ⅰ。而当我们将该反应置于氧气气氛中时,可以发生氧气参与的2-甲基吲哚、磺酰基叠氮和端炔之间的四组分串联反应,得到化合物Ⅰ的氧化产物——3-官能团化的吲哚类化合物Ⅱ。通过对反应机理的研究,我们提出了一种铜串联催化的机理,同时,对于一些特定的底物,通过一步转化,可以得到连吲哚以及吲哚并环戊烷的骨架。
第一部分PI3K抑制剂对急性肺损伤的保护作用及机制 目的：探讨磷酸肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol3-kinases, PI3K)抑制剂对肉毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)所致小鼠急性肺损伤的保护作用,并比较不同的给药方式、给药剂量、药物种类以及不同时间点的疗效差别。 方法：取6-8周龄的雄性CD-1小鼠,连续3天分别经鼻(0.5mg/kg)或经胃管(50mg/kg)滴入3种不同的P13K抑制齐(?)(LY294002,SHBM009,GDC0941)或PBS,随后经气道滴入LPS(1.25mg/kg)诱导肺损伤,分别在LPS滴入后4h和24h处死小鼠(每组每个时间点10只)。观察这3种P13K抑制剂对LPS刺激后小鼠肺毛细血管通透性、肺组织重量/体重比值、肺组织气体容量(excised lung gas volume, ELGV)、肺泡灌洗液蛋白渗出和炎症细胞浸润、肺泡灌洗液(Brochoalveolar lavage fluid,BALF)炎症因子水平的影响,并比较不同给药方式、不同时间点的疗效差别。A549上皮细胞分别在含有不同浓度SHBM1009(1或10ug/mL)的培养基中培养,然后用LPS(1ug/ml)或PBS刺激。在刺激后3,6,12,24收集培养液上清,4℃离心10000rpm10min,用ELISA方法测定培养液上清中角质细胞源性趋化因子(KC)、白三烯B4(LTB4)的水平。 结果：LPS刺激后4h和24h小鼠肺组织重量/体重的比值明显高于PBS刺激组(P<0.05),具有保护作用。经鼻滴入SHBM1009亦具有明显保护作用(P<0.01)。经鼻滴入LY294002或SHBM1009能明显抑制LPS刺激4h或24h后ELGV的增加(P<0.

0软件平台上，利用反向分子对接方法，选取6,12-二苯基-3,9-二氮杂四星烷-1,5,7,11-四羧酸乙酯(Ia)为初始结构，对成纤维细胞生长因子受体-1(FGFR-1)、成纤维细胞生长因子受体-2(FGFR-2)、Janus激酶1(JAK1)、Janus激酶2(JAK2)、糖原合成激酶(GSK-3β)、粘着斑激酶(FAK)、法尼基转移酶(FTase)、cFAMS激酶、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)九种靶标进行筛选，确定FGFR-1、GSK-3β和MMP-7是3,9-二氮杂四星烷可能的抗肿瘤靶点。

其次，3,9-二氮杂四星烷(I)抗肿瘤靶点的分子的设计和虚拟筛选。采用分子对接的方法，对所设计的44个含有不同取代基的3,9-二氮杂四星烷分别与FGFR-1、GSK-3β和MMP-7三个肿瘤靶点进行对接研究。通过对对接结果的分析，确定拟合成的目标化合物的结构。 最后，3,9-二氮杂四星烷类化合物的合成研究。采用理论计算和紫外可见光谱的方法，研究4-芳基-N-芳基-1,4-二氢吡啶类化合物光稳定性。以4-芳基-N-芳基-1,4-二氢吡啶为原料，在光照的条件下，进行[2+2]环加成反应的研究，得到一系列的3,9-二氮杂四星烷。通过电子自旋共振(electron paramagnetic resonance,EPR)方法，对3,9-二氮杂四星烷的光合成机理进行探讨。
目的：探讨雷公藤甲素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎症反应的影响。方法：采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血(MCAO)模型。取80只雄性SD大鼠,随机分为5组：正常对照组、假手术组、DMSO溶剂对照组、MCAO组和雷公藤甲素治疗组；大鼠脑缺血90min再灌注24h后,利用核磁共振成像确定脑梗死的部位和面积。同时参照Longa的方法对SD大鼠做神经功能评分,用TTC染色来确定脑梗死体积。同时采用TUNEL染色来检测神经元凋亡情况,免疫组化法测定GFAP、COX-2、iNOS、NF-κB的表达情况,同时利用RT-PCR测定各组大鼠iNOS,

Obeticholic Acid数据表 COX-2mRNA表达量的变化,分析雷公藤甲素治疗对大鼠脑缺血的神经保护作用机制。结果：与MCAO组相比,雷公藤甲素治疗能够降低脑水肿,减少梗死体积,减轻神经功能损伤。TUNEL染色结果显示雷公藤甲素可以减少脑缺血再灌注引起的神经细胞凋亡。雷公藤甲素能够抑制胶质细胞活化。免疫组织化学结果显示,MCAO组大鼠可见大量COX-2、iNOS以及NF-κB染色阳性的细胞,而雷公藤甲素治疗组的COX-2、iNOS以及NF-κB的阳性细胞数显著降低。RT-PCR结果也显示雷公藤甲素治疗组的COX-2、iNOS mRNA的表达水平比MCAO组显著下降。 结论：雷公藤甲素对大鼠脑缺血-再灌注损伤有抗炎保护作用
目的：采用RT-PCR及ELISA方法分别检测GSK-3β、PTEN、PLK1在儿童急性髓系白血病中的表达从而探讨其临床意义。 通常 方法：实验分组：实验组33例初诊急性髓系白血病(acute myeloidleukemia AML）患儿；对照组10例正常骨髓。RT-PCR方法检测两组骨髓单个核（bone selleck marrow mononuclear bone marrow,BMMNC）中GSK-3βmRNA、PTENmRNA、PLK1mRNA的表达，ELISA方法检测GSK-3β蛋白及P-GSK-3β蛋白的表达。 结果： 1.实验组中GSK-3βmRNA的表达量高于正常对照组（P=0.012）；

2.实验组中GSK-3β蛋白的表达量高于正常对照组（P=0.014）； 3.实验组中P-GSK-3β蛋白的表达量低于正常对照组（P=0.002）； 4.实验组中PTENmRNA的表达量低于正常对照组（P=0.012）； 5.实验组中PLK1mRNA的表达量高于正常对照组（P=0.040）； 6.实验组中GSK3β蛋白与PTENmRNA的表达呈现一定的负相关（r=-0.415，P=0.016)； 7.实验组中GSK-3βmRNA与PLK1mRNA的表达呈现一定的正相关性（r=0.388，P=0.026)。 8.实验组中GSK3β蛋白与PLK1mRNA的表达呈现一定的正相关（r=0.427，P=0.013)。 9.实验组中外周血白细胞计数增高者GSK-3β蛋白的表达相应增高。 10.实验组中临床危险度高者PLK1mRNA、GSK-3βmRNA、GSK-3β蛋白的表达相应增高；而P-GSK-3β蛋白的表达相应降低。 11.实验组中GSK-3βmRNA高表达组较低表达组CR1低（P=0.001）；GSK3β蛋白高表达组较低表达组CR1低（P=0.019）；P-GSK-3β蛋白高表达组与低表达组的CR1无统计学差异（P=0.053）；PTENmRNA高表达组较低表达组CR1高（P=0.020）；PLK1mRNA高表达组较低表达组CR1低（P=0.017）。 结论： 1.GSK-3β在儿童AML中高表达，且其高表达组CR1低，治疗效果差，因此，GSK-3β在儿童AML的发病中可能发挥着癌基因的作用； 2.PLK1在儿童AML中高表达，且其高表达组CR1低，治疗效果差，因此，PLK1在儿童AML的发病中可能发挥着癌基因的作用； 3.PTEN在儿童AML中低表达，且其高表达组CR1高，治疗效果好，PTEN在儿童AML的发病中可能发挥着抑癌基因的作用； 4.在儿童AML中，PTEN可能作为GSK-3β的上游基因通过cdc42信号通路负调控GSK-3β； 5.在儿童AML中，GSK-3β可能作为PLK1的上游基因通过NF-κB信号通路而正调控PLK1。 6.

2%胎牛血清诱导后可以分化为星形胶质细胞(GFAP阳性)和神经元细胞(TUJ1阳性)。HS-3能诱导神经球在末铺P-L-L的培养板中粘附和迁移,迁移距离呈现浓度依赖性,在80μg/mL HS-3作用72h后,神经球的迁移距离为438μm。HS-3还能有效维持神经球在撤离生长因子后细胞的存活。在HS-3的刺激下，神经干细胞能分化为神经元和星形胶质细胞,浓度增加,分化为神经元的比例增大；且更有意义的是分化的神经元细胞能沿着神经球轴线向外迁移,而分化的星形胶质细胞滞留在神经球中,。PD98059和Noggin对HS-3介导的细胞迁移没有影响,而LY294002能有效抑制神经球的迁移(P
糖皮质激素是治疗炎症及自身免疫性疾病的常见药物。内源性及外源性合成的糖皮质激素均能有效抑制炎症反应,纠正炎症反应的失衡,避免过度或持续炎症所引起的组织损伤。正由于疗效显著,糖皮质激素数十年来一直应用于临床一线,广泛用于败血症性休克、哮喘、炎性肠病、类风湿性关节炎和多发性硬化症等炎症相关性疾病的治疗。然而,由于长期使用所带来的副作用及日益增加的耐药性,糖皮质激素的临床效能正面临前所未有的挑战。因而,深入研究和进一步阐明糖皮质激素的作用机理是一项重要的科学问题。

长期以来广为人们认可的糖皮质激素作用机制是基因组学说,即：通过与糖皮质激素受体(Glucocorticoid receptor, GR)结合形成复合物,转位进入细胞核后,与靶基因启动子区域糖皮质激素反应元件(Glucocorticoid 哪里 responsive element,GRE)结合或者与转录因子相互作用,从而直接或间接调控靶基因的转录。以往的研究主要聚焦在信号分子及炎症介质等蛋白编码基因上,而对于与基因表达异常关系密切的非编码序列如microRNAs 很少 (miRNAs)的作用则知之甚少。 近年来,miRNA已成为基因表达调控的“明星”分子。它们由细胞内核基因组转录为RNA,经过Drosha和Dicer酶剪切加工后,成为成熟的miRNA。成熟miRNA的种子序列可与靶基因mRNA的3’端非编码区互补结合,导致mRNA降解或者蛋白翻译抑制。越来越多的证据表明：miRNA是机体内各种生理及病理活动的关键调节因子,并参与固有免疫应答及适应性免疫应答。Toll样受体(Toll

like receptor, TLR)是固有免疫细胞重要的识别受体,可结合病原体的特定结构成分,从而激活免疫细胞。其中,TLR4信号通路的活化,诱导大量不同的miRNA,例如miR-146a,miR-147,let-7e,let-7i和miR-155表达上调等；而这些miRNA又可靶向抑制某些信号传导蛋白的表达,反馈调控TLR4信号通路的强度,从而促进或者抑制炎症应答。这些研究结果提示：miRNA在炎症应答中扮演着重要角色。那么,糖皮质激素是否调控miRNA的表达?miRNA是否参与糖皮质激素的抑炎作用?作用机制又如何?目前,均未见系统的研究报道。 有鉴于此,我们以脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的巨噬细胞炎症反应模型为研究对象,利用基因芯片等技术系统分析了糖皮质激素地塞米松对miRNA表达谱的改变情况,并对糖皮质激素调控miRNA表达的机制、miRNA参与糖皮质激素抑炎的作用及分子机制展开研究,以期阐明糖皮质激素抗炎的非编码RNA机制,为后续的药物开发提供理论和实验基础。 第一部分糖皮质激素影响microRNAs在炎症反应中的表达 巨噬细胞是天然免疫系统的重要组成部分,在炎症反应中起十分关键的作用。巨噬细胞等炎症细胞渗出是炎症反应最主要的特征。渗出的巨噬细胞是一柄双刃剑,一方面,巨噬细胞被激活后,释放炎性介质,激活免疫系统,有效地杀伤病原体,构成炎症反应的防御环节；另一方面,巨噬细胞过度激活则释放过量炎性介质、蛋白水解酶及氧自由基等加重组织损伤并延长炎症过程。Raw264.7细胞是小鼠来源的单核巨噬细胞系,在受到LPS刺激时,可模拟机体炎症细胞的反应状态,已成为一种常见的炎症反应细胞模型被广泛应用于炎症领域的相关研究。

据此,我们首先以LPS刺激Raw264.7细胞建立炎症反应模型,加入糖皮质激素地塞米松24h后,用Realtime PCR检测细胞炎症介质表达水平的改变,并用ELISA检测细胞外炎症介质的释放情况,结果发现：地塞米松可在mRNA水平下调TNF-a、IL-6及iNOS的表达,抑制TNF-a、IL-6及NO的合成及释放,提示糖皮质激素可显著抑制LPS所介导的巨噬细胞炎症反应。 ABT-263 为了进一步研究糖皮质激素对miRNA表达谱系的影响,我们以上述炎症模型为基础,利用基因芯片技术,系统分析了糖皮质激素对miRNA表达的调控作用,结果发现：LPS可上调巨噬细胞内96个miRNA的表达,下调30个miRNA的表达；在加入地塞米松后,与LPS+DMSO组相比,可上调巨噬细胞内96个miRNA的表达量,而下调的miRNA数量则为137个。通过生物信息学分析,我们挑选了其中部分与炎症密切相关的miRNA及表达差异较大的miRNA进行Realtime PCR的验证,结果显示：糖皮质激素可显著下调miR-146a、miR-147、miR-26b、miR-148、miR-32b、miR-155及miR-301b的表达,而对let-7i及let-7e的表达无明显影响。 本部分实验结果表明,糖皮质激素除了调控编码蛋白基因表达外,对蛋白非编码的miRNA亦具有明显的调控作用。 第二部分糖皮质激素下调microRNA-155发挥抑炎作用 第一部分的结果表明糖皮质激素可以明显影响miRNA的表达谱系的变化,那么miR-146a、miR-147、miR-26b、miR-148、miR-32b、miR-155及miR-301等这些变化的microRNA在糖皮质激素抑制炎症反应中的作用如何?为此,我们首先采用电转染的方法分别转染miR-146a、miR-147、miR-26b、miR-148、miR-32b、miR-155及miR-301模拟物(mimics)以上调这些miRNAs在巨噬细胞内的表达；其后,再进行地塞米松处理及LPS刺激。结果发现：过表达miR-155可显著拮抗地塞米松对TNF-a、IL-6及NO等炎症介质的抑制作用,提示miR-155参与糖皮质激素抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应的作用。 为了进一步探讨这种下调的miR-155表达对LPS诱导巨噬细胞炎症反应的影响,我们利用miR-155抑制剂(inhibitor)干扰Raw264.

43±12.83 vs 153.65±20.53,P0.05); ③胰岛素抵抗:FS组大鼠胰岛素抵抗指数较NS组明显升高(HOMA-IR index:2.45±0.36 vs. 1.84±0.41,P
目的: 建立2型糖尿病大鼠模型,研究咖伦宾的降糖作用及其对葡萄糖转运体-4(GLUT-4)蛋白表达量和胰岛素受体结合能力的影响,探讨咖伦宾可能的降糖作用机制。 方法: (1)高糖高脂饲料喂养3个月联合小剂量链脲佐菌素(STZ)30mg/kg腹腔注射建立实验性2型糖尿病大鼠模型,动物分为5组:正常对照组,模型对照组,咖伦宾低剂量组(25mg/kg),咖伦宾高剂量组(50mg/kg)和阳性对照组(二甲双胍,200mg/kg)。灌胃给药4W,1次/天,以空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(ISI)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、大鼠体重、葡萄糖耐量作为检测指标观察药物的降糖作用。 (2)给药4周后,各组大鼠断头处死,分别取部分右下肢股四头肌、肝脏提取骨骼肌细胞膜和肝细胞膜总蛋白。采用Western Blotting法检测骨骼肌葡萄糖转运体(GLUT)-4蛋白量的表达,放射性配基受体结合法检测肝胰岛素受体的结合能力。

结果: (1)经高脂饲料喂养后,大鼠空腹胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、自由脂肪酸(FFA)显著高于正常对照组(p<0.05),胰岛素抵抗指数显著降低(p0.05)。整个实验过程中,模型对照组血糖稳定,至给药14天时,咖伦宾低剂量组、高剂量组、二甲双胍组血糖值分别较模型对照组下降15.04%、19.65%、20.18%(p<0.05);至28天给药结束,各组血糖值分别下降24.97%、30.85%、42.79%,和模型对照组比较,咖伦宾低剂量组差异有显著意义(p<0.05),咖伦宾高剂量组和二甲双胍组差异有极显著意义(p0.05),而模型对照组胰岛素抵抗指数显著低于正常组(p<0.01),给药后胰岛素抵抗指数显著增高(p<0.05)。与模型对照组相比,咖伦宾低剂量、咖伦宾高剂量和二甲双胍组糖耐量明显改善(p<0.05),各组血糖水平在0.5h、1h、2h均有显著降低(p<0.01),咖伦宾低、高剂量组和二甲双胍组游离脂肪酸降低,与模型对照组相比,差异有统计学意义(p<0.01或p<0.01),给药后咖伦宾低、高剂量组和二甲双胍组GLUT4蛋白表达量显著增加(p<0.01),受体最大结合容量Bmax增加(p<0.05)。给药后各组大鼠肝细胞膜胰岛素受体解离常数KD显著降低(p<0.01),Bmax减少,与模型对照组比较,咖伦宾低、高剂量组和二甲双胍组差异有显著意义(p<0.05或p
腹主动脉瘤(abdominal 更多 Selinexor aortic aneurysm, AAA)是一种常见的心血管疾病。近年研究认为平滑肌细胞(smooth

muscle cells, SMCs)数目的减少和细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的改变是AAA形成的重要原因。 ECM在维持腹主动脉的正常组织结构与功能中起着关键作用。骨桥蛋白(osteopontin, OPN)是ECM中一种重要的功能性蛋白和促炎因子,可由破骨细胞、巨噬细胞、内皮细胞和SMCs等多种细胞分泌。OPN可调节SMCs的增殖和凋亡。SMCs是腹主动脉中膜的主要组成部分,除了自身的收缩功能外,还维持主动脉壁的弹性和抗压性。SMCs的减少会造成动脉壁结构的改变,研究表明SMCs的凋亡可导致SMCs数目的减少,在AAA组织中SMCs凋亡明显增高。自噬是一种高度保守的胞内降解过程,在细胞存活和死亡中起重要作用。但是在AAA中是否存在SMCs的自噬,OPN是否影响SMCs的自噬及其中的分子机理尚不清楚。因此,本研究探讨了(1)AAA组织中OPN和自噬相关基因的表达；(2)OPN对SMCs自噬及其相关基因的表达的影响和调节SMCs自噬的分子机制。

也许 主要结果如下： 1)AAA组织中的OPN表达水平明显高于正常主动脉组织。 2)AAA组织中自噬相关基因包括Atg4b、Beclin1、Bnip3和VPS34的表达比正常主动脉组织显著增高。 3)OPN可诱导SMCs自噬以及自噬相关基因的表达。 4) p38 MAPK是OPN诱导SMCs自噬的主要信号通路。 小结,本研究结果表明AAA组织中OPN和自噬相关基因的表达明显高于正常主动脉组织,OPN通过p38 MAPK信号通路诱导SMCs自噬。这一机制的阐明可能为AAA形成的防治提供了重要的理论依据。
目的探讨MAPK家族重要成员ERK1/2和P38在高血压心脏重构过程中的作用,及其在高血压心脏不同解剖结构,以及同一解剖结构不同组织学区域中发挥的作用是否相同,从而进一步明确ERK1/2和p38激酶在高血压心脏重构中的作用,从细胞信号转导方面探讨高血压所致的心脏重构的分子机制。 方法动物分组:①高血压组:4周龄组(简称SHR4),16周龄组(简称SHR16),24周龄(简称SHR24)组各10只;②WKY大鼠作为对照组:4周龄组(简称WKY4),16周龄组(简称WKY16),24周龄组(简称WKY24)各10只;③干预组:24周龄高血压大鼠干预组PD98059和干预组SD203580各10只。利用HE染色,光镜测微尺测量4、16、24周龄SHR心脏重构改变,免疫组织化学和Western blot方法,动态观察SHR心脏不同解剖部位PCNA、磷酸化和总ERK1/2和P38的表达变化。 结果1、随着周龄的增加WKY大鼠和SHR的心脏/体重比值逐渐增加,SHR16、24的心脏/体重比值明显高于SHR4(P<0.05)。2、SHR相对左心室壁厚度,随着周龄的增加逐渐增加,以左心肌膜内层和中层厚度增加明显,SHR24相对左心室壁厚度明显高于WKY24大鼠(P<0.05)。与SHR比较,PD98059、SD203580组明显降低左心肌膜内层和中层室壁厚度。3、随周龄的增加PCNA表达降低(P<0.05)。5、总P38表达在各观察组之间无显著性差异。左心肌膜内层的表达高于室间隔和右心室的表达(P<0.05)。在左心室磷酸化P38在SHR的表达随周龄的增加表达逐渐增加,SHR16、24明显高于相应WKY大鼠(P<0.

aureus乳腺炎的感染损伤机制还不清楚,因此探索S.aureus乳腺炎发生、发展与转归的分子机制迫在眉睫。 中性粒细胞是奶牛乳腺抵御病原菌侵袭的第一道防线,它的凋亡对于控制乳腺炎症的发展和转归至关重要,在解除奶牛不良炎性反应中发挥重要作用。 为了探索奶牛S.aureus乳腺炎发生时中性粒细胞凋亡的分子机制,找到调控中性粒细胞凋亡的相关基因,本实验在体外37℃,5%C02的条件下培养从奶牛外周血中分离到的中性粒细胞,向培养基中以50：1的比例加入处于对数生长期的S.aureus,分别在共培养Oh,2h,4h,6h,8h,10h后用PITC/PI双染法通过流式细胞术检测中性粒细胞凋亡情况。最后利用基因芯片技术筛选出与中性粒细胞凋亡相关的基因,并通过qPCR对芯片结果加以验证。实验所得结果有以下几个方面：

1、中性粒细胞体外培养存活情况 体外培养的中性粒细胞的活细胞比例随着培养时间的延长不断下降,培养Oh时为100%,培养10h后活细胞比例降为80%,培养28h后降至50%。 2、S.aureus诱导中性粒细胞凋亡情况 在第Oh,2h,4h,6h,8h和10h检测中性粒细胞凋亡,实验组细胞凋亡率相比于对照组均存在极显著差异,差异值分别为3.31%,4.63%,6.77%,8.83%,8.12%和6.35%,其中诱导时间为6h时凋亡率差异最大。 3、基因芯片结果 与凋亡相关的差异表达基因共有4个,其中上调表达的为Bcl-2,它的上调表达倍数为2.4847；下调表达的有IL1-α, {Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|buy Anti-infection Compound Library|Anti-infection Compound Library半抑制浓度|Anti-infection Compound Library价格|Anti-infection Compound Library花费|Anti-infection Compound Library溶解度|Anti-infection Compound Library购买|Anti-infection Compound Library制造商|Anti-infection Compound Library查找购买|Anti-infection Compound Library订单|Anti-infection Compound Library mouse|Anti-infection Compound Library chemical structure|Anti-infection Compound Library分子量|Anti-infection Compound Library molecular weight|Anti-infection Compound Library数据表|Anti-infection Compound Library supplier|Anti-infection Compound Library体外|Anti-infection Compound Library细胞系|Anti-infection Compound Library concentration|Anti-infection Compound Library nmr|Anti-infection Compound Library体内|Anti-infection Compound Library clinical trial|Anti-infection Compound Library cell assay|Anti-infection Compound Library screening|Anti-infection Compound Library high throughput|buy Antiinfection Compound Library|Antiinfection Compound Library半抑制浓度|Antiinfection Compound Library价格|Antiinfection Compound Library花费|Antiinfection Compound Library溶解度|Antiinfection Compound Library购买|Antiinfection Compound Library制造商|Antiinfection Compound Library查找购买|Antiinfection Compound Library订单|Antiinfection Compound Library chemical structure|Antiinfection Compound Library数据表|Antiinfection Compound Library supplier|Antiinfection Compound Library体外|Antiinfection Compound Library细胞系|Antiinfection Compound Library concentration|Antiinfection Compound Library clinical trial|Antiinfection Compound Library cell assay|Antiinfection Compound Library screening|Antiinfection Compound Library high throughput|Anti-infection Compound high throughput screening| IL1-β和IL1-R1,下调表达倍数分别为0.2125,0.2062和0.3082。 4、qPCR验证结果 qPCR结果与芯片结果一致的有ILl-α, ILl-β和IL1-R1三个基因,而Bcl-2与芯片结果相左,表现为下调表达。 通过以上结果能得到如下结论： 1、中性粒细胞在体外环境下能够自发凋亡,存活时间较短； 2、S.aureus能够诱导体外培养的中性粒细胞凋亡,而且在10h的诱导时间内凋亡率的变化是极显著的； 3、调控中性粒细胞凋亡的基因主要为原癌基因Bcl-2, IL1及其受体。 4、芯片结果比较可信。
本研究通过建立亚急性镉染毒诱导小鼠模型,运用HE染色、透射电镜、免疫组化和Western blotting等技术方法,研究了雷帕霉素在抗镉诱导小鼠脑神经细胞氧化应激和凋亡中的保护作用,探讨雷帕霉素抑制镉诱导小鼠脑组织mTOR通路激活抗凋亡机理,为雷帕霉素在防止镉诱导的神经变性疾病提供理论依据和科学指导。结果如下： 1雷帕霉素抑制镉诱导小鼠脑神经细胞氧化应激发挥抗凋亡保护作用 36只成年健康ICR雄性小鼠,实验分为对照组(0.9%生理盐水)、雷帕霉素处理组(按7.5mg/kg体重)、2个CdCl2处理组(分别按0.5和1mg/kg体重)、2个雷帕霉素与CdCl2联合处理组,共6组。实验给药采用腹腔注射方式,实验周期11天。HE染色和透射电镜分别观察脑组织学和超微结构变化,生化分析脑组织ROS、GSH、CAT水平变化,TUNEL染色评价脑神经细胞凋亡状态。结果显示：镉染毒小鼠脑颞叶皮层出现明显的混乱,海马区细胞排列松散,脑神经元线粒体肿胀和内嵴的断裂,而雷帕霉素能够明显削弱和保护这种改变。镉诱发脑组织ROS升高以及GSH含量和CAT活性降低,这被雷帕霉素明显改善。镉诱导大脑皮层和海马组织TUNEL阳性神经细胞数量增加也被雷帕霉素显著抑制。提示雷帕霉素可以通过抑制镉诱导小鼠脑组织神经细胞氧化应激发挥抗凋亡保护作用。

selleck化学药品液面控制 2雷帕霉素抑制镉诱导小鼠脑组织mTOR通路激活发挥抗凋亡保护作用 36只成年健康ICR雄性小鼠,实验分为对照组(0.9%生理盐水)、雷帕霉素处理组(按7.5mg/kg体重)、2个CdCl2处理组(分别按0.5和1mg/kg体重)、2个雷帕霉素与CdCl2联合处理组,共6组。实验给药采用腹腔注射方式,实验周期11天。免疫组化分析4E-BP1磷酸化表现,Western blot分析Akt、S6K1、4E-BP1和caspase-3蛋白表达。结果显示：免疫组化分析显示,镉染毒小鼠大脑皮层及海马CA1区磷酸化4E-BP1(Thr70)阳性细胞数量明显增加,Western PFTα供应商 blot分析展示镉诱导脑组织Akt、mTOR介导的S6K1和4E-BP1磷酸化以及cleaved-caspase-3增加,雷帕霉素明显地抑制这些信号分子改变。提示：雷帕霉素通过抑制镉诱导小鼠脑组织mTOR通路激活发挥抗凋亡保护作用。
内毒素休克(endotoxic shock)是临床危重病中常见的症状,可造成多器官损伤,其中以急性肺损伤(acute lung injury; ALI)常见,进一步可导致急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory

distress syndrome; ARDS)。内毒素休克所致肺损伤其发病机制复杂,治疗棘手,探讨其发病机制并进行合理有效地治疗仍是国内外研究的热点。 我们的前期研究结果表明,血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)在内毒素休克肺损伤时表达增多,可对肺起到一定的保护作用,明确其调节机制对临床制定预防措施具有重要意义。P38MAPK和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases, ERK1/2)信号通路是丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-Activated Protein kinase, MAPK)通路中的重要通路之一,是生物体内重要的信号转导分子,在细胞分化、凋亡及炎症等过程中起重要作用。有研究表明,人肾癌细胞内ERK的激活能诱导HO-1表达增多并抵抗细胞凋亡[2],也有研究发现,体外培养的血管平滑肌细胞内受到外界刺激时,可通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路诱导HO-1表达上调。至于P38MAPK和ERKl/2信号通路是否介导内毒素休克大鼠受损肺脏HO-1的表达,目前尚未见报道。本课题拟通过建立大鼠内毒素休克肺损伤模型并给予P38MAPK和ERK1/2通路的抑制剂来探讨P38MAPK和ERK1/2信号通路对内毒素休克大鼠受损肺脏内HO-1表达的影响。 第一部分：P38MAPK信号通路在内毒素休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织中HO-1表达过程中的作用 目的探讨P38MAPK信号通路在内毒休克诱发急性肺损伤大鼠肺组织中HO-1表达过程中的作用。 方法清洁级雄性SD大鼠48只,体重180g～200g,采用随机数字表法,随机分为4组(每组12只)：对照组(C组)、内毒素休克组(LS组)、内毒素休克+抑制剂组(LSS组)和抑制剂组(B组)。C组和LS组股静脉输注0.1m1DMSO(二甲亚砜),LSS组和B组股静脉P38MAPK阻断剂SB2O35805μmol/kg(溶于0.1m110%二甲基亚砜)；30min后,C组和B组分别给予0.5ml生理盐水,LS组和LSS组分别给予LPS(脂多糖)10mg/kg(溶于0.