05),部分抑制对NFκB信号通路的激活；在原代单核巨噬细胞内能够部分抑制LPS诱导的单核巨噬细胞THP1促炎因子TNF-α产生(P0.05)。体内实验中,穿膜融合多肽IP55能够部分抑制LPS诱导的肝脏细胞NFκBp65的核转位,降低LPS诱导的小鼠急性肝损伤造成的小鼠死亡率 结论：穿膜融合多肽IP55能有效进入细胞,抑制肿瘤细胞细胞周期进程,抑制DNA合成；在单核巨噬细胞系采用穿膜融合多肽IP55预处理能够显著抑制LPS诱导的促炎因子TNF-α,IL-6以及IL-1β产生；在原代单核巨噬细胞采用穿膜融合多肽IP55预处理能够部分抑制LPS诱导的单核巨噬细胞THP1促炎因子TNF-α产生；在LPS诱导的小鼠急性肝损伤模型采用穿膜融合多肽IP55预处理能够部分抑制LPS诱导的肝脏细胞NFκB p65的核转位以及减少急性肝损伤造成的小鼠死亡。
目的：放射导向的基因治疗是近年来提出的肿瘤治疗新策略，利用射线诱导治疗基因表达，二者协同作用杀伤肿瘤具有可喜的应用前景。但放射线虽然可严格控制治疗基因局限于照射野内表达，但照射野内不免包括瘤周正常组织，而治疗基因在瘤周表达将导致不必要的正常组织损伤。本研究利用肿瘤组织的缺氧特异性，设计一个以放射、缺氧为输入因子的“与门”基因电路，使其在放射、缺氧同时存在的条件下，治疗基因表达才得以启动，使治疗基因表达局限于受照射的缺氧肿瘤组织，增加了基因治疗的肿瘤特异性，最大限度的保护了正常组织。本实验的目的是利用连接天然存在的基因逻辑电路-热休克反应信号转导通路中各个信号反应元件和cArG启动子的辐射诱导特性，通过连接抑癌基因wtp53，构建辐射/乏氧双敏感性调控治疗基因表达的“与门”基因电路。

方法：在GenBank中查找放射敏感性反应元件cArG和酵母热休克反应元件HSE的基因序列，应用DNA合成仪，采用互补寡核苷酸退火方法分别合成双链增强子序列。采用反转录病毒载体plxsn-EGFP为骨架，在转录调控位点插入上述合成序列。应用PCR扩增技术扩增SNF1、HSF1和p53的cDNA序列，然后分别在cArG6的下游插入SNF1和HSF1的序列构成对照载体plxsn-EGFP；将位于HSE4下游的EGFP更换为wtp53的cDNA序列，构成治疗载体plxsn-wtp53。分别采用测序分析、单酶切和双酶切方法鉴定重组载体的构建是否成功。 以及 结果：经测序分析，重组载体的DNA序列结果与预期全相符，与NCBI公布的cArG、SNF1、HSF1、HSE、EGFP和p53序列的ORF进行比对，发现正确性高达100%。而SNF1、HSF1和p53的基因片段经单酶切和双酶切处理后，酶切产物经1%琼脂糖凝胶电泳可见与预期的基因片段大小相符的特异性片段。 一般 结论： 1、测序结果证明重组“与门”基因电路的各个反应元件未发生基因突变。 2、测序和酶切鉴定证明重组“与门”基因电路构建成功。 目的：验证前期构建的重组质粒能否产生“与门”效应，即是否仅在照射和缺氧条件下被激活。 方法：将前期构建的报告载体plxsn-EGFP和治疗载体plxsn-wtp53转染A549细胞株后给予不同处理，荧光显微镜下观察各处理组绿色荧光蛋白的表达，并采用western-blotting方法检测基因电路中各个反应元件SNF1、HSF1和p53的蛋白表达差异。 结果： 1、转染plxsn-EGFP质粒的A549细胞经6Gy照射与1%O_2处理24h后，可见绿色荧光蛋白表达，但表达量较低，48h后EGFP表达量急剧升高，满视野呈片状融合，72h呈持续高表达状态。但经单纯照射或缺氧处理的A549细胞内却未见EGFP表达。

2、western-blotting实验证明SNF1和HSF1蛋白在转染后并经照射与缺氧处理的A549细胞内表达最强（P<0.01），在转染后经照射处理的细胞内表达量也较其他组有明显升高（P<0.01），证明了射线能够激活SNF1和HSF1的表达。但p53表达情况则略有不同，虽然在转染经照射和缺氧处理后的细胞内表达量最高（P
C=N双键作为一类非常重要的官能团,被广泛地应用于天然产物全合成、杂环化合物以及功能材料的合成中。本文对C=N双键的形成及其参与的反应作了比较详细的综述,并在此基础上对两类原位产生C=N双键的反应体系——酰胺活化体系和N-磺酰基烯酮亚胺体系进行了研究,合成了多种具有重要应用价值的化合物,主要内容以及取得的结果如下： 1.发展了两分子酰胺在三氟甲磺酸酐和2-氯吡啶活化下的分子间二聚反应,合成了多取代的脒类化合物。随后又成功地将分子间的反应引入到了分子内,合成了多种对称的和不对称的苯并咪唑类化合物,嘧啶类化合物以及异吲哚酮类化合物,为这些化合物的合成方法作了很好的补充。

ERK inhibitor订单 2.发展在溴化亚铜催化的2-甲基吲哚、磺酰基叠氮和端炔在氩气中的三组分串联反应,得到了3-官能团化的吲哚类化合物Ⅰ。而当我们将该反应置于氧气气氛中时,可以发生氧气参与的2-甲基吲哚、磺酰基叠氮和端炔之间的四组分串联反应,得到化合物Ⅰ的氧化产物——3-官能团化的吲哚类化合物Ⅱ。通过对反应机理的研究,我们提出了一种铜串联催化的机理,同时,对于一些特定的底物,通过一步转化,可以得到连吲哚以及吲哚并环戊烷的骨架。
第一部分PI3K抑制剂对急性肺损伤的保护作用及机制 目的：探讨磷酸肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol3-kinases, PI3K)抑制剂对肉毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)所致小鼠急性肺损伤的保护作用,并比较不同的给药方式、给药剂量、药物种类以及不同时间点的疗效差别。 方法：取6-8周龄的雄性CD-1小鼠,连续3天分别经鼻(0.5mg/kg)或经胃管(50mg/kg)滴入3种不同的P13K抑制齐(?)(LY294002,SHBM009,GDC0941)或PBS,随后经气道滴入LPS(1.25mg/kg)诱导肺损伤,分别在LPS滴入后4h和24h处死小鼠(每组每个时间点10只)。观察这3种P13K抑制剂对LPS刺激后小鼠肺毛细血管通透性、肺组织重量/体重比值、肺组织气体容量(excised lung gas volume, ELGV)、肺泡灌洗液蛋白渗出和炎症细胞浸润、肺泡灌洗液(Brochoalveolar lavage fluid,BALF)炎症因子水平的影响,并比较不同给药方式、不同时间点的疗效差别。A549上皮细胞分别在含有不同浓度SHBM1009(1或10ug/mL)的培养基中培养,然后用LPS(1ug/ml)或PBS刺激。在刺激后3,6,12,24收集培养液上清,4℃离心10000rpm10min,用ELISA方法测定培养液上清中角质细胞源性趋化因子(KC)、白三烯B4(LTB4)的水平。 结果：LPS刺激后4h和24h小鼠肺组织重量/体重的比值明显高于PBS刺激组(P<0.05),具有保护作用。经鼻滴入SHBM1009亦具有明显保护作用(P<0.01)。经鼻滴入LY294002或SHBM1009能明显抑制LPS刺激4h或24h后ELGV的增加(P<0.