以Ⅱ型胶原酶为主消化分离乳鼠窦房结细胞,配合差速贴壁及Brdu

纯化培养。 2.在原有模拟I/R 模型的基础上,通过四唑盐(MTT)比色及碘化丙啶(PI)染色检测细胞活性,选择最佳预适应方案,建立有效的模拟IP 模型。 3.以免疫荧光法标记F-actin、β-tubulin 、desmin、vinculin 等骨架蛋白,通过激光共聚焦显微镜检测模拟I/R 及模拟IP 后乳鼠窦房结细胞骨架蛋白荧光分布及荧光强度的变化,分析模拟IP 对乳鼠窦房结细胞骨架结构的影响。 4.以Ca~(2+)荧光探针负载细胞内Ca~(2+),通过激光共聚焦显微镜定量分析模拟I/R 及模拟IP 后鼠窦房结细胞内Ca~(2+)荧光强度的变化,探讨模拟IP 对乳鼠窦房结细胞Ca2+
目的 由免疫学或非免疫学因素引起的移植物早期损伤可影响移植物短期和长期有功能存活。肾脏缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)在肾移植中不可避免,作为主要的非抗原依赖性因素,严重时可引起移植肾脏失功、甚至受者死亡。随着目前等待移植的患者逐渐增多,临床上越来越多采用边缘供器官。而边缘供肾或无心跳供者,常难避免过长的热缺血时间。研究显示,30分钟的热缺血比24小时冷保存更具破坏性。因此,如何防治肾脏热缺血再灌注损伤对移植肾有功能存活的影响是摆在移植界面前的一大难题。若能揭示热IRI早期损伤机制,在损伤早期即行干预,其防治效果可能最佳。 目前国内外大多采用针对IRI某一损伤途径的拮抗剂的防治策略,如抗氧化剂、抗凋亡药物、黏附分子拮抗剂和选择素拮抗剂等。这些药物可针对IRI的某一特定环节发挥作用,但无法从多个环节同时作用而发挥整体疗效。肾脏IRI是由多途径、多环节共同导致的综合征,因此其理想的防治措施应为多管齐下的治疗药物或措施。与化合物类的西药通常只能针对疾病的一个靶环节不同,我国独有的含有多种成分的中药复方恰恰可同时作用于疾病发生的多个靶环节或多个靶部位。因此,从我国天然药物资源中寻找价廉、高效、低毒、能与免疫抑制剂协同作用的IRI拮
目的:了解非甾体类抗炎药Celecoxib对人卵巢癌SKOV3细胞生长的抑制作用,以及对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响和毒副作用,并初步探讨其抗肿瘤作用机制,评价Celecoxib作为卵巢癌辅助治疗和化学预防新方法的可行性。

3-MA溶解度 方法: 1.采用MTT法、流式细胞技术(flow selleck化学药品液面控制 cytometry,FCM)和缺口末端标记实验(TdT-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end labling,TUNEL),检测不同浓度(10~(-7)mmol/L～10~(-3)mmol/L)的特异性COX-2抑制剂Celecoxib对人卵巢癌SKOV3细胞株增殖和凋亡的影响,同时与不同浓度(10~(-5)mmol/L～10~(-1)mmol/L)的非选择性COX-2抑制剂Aspirin相比较。

2.建立人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成4组:对照组、实验1组(Celecoxib10mg/kg/day)、实验2组(Celecoxib25mg/kg/day)、实验3组(Celecoxib50mg/kg/day)。实验组连续口服给药8周,对照组饮用等容积灭菌蒸馏水,末次用药24小时后处
目的 已经 过去,人们比较重视心肌细胞主动收缩力的产生和影响机制,而忽略了心肌细胞被动生物力学特性。然而,根据近年来大量的研究结果,我们提出在心肌细胞病理情况下,后者可能更为重要。本研究目的就在于观察肥大心肌细胞骨架、生物力学特性的变化规律,并进一步阐明细胞骨架改变对肥大心肌细胞生物力学特性的具体影响及其调节机制。 方法 利用分步消化—差速贴壁法培养新生Wistar大鼠心肌细胞。将肾上腺素加入心肌细胞建立肥大心肌细胞模型后,再分别加入细胞骨架干预剂秋水仙素(Col,细胞骨架微管解聚剂)、细胞松弛素D(Cyto-D,细胞骨架微丝解聚剂)和紫杉醇(Taxol,细胞骨架微管聚合剂)。同时,在培养的肥大心肌细胞中加入Genistein以抑制蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性。光学显微镜下观察心肌细胞搏动频率;利用同步摄像技术和计算机图像分析系统测定心肌细胞收缩前后表面积,心肌细胞收缩幅度以心肌细胞收缩前后表面积的变化表示;通过微管吸吮法检测心肌细胞粘弹性。RT—PCR法检测心肌细胞骨架蛋白(包括微丝蛋白actin、α-actinin、微管蛋白α-tubulin以及结蛋白desmin)mRNA的表达。分别采用免疫细胞荧光化学与Western Blot检测细胞骨架蛋白的分布、密度及含量。同时,我们还通过Western Blot测定了细胞骨架蛋白磷酸化水平。此外,我们采用PTK活性检测试剂盒测定了细胞骨架相关蛋白激酶的活性。 结果 与正常心肌细胞比较,肾上腺素作用后12h心肌细胞的收缩频率增快,收缩幅度增强(P<0.05),其粘性系数显著增大(P<0.01),而弹性系数明显减小(P<0.01)。随着肾上腺素作用时间的延长(加入肾上腺素作用后12h、24h、48h及72h),心肌细胞的收缩频率及收缩幅度均不断增加,粘性系数持续增大,而弹性系数则不断减小;RT-PCR结果显示与正常心肌细胞比较,肥大心肌细胞内细胞骨架各成分mRNA表达显著增强(P<0.