We aimed to test if astragalosideⅣmodulates mitochondrial …
Activation of glycogen synthase kinase-3(GSK-3) can cause memory deficits as seen in Alzheimer disease(AD), the most common age-associated dementia,but the selleck化学药品 mechanism is not understood.Here,we found that activation of GSK-3 by wortmannin or transient overexpression of wild type GSK-3β(wtGSK-3β) co…
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N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)介导的神经元兴奋毒性损伤与脑缺血发生密切相关,但生理水平的NMDAR却具有神经保护、抵抗损伤的功能,并且在突触可塑性及突触传递方面发挥重要作用。这种功能的双面性正是使用NMDAR拮抗剂治疗脑缺血、卒中等疾病临床效果欠佳的原因之一。深入了解NMDAR及其介导的促神经元存活或死亡信号通路在缺血性脑损伤中的作用,在不影响促神经元存活以及突触可塑性通路前提下,选择性地阻断NMDAR介导的神经元死亡信号通路,是临床治疗缺血/缺氧性脑损伤、脑卒中等疾病的发展方向。本文就NMDAR激活介导的信号通路在缺血性脑损伤中的作用作一综述。
探讨苯丙胺对PC12细胞的神经毒性作用和机制。将PC12细胞分为4组:空白对照组,苯丙胺组(2

mmol/L),苯丙胺加神经生长因子(NGF)组,苯丙胺加SB216763组。2

mmol/L苯丙胺可引起细胞突起变短,胞体变圆。3.0 mmol/L苯丙胺可照成细胞突起基本消失。苯丙胺组P-AKT的表达减少,GSK-3β
为研究Wnt经典及非经典途径对人外周血树突状细胞(DCs)免疫耐受调节作用,取健康志愿者外周血分离出单个核细胞,采用贴壁培养法得到单核细胞,经细胞因子-重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素
目的:研究细胞内信号分子糖原合成酶激酶-3B在D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导急性肝衰竭中的作用。方法:以C57BL/6小鼠为研究对象,以D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导急性肝衰竭,建立急性肝脏损伤模型。动物实验组包括:阴性对照组,模型组,SB216763干预组(SB216763溶于DMSO,25克/千克,腹腔注射,缺血前2小时给予)。通过免疫印迹技术检测肝脏组织中糖原合成酶激酶-3β磷酸化的表达;检测血清谷丙转氨酶评价肝脏功能;组织病理学观察肝脏组织的损伤情况;实时定量PCR检测细胞炎症因子的基因表达。结果:通过免疫印迹分析,发现在急性肝损伤的进展过程中,糖原合成酶激酶-3β被去磷酸化而活性显著激活…
[目的]:探讨细胞内信号分子GSK3β在内质网应激诱导肝细胞凋亡中的作用。[方法]:以小鼠肝癌细胞株Hepa 1细胞为研究对象,利用化学药物Tunicamycin(20μg/ml)为内质网应激诱导剂,建立肝细胞凋亡模型。利用化学药物SB216763特异性抑制GSK3β活性,在Tunicamycin诱导细胞凋亡前1小时给予干预处理。利用Acetoxymethyl(AM)/碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)对活细胞/凋亡细胞进行检测;再利用培养细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)的检测评价细胞凋亡情况;利用免疫印迹方法检测p-GSK3β蛋白、内质网应激相关凋亡蛋白GRP78,CHOP,Cas…
Context:Our previous studies indicated PLX4032化学结构 that reduced

form of vitamin C(L-ascorbic acid, AA) induced the production of both steroid and peptide hormones in human choriocarcinoma cell line.Here,we investigated the roles of oxidized PF-02341066 价格 form of vitamin C, dehydroascorbic acid(DHA),in placental steroidoge…
目的探索GSK-3β是否参与氯胺酮成瘾及GSK-3β抑制剂是否影响大鼠氯胺酮自身给药,进一步探讨GSK-3β参与氯胺酮精神依赖的机制。方法实验1:24只清洁级雄性SD大鼠进行颈静脉插管手术,手术恢复后随机分为两组,第1组大鼠采用固定频率FR1程序进行氯胺酮静脉自身给药训练(0.5mg·kg~(-1)/infusion),每天4 h,给药次数稳定后转入自身给药维持期,仍然采用FR1程序,每天2 h,维持14 d;第2组大鼠每天放置入静脉自身给药笼,置于笼中的时间与第1组相同,但不给予氯胺酮。自身给药维持期最后一天给药结束后2 h,将大鼠处死并断头取脑,用Western blot的方法检测纹状体、…
1线粒体ATP敏感钾通道与心肌保护概述线粒体ATP敏感性钾通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel,mitoKATP)是一种配体门控型K~+通道。mitoKATP是多种心肌保护途径的终末效应器,其开放可以使心肌线粒体膜电位降低;调节线粒体Ca~(2+)浓度,防止线粒体钙超载;减少细胞活性氧(ROS)的生成,减轻缺血-再灌注(IR)损伤;调节线粒体基质容积,激活电子传
Cocaine sensitization and reward are reported to be under the influence of circadian rhythm.However,no previous studies have reported the brain areas that play a role as modulators and underlie the mechanism of diurnal variations in cocaine reward.We examined(i) the circadian rhythm of glycogen synt…
Objective Local anesthetics Udocaine is recommended as first-line treatment for localized peripheral neuropathic pain.

研究对象：胎盘组织。选取2008年7月至2010年7月在郑州大学第二附属医院妇产科住院分娩的孕产妇共95例,分妊娠期高血压疾病组和正常对照组,如下： (1)正常对照组：随机选择同期在郑州大学第二附属医院妇产科住院分娩的正常孕妇20例。 GSK-3抑制剂 (2)妊娠期高血压疾病组(HDCP):75例,又可分为三组,其中妊娠期高血压20例、轻度子痫前期25例、重度子痫前期30例。 研究对象筛选标准：即往健康,均为单胎妊娠,无其他妊娠合并症(如妊娠期糖尿病、慢性内外科合并症等)及并发症(如胎膜早破、宫内感染、前置胎盘、胎儿生长受限等),均以剖宫产终止妊娠。诊断标准及分类标准参照乐杰主编人民卫生出版社出版《妇产科学》第7版。

2.研究方法： (1)所有标本均采用HE染色及免疫组化染色,采用图像分析方法检测各组胎盘中IISP70、P38MAPK、Caspase3的表达及定量。 (2)实验结果处理运用SPSS17.0统计软件系统分析,以P0.05)。 3.胎盘组织中HSP70的表达：与正常妊娠对照组相比,妊娠期高血压疾病组中HSP70的表达明显升高(P<0.05),并随着疾病的严重程度呈上升的趋势；其中,轻度子痫前期胎盘中HSP70表达明显高于妊娠期高血压组,P<0.05；重度子痫前期高于轻度子痫前期组,P<0.05),并随着疾病的严重程度呈上升的趋势；其中,轻度子痫前期胎盘中P38MAPK的表达高于妊娠期高血压组,P<0.05；重度子痫前期高于轻度子痫前期组,P<0.05),并随着疾病的严重程度呈上升的趋势；其中,轻度子痫前期胎盘中Caspase3的表达高于妊娠期高血压组,P<0.05；重度子痫前期组高于轻度子痫前期组,P
背景 妊娠期糖代谢异常是指妊娠期内首次发生或发现的糖代谢紊乱,主要包括妊娠期糖耐量受损(GIGT)和妊娠期糖尿病(GDM)。无论GIGT还是GDM都对母婴危害极大。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)系统是细胞内重要信号转导系统,参与细胞的生长、分化、凋亡等生理病理过程。P38MAPK是其重要成员,多种应激物质均可引起P38MAPK的表达变化,产生多种生物学效应,对机体带来不利影响。国内外大量研究发现,P38MAPK在2型糖尿病心脏、肾脏的氧化应激损伤、细胞凋亡中具有促进作用,但在妊娠期糖代谢异常疾病中研究甚少。

目的 本实验通过建立妊娠期糖代谢异常大鼠模型,初步探讨P38MAPK在妊娠期糖代谢异常大鼠心脏、肾脏组织中的表达变化及与细胞凋亡的关系。 材料与方法 选取雌性SD大鼠40只,雄性10只,体重190-220g,将雌性大鼠分为高糖高脂饮食-孕鼠组(sucrose and fat diet pregnant rat, SFP)和未孕组(sucrose MK-1775分子重量 and fat diet virgin rat, SFV),普通饮食-孕鼠组(normal diet pregnant rat, NP)和未孕组(normal diet virgin rat, NV),相应组受孕。四组大鼠于受孕组妊娠第18天行口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test, OGTT),妊娠第20天麻醉后心内取血,检测空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)等指标,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。心脏取血后,脱臼法处死大鼠,取心脏、肾脏组织,一份行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心、肾组织中P38MAPKmRNA的表达水平,一份做石蜡切片用于细胞凋亡原位检测(TUNEL检测法),计算凋亡指数；同时取胰腺组织行苏木精-伊红(HE)染色,光镜下观察组织病理变化。经SPSS10.0统计学分析软件进行数据分析,比较四组之间空腹血糖,空腹胰岛素,总胆固醇,甘油三酯,胰岛素抵抗指数,心脏、肾脏组织中P38MAPK的表达水平、细胞凋亡等变化,分析四组之间P38MAPK的表达水平有无差异及与细胞凋亡的相关性。 selleck中国 结果 (1)SFP组的空腹血糖、血脂、胰岛素水平、胰岛素抵抗指数与其他3组相比(NP组,NV组,SFV组)明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。口服葡萄糖耐量试验提示SFP组的血糖在0min,30min,60min,120min增高,与其他三组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01)；在SFV组和NP组,P38MAPKmRNA的表达水平与NV组相比也有所升高,差异有统计学意义(P0.05)。

(3) TUNEL原位凋亡检测结果显示：在心脏,肾脏组织中,凋亡指数从SFP组,SFV组到NP组均依次降低(2.27±0.13,1.46±0.13,1.44±0.14,P<0.05；2.34±0.12,1.44±0.13,1.41±0.15,P<0.05),在NV组几乎无凋亡细胞存在。SFP组凋亡指数与SFV组,NP组之间相比,差异具有统计学意义(P0.05)。 (4)单因素相关分析显示,在心脏、肾脏组织中,SFP组、SFV组、NP组,P38MAPKmRNA的表达量与细胞凋亡指数均呈正相关,相关指数r依次降低(0.925,0.615,0.531；0.946,0.642,0.547)。 结论 1.高糖高脂饮食喂养的妊娠期大鼠,存在与人类妊娠期糖代谢异常的类似改变,可作为研究妊娠期糖代谢异常疾病的模型使用。 2.正常大鼠经高糖高脂饮食喂养,心、肾组织中P38MAPK表达水平升高,出现细胞凋亡,二者呈正相关,提示糖脂毒性、氧化应激引起的P38MAPK和细胞凋亡可能共同参与了大鼠心、肾损伤。 3.妊娠期大鼠经正常饮食喂养,存在生理性胰岛素抵抗；心、肾组织中P38MAPK表达水平升高,出现细胞凋亡,二者呈正相关,提示生理性胰岛素抵抗、P38MAPK和细胞凋亡可能参与了妊娠大鼠心、肾的细胞损伤。 4.

651,P<0.001、P<0.001、P<0.001和P<0.001和P
目的 1.建立稳定有效的脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外培养方法,比较原代人脐静脉内皮细胞与人脐静脉内皮细胞株HUVEC-CS及EA.hy926的VWF、CD31、CD34表面抗原表达情况。

2.采用过氧化氢(H202)体外诱导培养法,构建HUVECs氧化应激模型。观察体外正常培养HUVECs Visfatin的表达及氧化应激损伤对其表达的影响。 3.观察Visfatin对体外正常培养及氧化应激损伤HUVECs的凋亡及多种细胞因子表达的影响,探讨其发挥效应的可能信号通路。 4.探讨血浆Visfatin的影响因素及其与冠心病、糖代谢异常的相关性。应用eZscan系统和实验室方法对冠心病患者进行糖代谢异常的筛查,探讨eZscan系统的临床应用价值和前景。 方法 1.用0.1%Ⅱ型胶原酶消化分离原代人HUVECs,加入含内皮细胞生长因子的M199完全培养基内培养,]HUVEC-CS及EA.hy926细胞株用DMEM完全培养基培养。0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化传代,三种细胞在倒置相差显微镜下观察形态学,免疫荧光染色法测定VWF表达,流式细胞仪检测CD31、CD34表面抗原表达。 RAD001数据表 2.①体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,将实验细胞分为对照组、模型组,在剂量效应干预中,模型组分为6个不同浓度梯度(H202终浓度分别为100、200、400、600、800、1OOOμmol/L),筛选H202最佳作用浓度；在时间效应干预中,以筛选出的H202最佳作用浓度分别培养细胞6、12、24h,筛选最佳作用时间。收集各组细胞进行相关检测：倒置显微镜及透射电镜观察细胞形态学变化；采用细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测细胞存活率；DCFH-DA荧光探针和流式细胞技术(FCM)检测细胞内活性氧水平；流式细胞技术TUNEL法检测细胞凋亡率和增殖指数。②体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,将实验细胞随机分为正常对照组和H202处理组(H202终浓度分别为50、100、200、400、1000μmol/L),培养1、2、4、24h分别进行检测。Vestern

blot检测visfatin蛋白水平的变化,Real time PCR测定Vistafin基因表达。 3.体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,将实验细胞随机分组后予Visfatin、SB203580、LY29004相应干预处理,流式细胞仪TUNEL法检测细胞凋亡率和细胞周期,ELISA定量检测IL-6、MCP-1、VCAM、VEGF、iNOS浓度。 4.选取160例冠心病患者,根据患者是否合并糖代谢异常,将其分为冠心病合并糖代谢异常组及单纯性冠心病组；同期选择无器质性心脏病的糖代谢异常患者50例；同期选取50例健康人群作为正常对照组。空腹测定所有受试者实验室指标及血浆Visfatin水平,并进行baPWV及ABI检测,应用eZscan系统(糖尿病及并发症风险早期检测系统)对经冠脉造影确诊的冠心病患者进行糖代谢异常筛查,并将检测结果与实验室检查结果进行比较,评价其灵敏度和特异度。 结果 1.①原代HUVECs在接种24h后完全贴壁生长,呈多角形,单个或成团存在,4-5天后融合呈铺路石样镶嵌排列。HUVEC-CS和EA.hy926细胞为圆形或扁平形,生长速度快,2天左右即可铺满,融合后呈典型的“鹅卵石”状排列。②原代HUVECs及EA.hy926细胞的VWF免疫荧光染色呈阳性反应,大部分细胞内可见绿色荧光,HUVEC-CS细胞则染色呈阴性。HUVEC-CS细胞CD31阳性表达率(%)(4.70±0.46)显著低于原代HUVECs 不 (77.93±0.25)或EA.hy926细胞(78.23±0.40),差异均有统计学意义(P均0.05)。原代HUVECs CD34阳性表达率(%)(43.1±0.20)显著高于HUVEC-CS细胞(1.20±0.40)或EA.hy926细胞(0.97±0.40),差异均有统计学意义(P均0.05)。 NU7441 2.①与正常组比较,H202模型组HUVECs细胞形态学明显改变,细胞体积缩 小,胞膜皱缩,细胞轮廓不清,形状不规则,细胞排列紊乱,部分细胞上浮,典 型单层铺路石样细胞排列受到不同程度的破坏。梭型细胞减少,出现球形或椭圆形细胞,球形或椭圆形细胞数量随作用时间延长和剂量增加而增多,表明H202对HUVECs具有损伤作用。CCK-8显示随着H202作用浓度的增加和时间的延长,HUVECs存活率逐渐下降,呈现一定的量效和时效关系。DCFH-DA荧光探针和流式细胞技术(FCM)检测H202模型组细胞内有较高的活性氧水平。流式细胞技术TUNEL法观察证实H202能够诱导HUVECs发生凋亡,随着H202作用浓度的增加细胞凋亡率明显增加。②体外正常培养的HUVECs表达Visfatin。予不同浓度H202(50、100、200、400、1000μmol/L)作用HUVECs不同时间(1、2、

4、24h),结果发现,在低浓度H202(50、100μmol/L)作用时,Visfatin的表达随H202作用时间延长而增加(P<0.05),但H202作用时间延长后(≥4h),随H202作用浓度增加Visfatin的表达减少(P0.05)。不同浓度Visfatin处理正常培养细胞24h/48h后,IL-6,MCP-1, VCAM, VEGF, iNOS表达较正常对照组均增加(P均<0.001),但3种浓度Visfatin处理组间两两比较,随着Visfatin浓度递增,细胞凋亡率反而逐渐增加,任意两组间均有统计学差异(P<0.05)。Visfatin预处理细胞24h后,氧化应激损伤HUVECs的增殖指数较H202对照组上升,差异有统计学意义(P0.05)。Visfatin100ng/ml、400ng/ml、800ng/ml预处理细胞48h不同处理组的细胞增殖指数较H202对照组上升,差异有统计学意义(P0.05),各细胞因子表达随Visfatin浓度升高而增加,差异均有统计学意义(P<0.05),经两两比较,各细胞因子表达随Visfatn浓度升高而增加,任意两组间差异均有统计学意义(P<均0.05),除MCP-1外,这2种不同的通路抑制剂的作用差异具有统计学意义,p38MAPK抑制剂的作用更为显著(P<0.05)。冠心病不同临床类型(慢性稳定性心绞痛、不稳定性心绞痛、急性心肌梗死)血浆Visfatin水平递增性升高(P<0.05),冠心病合并糖代谢异常患者Visfatin显著高于未合并糖代谢异常冠心病患者(P<0.

07倍,提示SKBR3/TDR对MK-2206无耐药性。不同浓度的MK-2206与trastuzumab合用后,SKBR3和SKBR3/TDR的IC50均有不同程度的下降,但以SKBR3/TDR的下降更明显,差异具有统计学意义(P0.05)(图7)。提示MK-2206不增加trastuzumab在SKBR3/TDR细胞内的蓄积。3. Western Blot检测结果显示MK-2206可以下调p-PRAS40-Thr246和p-AKT-Thr308蛋白的表达。与对照组相比,不同浓度的MK-2206处理SKBR3/TDR和SKBR3细胞后,均可以下调p-PRAS40-Thr246和p-AKT-Thr308蛋白的表达,且呈剂量依赖性(图8、图9),实验组与对照组之间差异有统计学意义(P<0.01)。这些结果表明了联合应用trastuzumab和MK-2206的有效性。结论通过建立裸鼠HER2阳性乳腺癌模型及相关动物实验,结果提示：拮抗p-PRAS40-Thr246能够减缓裸鼠乳腺肿瘤的生长,对肿瘤生长有明显抑制作用。MK-2206与trastuzumab联合应用可以下调p-PRAS40-Thr246。P-PRAS40-Thr246抑制剂与trastuzumab联合应用,可有效逆转裸鼠乳腺癌trastuzumab耐药。P-PRAS40-Thr246是一个新型的乳腺癌治疗靶点,为逆转trastuzumab耐药的研究提供帮助。
目的：肝细胞肝癌(Hepatocellular

PLX-4720溶解度 carcinoma,HCC)是肝脏最常见的恶性肿瘤之一,在男性癌症死亡率中居于第二位。肝脏切除、肝移植、局部消融等治疗方式使肝癌的治愈成为可能,但多数肝癌患者有肝硬化背景,在发现时已经处于病程的中晚期,仅有30%～40%的患者适合该治疗,且其术后5年的复发率高达70%。介入化疗栓塞等只能暂时缓解肝癌患者的临床症状,并不能有效显著改善患者的预后。索拉菲尼(sorafenib),一种多蛋白激酶抑制剂,具有抗血管生成和抑制肿瘤细胞增殖的双重作用,是治疗进展期肝癌的一线用药。但是由于肝癌复杂的生物学特性,通过其内在的或获得的机制造成对索拉菲尼的耐药,导致索拉菲尼治疗进展期肝癌效果极其有限。但索拉菲尼治疗失败后尚无有效的化疗药物可以应用,因此探讨索拉菲尼耐药的机制对于改善进展期肝癌患者的预后显得迫切和重要。在中国,大约75%的肝癌患者患有乙型病毒性肝炎,持续的慢性肝脏损伤刺激星形细胞和成纤维细胞,形成肝脏的纤维化,纤维化最终发展为肝硬化。肝硬化破坏了肝脏正常的血液供应,导致肝脏血流循环减少,形成局部缺氧的微环境；从肝脏一般性腺瘤样增生、不典型腺瘤样增生到早期癌的演变中,细胞的快速增殖也会造成肿瘤局部缺氧。索拉菲尼在抑制肿瘤新生血管生成的同时,又加重了肿瘤内部的缺氧。而肿瘤内部的缺氧微环境(hypoxic

microenvironment)加剧了肿瘤细胞基因的不稳定性并诱导肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)相关蛋白的表达,造成肿瘤对化疗和放疗的耐受。缺氧诱导因子(Hypoxia-inducible factor, HIF)是肿瘤缺氧反应中的关键因子,其通过调控肿瘤能量代谢、新生血管形成、增殖、浸润和转移等相关基因的转录和表达,决定着肿瘤的发生发展。因此下调缺氧诱导因子、促进它的降解或抑制它的功能等,都可以阻断缺氧诱导反应,达到抑制肿瘤的效果。HIF是由α亚单位和p亚单位组成的异构二聚体,属于碱性螺旋-环-螺旋-PAS转录因子家族成员。HIF主要包括HIF-1α和HIF-2a,尽管二者有48%的同源氨基酸序列,结构相似,但其不同之处正在不断被发现。HIF-la在急性缺氧环境下被激活并稳定表达,但随着缺氧时间的延长其蛋白表达水平逐渐降低直至消失,相反HIF-2a的含量随着缺氧时间的延长持续增加。缺氧诱导的基因如VEGF在急性缺氧期是HIF-1a的靶基因,而随着缺氧时间的延长主要由HIF-2a激活。与HIF-1a广泛分布不同,HIF-2a仅能在特定细胞如肝细胞内表达。肝细胞内的血管生成素基因主要由HIF-2a调控,而灭活HIF-2a可以抑制VHL相关肝血管瘤的生长。同HIF-1a相比,HIF-2a可能在肝癌发生发展中发挥更加重要作用,是治疗肝癌的一个潜在靶点。就HIF-2a在肝癌发生发展中的作用人们做了初步的探讨,多数研究认为HIF-2a促进肝癌的发生发展,然而也有少数研究提示HIF-2a对肝癌的进展具有负调节作用,表明HIF-2a在肝癌发生发展中的作用存在争议,这从另一方面也反映了HIF-2a在肝癌发生发展中的作用机制是复杂的。研究表明,肿瘤特异性的缺氧微环境可能与索拉菲尼的耐药相关,但其确切的机制尚未完全阐明。因此,我们设计实验研究HIF-2a在肝癌发生发展中的作用,探索缺氧微环境下索拉菲尼的耐药机制,这样不仅可以进一步完善肝癌发生发展分子机制理论,而且有望为提高索拉菲尼治疗肝癌的疗效提供潜在的靶点。方法：1.应用免疫组织化学及免疫印迹方法检测肝癌肿瘤组织、癌旁组织以及肝癌细胞系HepG2、Bel-7402、Huh-7、SMMC-7721中HIF-2a蛋白的表达,分析HIF-2a蛋白表达水平与肝细胞肝癌临床病理特征之间的关系。2.既往的研究表明：缺氧培养的肝癌细胞系同常氧培养相比其索拉菲尼IC50显著增高,提示缺氧增加了肝癌细胞系对索拉菲尼的抵抗。为进一步研究是HIF-1a还是HIF-2a影响了缺氧微环境下肝癌对索拉菲尼的治疗效果,本课题应用Western

MDV3100数据表 Caspase inhibitor blot观察索拉菲尼治疗前后肝癌细胞系中HIF-1α、HIF-2a的表达。体外实验和裸鼠成瘤实验观察HIF-2a封闭前后索拉菲尼对肿瘤细胞增殖能力的影响,探讨HIF-2a在索拉菲尼耐药中的作用。3.采用细胞免疫化学和TOP-Flash荧光素酶报告实验观察HIF对Wnt/β-catenin经典信号通路活性的影响。4.采用基因干扰技术检测HIF-2α封闭前后及c-Myc封闭前后Wnt/β-catenin通路中关键蛋白的表达,分析缺氧环境中HIF-2α表达与Wnt/β-catenin信号通路间的关系。Western blot分析肝癌移植瘤模型中对照组、索拉菲尼治疗组、HIF-2α shRNA组及联合组中HIF-2α、Wnt/β-catenin通路中关键基因的表达,深入探讨缺氧微环境中索拉菲尼耐药的分子机制。结果:1. Western blot分析发现,肝癌组织中HIF-2α的蛋白表达水平明显高于癌旁组织中HIF-2a的蛋白表达水平(P<0.05)。与HIF-1α不同,HepG2细胞经索拉菲尼处理后其HIF-2α蛋白的表达量较未处理组增加1.7倍,经统计学检验,具有统计学意义(P<0.

316±0.069)；NS组平均胶原面积比是(0.317±0.073)；LK组平均胶原面积比是(0.63±0.102)；HK组平均胶原面积比是(0.737±0.066).LK组平均胶原面积比,较NS组显著增多(平均差±标准误：0.321±0.050,P=0.0001,P0.05). 6.大鼠膀胱组织免疫组化 各组大鼠膀胱免疫组化显示E-cadherin (E-钙粘蛋白)主要表达于膀胱粘膜上皮层,其他固有层、粘膜下疏松结缔组织层、平滑肌层未见明显表达,血管内皮可见少量表达。对大鼠膀胱粘膜层E-cadherin的表达强度进行量化分析。E-cadherin的平均光密度值,NS组为(0.3656±.0678)；LK组为(0.4380±0.0456)；HK组为(0.5668±0.1972).HK组和NS组的平均光密度值比较,无显著性差异(平均差±标准误：0.2013±0.0933,P=0.204,P>0.05)；LK组和NS组比较,平均光密度值无统计学差异(平均差±标准误：0.0724±0.0365,P=0.221,P>0.05)；HK组和LK组比较也无统计学差异0.1289±0.0905,P=0.475,P>0.05).NS.

Selleck PLX4032 LK, HK三组间比较无统计学意义(F=3.422,P=0.067,P>0.05) 7.大鼠肾脏HE染色结果 NS组大鼠的肾脏结构形态均正常,无水肿变形,无淤血或管型。HK组和LK组：肾间质和肾小球周围可见大量炎症细胞浸润；大量肾小管水肿,广泛中重度空泡样改变,多处小灶状小管坏死；肾小球空化,肾小球萎缩,甚至肾小球闭锁,肾小球壁层上皮增生；肾间质有纤维条索形成。 8.大鼠肾脏马松染色结果 LK组和HK组比较NS组可见肾间质胶原染色深,提示经过氯胺酮长期作用,肾间质发生胶原沉积增加导致纤维化。HK组肾脏间质纤维染色深且可见纤维化条索形成。半定量分析肾间质平均胶原面积比结果显示,三组间比较存在显著性差异(F=29.293,P=0.00010.05),提示LK组(低剂量)肾间质胶原沉积和正常肾间质无明显区别。

9.大鼠肾脏Tunel凋亡检测结果 在肾小球部分。肾小球凋亡细胞数的半定量结果,HK组肾小球平均阳性细胞数是(30.9200±3.21123)；LK组是(40.1600±8.64916)；NS组是(16.6400±4.27411),三组间相互比较具有统计学差异(F=20.372,P=0.00010.05); LK组和NS组比较,具有显著性差异(平均差±标准误：23.52000±4.31453, P=0.0050.05)：HK组和LK组比较,无明显差异(平均差±标准误：-72.40000±26.63857, P=0.056>0.05); LK组和NS组比较,具有显著性差异(平均差±标准误：129.60000±26.63857, P=0.0010.05); LK组和NS组比较,有统计学差异(平均差±标准误：123.40000±39.75458,P=0.027HK:9.60>NS:3.60) 扣除肾小球部分后计算每高倍镜视野下平均肾小管阳性细胞数可见,HK组和LK组肾小管阳性凋亡细胞数均多于NS组。LK组肾小管凋亡更加显著。提示长期滥用氯胺酮可诱导肾小管和肾小球细胞凋亡,似乎LK组诱导凋亡更明显。 可能 结论 通过动物实验研究结果得出,长期滥用氯胺酮的大鼠,会出现体重减轻,尿频,血尿,尿常规异常,肾功能异常,膀胱组织发生炎症和纤维化,肾脏细胞发生凋亡,肾间质纤维化等变化。根据前期课题组的实验条件及本次重复的膀胱结果显示,我们成功建立起KC大鼠模型,我们推测氯胺酮及其代谢产物在肾脏排泄时,直接作用于大鼠肾脏滤过系统,导致了肾脏组织细胞凋亡以及肾功能的变化。可能在氯胺酮滥用患者中,从一开始氯胺酮及其代谢产物就对肾小球滤过系统如足细胞、肾小管上皮细胞等产生毒理作用,导致肾小管,肾间质,肾小球等发生病变。 我们发现肾脏间质、肾小球周围等发生炎症细胞浸润,侧面反映了机体免疫系统参与肾损害的修复。推测在早期滥用氯胺酮中这种损害和修复处于动态平衡中,未被打破,因此肾功能并未出现明显变化。这与在临床上早期发生KC的病例大多数出现LUTS症状,膀胱损害明显,而只有少数患者出现肾功能损害基本一致,也就是说当出现KC时,氯胺酮及其代谢产物对肾脏的毒理作用也是正在进行中。至于为什么上尿路发生损害表现较滞后,这可能与氯胺酮及其代谢产物在肾脏滤过滞留时间长短有关。当严重KC患者发生肾积水或者膀胱输尿管返流时出现肾梗阻性损害则进一步加重氯胺酮的作用,最终导致肾功能不全,甚至肾衰竭。

Verteporfin 因此在临床上,我们对诊断KC的患者早期就应该树立肾脏损害的意识,并对肾脏进行保护。在患者肾功能未出现明显异常时,即应加强补液同时应用利尿剂,促进氯胺酮及其代谢产物快速排出体外,缩短它们在肾脏和整个泌尿道滞留的时间,可减少它们对泌尿系统的损害作用。在已经出现肾功能异常的患者时亦应早期行导尿,抗纤维化等治疗。当然滥用氯胺酮对患者体内多个系统都是有损害的,如肝脏,神经系统,心血管系统等,因此多学科协作、综合及个体化的治疗也是很有必要的。关于氯胺酮对泌尿系损害的机制仍需要进一步研究。
目的： ①探讨rhIL-24蛋白与顺铂联合体外对人卵巢癌SKOV3细胞、人卵巢癌耐顺铂株SKOV3/ddp细胞的抑制效应； ②探讨rhIL-24蛋白联合顺铂体外诱导人卵巢癌SKOV3细胞、人卵巢癌耐顺铂株SKOV3/ddp细胞凋亡效应、细胞周期及凋亡基因的变化； ③探讨腺病毒介导的白细胞介素-24基因与顺铂联合体外诱导人卵巢癌SKOV3细胞的抑制效应及细胞凋亡情况变化。 方法： ①用rhIL-24、DDP及rhIL-24+DDP作用于SKOV3细胞、SKOV3/ddp细胞，用Ad-hIL-24、DDP及Ad-hIL-24+DDP作用于SKOV3细胞抑制细胞生长； ②应用CCK-8法检测SKOV3细胞、SKOV3/ddp细胞增殖情况，计算抑制率； ③应用流式细胞仪检测SKOV3细胞、SKOV3/ddp细胞凋亡及细胞周期的变化； ④应用多基因遗传表达分析SKOV3细胞、SKOV3/ddp细胞凋亡多基因的变化。 结果： ①SKOV3细胞、SKOV3/ddp细胞在适宜条件下培养于第3天进入对数生长期； ②rhIL-24蛋白能抑制SKOV3细胞、SKOV3/ddp细胞生长，48小时的抑制率分别为30.7%、21.8%，对正常细胞无毒性作用；联合DDP组抑制率分别为35.3%、32.

5 Hz、1 Hz和2 还有 Hz,加载时间均为24 h,以0 Hz,即无加载频率、持续加载10 %张应变的VSMCs为对照组。采用免疫细胞化学法检测VSMCs形态和排列的变化;RT-PCR和Western blotting检测表型标志分子α-肌动蛋白(α-actin)、肌球蛋白重链(SM1/2)、肌动蛋白相关蛋白SM22α和调宁蛋白(h1-calponin)的mRNA和蛋白水平的变化;抑制剂或RNA干扰阻断可能的信号调节分子的活性或表达,包括p38、细胞外信号调节激酶1/(2extracellular signal-regulated kinases, ERK1/2)、蛋白激酶B(PKB/Akt)和Rho-鸟苷酸解离抑制因子(Rho-guanine nucleotide dissociation inhibitor, Rho-GDI alpha),研究了不同频率张应变对VSMCs表型转化的影响及其调节机制。 结果显示:①不同频率张应变可以诱导VSMCs频率依赖的表型转化,1

Hz的张应变明显促进了VSMCs由合成表型向收缩表型转化;②张应变可以频率依赖地激活p38、ERK1/2和PI3K/Akt的活性,其中以频率为1 Hz的张应变作用最强;③p38在不同频率张应变调节的VSMCs转化过程参与信号转导作用,而ERK1/2和PI3K/Akt无作用;④张应变诱导成熟VSMCs的表型转化是张应变直接作用于细胞的结果,并非是细胞旁分泌的作用;⑤Rho-GDI alpha在1 Hz张应变诱导的VSMCs表型转化中起负调控作用。 上述结果表明,不同频率张应变可以诱导体外培养的合成表型的VSMCs转化为收缩表型,其中以1 Hz的机械牵张作用最强,这个过程与p38信号通路和Rho-GDI alpha调节因子密切相关。结果提示,在体情况下血管应有其最适频率,防止VSMCs由收缩表型向合成表型过度转化,以维持血管结构和功能的稳定。此外,在血管组织工程的种子细胞(如VSMCs)种植过程,可以通过对其施加一定的频率以调节VSMCs的表型转化,提高种植效果。
线粒体偶联因子6在糖尿病中的临床意义及其机制研究 研究背景 糖尿病患者心血管疾病的发病率和死亡率显著增加，多种心血管疾病的危险因素在糖尿病患者中集簇，以致疾病早期就存在严重的内皮细胞损伤，导致内皮细胞旁／自分泌功能发生病理性改变，各种异常分泌的生物活性物质相互作用，进一步加剧内皮功能不全。内皮依赖性舒张血管功能受损是内皮功能不全的核心环节，在糖尿病及其血管并发症中尤为突出。 时间 在内皮源性舒张血管物质中，前列环素(PGI_2)广泛存在于各组织器官中，具有潜在的重要心血管调控作用。糖尿病患者血浆PGI_2水平异常，可能是心血管疾病发生的重要因素之一。既往研究发现糖尿病及高血糖刺激可改变环氧化酶活性，致使PGI_2合成与释放减少，而应用PGI_2类似物防治糖尿病心血管并发症具有明确的疗效。但过去对糖尿病中PGI_2异常及其调控机制的认识不够深入，人们推测并一直在寻找机体内源性PGI_2抑制物质，期望以此为突破口深入揭示糖尿病及其心血管并发症的发病机制，以寻找新的治疗靶点。

偶联因子6(CF6)是新近发现的、唯一的PGI_2内源性阻滞剂。早期仅认为CF6是线粒体ATP合酶柄部的一个结构亚基，与能量转导有关。最近发现CF6也大量存在于内皮细胞的表面，在剪切力或肿瘤坏死因子等因素刺激下，释放进入血液循环。动物实验证实CF6通过阻滞磷脂酶A_2(PLA_2)等途径，抑制PGI_2合成；临床研究发现CF6在高血压病、急性心肌梗死等心血管疾病中显著升高，与vW因子等内皮损伤标志物水平显著相关。CF6以循环激素样方式产生收缩血管、升高血压及提高心率等作用。上述研究发现说明循环CF6水平增加与内皮细胞损伤有关，并可能与内皮源性PGI_2降低有潜在联系。糖尿病患者存在严重的内皮损伤及功能不全，是其心血管并发症发生的基础，其中CF6循环水平的变化，对PGI_2的影响及其与糖尿病相关临床危险因素的关系目前尚不清楚；同时CF6的分泌调节机制有待阐明。 研究目的 1．本工作拟在2型糖尿病(T2DM)患者中测定其血浆CF6和PGI_2水平，分析二者与糖尿病临床表现的关系，以探讨CF6在糖尿病中的病理生理意义。 确认细节 2．在离体培养的原代人脐静脉内皮细胞(HUMECs)中，进一步研究糖尿病相关危险因素对CF6的影响。观察高糖对CF6合成、分泌的作用以及高糖状态下蛋白激酶C(PKC)及促分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路分子的活化及其对CF6分泌的可能影响，以期探讨影响临床糖尿病患者循环CF6水平的可能机制。

对象与方法 根据WHO制定的糖尿病诊断标准，自2005年4月至11月期间，收集连续入院就诊的T2DM患者，依照拟定的纳入标准和排除标准，共有70例患者符合要求，允许纳入本研究最终分析阶段。其中，男37例，女33例，平均年龄(59.7±11.4)岁，糖尿病病程(9.3±3.4)年。对照组共收集56例，男性30例，女性26例，平均年龄(56.2±12.0)岁，年龄、性别构成在两组间基本一致。所有受试者均签署知情同意书并得到伦理委员会批准。 患者入院次日清晨空腹抽静脉血测定CF6、PGI_2、血糖以及其他生化指标。每位患者仔细记录年龄、性别、吸烟情况、冠心病家族史、用药史、既往病史，并完善检查身高、体重、血压腰围、臀围等项目以及心电图、胸片、眼底检查等辅助检查。 基于血糖升高是糖尿病最重要的危险因素之一，临床研究发现T2DM患者血浆CF6水平升高并与空腹血糖水平显著正相关(r=0.535，P＜0.01)，为进一步探讨二者关系，我们在体外原代培养的HUMECs上，观察高糖刺激对CF6分泌的影响。在所有的实验中，以5×10~5密度种植细胞，生长至亚融合状态用于实验。干预处理前，先剥夺富含血清(10％FBS)的生长培养基，将HUVECs以2％FBS在37℃培养24h。待生长至融合态后，分别给5.6mmol／L(对照组)、10mmol／L、20mmol／L、30mmol／L(高糖组)D-葡萄糖孵育，并以5.6mmol／L葡萄糖加24.4mmol／L甘露醇作为渗透压影响的对照组。在细胞内信号转导途径研究中高糖孵育前2h给予各种阻滞剂，对照组除外。 采集标本后，成批测量样本加入抑肽酶，低温冰箱保存。用放射免疫(RIA)液相均相竞争反应法测定CF6和PGI_2，按试剂说明书配制各种试剂和操作；用葡萄糖氧化酶法测定血浆葡萄糖；其他指标采用常规实验室方法测定。用实时定量RT-PCR方法检测CF6 mRNA的表达，并用Western blot方法检测MAPKs通路蛋白水平。 临床和基础实验分组收集数据资料，整理分析。应用SPSS 11.5软件，计算组间统计学差异，并进行单变量及多变量相关和回归分析。P＜0.

01)；加味通腑汤高剂量组与补脾益肠丸组及加味通腑汤中剂量组、加味通腑汤低剂量组比较，AI值明显下降，Bcl-2蛋白表达明显升高，Bax蛋白表达明显下降(P<0.01)，加味通腑汤高剂量组与柳氮磺胺吡啶组比较，AI值明显下降，Bax蛋白表达明显下降(P0.05)。 结论：加味通腑汤可以通过调节Bcl-2与Bax蛋白表达来减少溃疡性结肠炎大鼠模型结肠上皮细胞凋亡，以达到治疗作用，其中加味通腑汤高剂量治疗效果最好。
目的 观察原花青素（procyanidin，PC）对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响，并探讨其可能机制。

方法 40只雄性SD大鼠随机等分为对照组，缺血再灌注（I/R）组，原花青素低剂量组（原花青素50mg·kg-1·d-1），原花青素高剂量组（原花青素100mg·kg-1·d-1）。每天清晨灌胃，2周后结扎冠状动脉左前降支(LAD)30min再灌注120min，制作在体大鼠心肌缺血再灌注模型。再灌注后测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)；活性氧荧光探针二氢乙啶测定心肌组织中活性氧（ROS）的含量；Western blotting测定缺血心肌p53、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的蛋白表达； TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平。 结果 CK-MB水平：与对照组相比，I/R组的ck-mb明显增加（5044.72±317.53vs983.47±185.86，P＜0.01），与I/R组相比，原花青素高、低剂量剂量组的ck-mb水平降低（2907.69±260.59vs5044.72±317.53，3885.34±213.66vs5044.72±317.53，P＜0.01），与原花青素低剂量组相比，原花青素高剂量组ck-mb水平降低（2907.69±260.59vs3885.34±213.66，P＜0.01）； Rapamycin 花费 ROS：与对照组相比，I/R组的ROS的量明显增加（22.63±1.60vs4.58±0.67，P＜0.01），与I/R组相比，原花青素高、低剂量剂量组的ROS量降低（12.42±0.95vs22.63±1.60，16.84±1.37vs22.63±1.60，P＜0.01），与原花青素低剂量组相比，原花青素高剂量组ROS水平降低（12.42±0.95vs16.84±1.37，P＜0.01）；

P53、caspase-9蛋白表达：与对照组相比，I/R组的P53蛋白表达明显升高（65.83±2.99vs29.23±2.39，P＜0.01），caspase-9蛋白表达也明显升高（57.46±3.97vs22.93±2.11，P＜0.01），与I/R组相比，原花青素高、低剂量剂量组的P53蛋白表达水平降低（37.76±1.67vs65.83±2.99，43.48±2.64vs65.83±2.99， P＜0.01）， caspase-9的表达表达水平降低（33.12±2.52vs57.46±3.97，40.86±2.65vs57.46±3.97，P＜0.01），与原花青素低剂量组相比，原花青素高剂量组p53蛋白表达减少（37.76±1.67vs43.48±2.64， P
第一部分 Sotrastaurin细胞系 非动情期自体移植法子宫内膜异位症大鼠模型的建立 目的：用自体子宫内膜移植法构建子宫内膜异位症大鼠模型,为进一步的实验奠定基础。 方法：健康雌性未孕SD大鼠48只,周龄8-10周,体重200-250g。参考Vernon等的方法进行自体子宫内膜移植。建模后3周进行第二次剖腹探查,观察子宫内膜种植生长情况和组织形态学变化。移植灶体积增大,呈透明结节状或囊状,内有淡黄色透明囊液积聚者视为造模成功。 结果：共做48只SD大鼠模型,有40例大鼠在移植处可见透明小囊肿,表面有血管形成。SD大鼠的内异症模型成模率为83.33%(40/48),有4例大鼠没有成模,考虑在取内膜片段时内膜面积太小或内膜与浆肌层分离不够有关,有2例大鼠死于麻醉意外,还有2例死于腹腔脓肿。其中有10例大鼠异位病灶处腹膜与大网膜粘连,有8例大鼠异位病灶与肠管粘连,余内异症病灶结构清晰,与周围组织无粘连。 结论：非动情期自体子宫内膜移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型是可行的。旨在通过这种建模方法建立理想的子宫内膜异位症动物模型,为临床治疗子宫内膜异位症提供实验模型。

第二部分 来氟米特治疗子宫内膜异位症大鼠模型的实验研究 目的：初步探讨来氟米特对EMT大鼠模型异位灶中MAPK及NF-κB的影响,采用酶联免疫法(enzyme-linked immnuno sorbent assay, ELISA)测定大鼠血清中工L-1β的含量,同时观察其对EMT大鼠异位灶体积的抑制作用及对异位内膜病理形态学的影响,并对其可能的机制进行探讨。进一步证实免疫调节剂治疗子宫内膜异位症是可行的,为子宫内膜异位症的临床治疗提供新的治疗策略和靶点以及实验依据。 方法： 1.模型建立3周后,首先抽取实验动物的尾静脉血,用ELISA法检测血清中IL-1β的水平;接着剖腹观察异位子宫内膜的生长情况,测量移植内膜病灶的大小,根据公式体积V=0.52×长×宽×高,计算体积V1,同时把造模成功的40只大鼠随机分为2组：LEF组(n=20)：给予来氟米特35mg/kg/d灌胃,每天同一时间给药,连续用药3周；模型对照组(n=20)：给予生理盐水lml/kg/d灌胃,每天同一时间给药,连续用药3周；给药期间观察大鼠的活动、饮食、排便、及体重变化等情况。 NU7441化学结构 2.喂药3周后,再次抽取实验大鼠的尾静脉血,并剖腹观察大鼠移植内膜病灶的生长情况并测量异位内膜病灶的体积V2,收集移植内膜病灶后处死大鼠：(1)V2与V1进行比较；(2)用免疫组化检测大鼠模型异位灶MAPK及NF-κB的含量；(3)采用ELISA测定大鼠血清中IL-1β的含量；(4)比较各组大鼠治疗前后的体重。 结果： 1.移植模型复制成功,造模成功率83.33%。移植灶体积增大,呈透明结节状或囊状,内有淡黄色透明囊液积聚。 2.用药后LEF组移植内膜病灶体积(54.18±17.67)小于模型对照组(98.03±9.74),差异有统计学意义(P<0.05);用药后LEF组血清IL-1β含量明低于用药前,差异有统计学意义(P0.05)。 结论： 1.LEF可使大鼠移植内膜病灶中MAPK和NF-κB的含量降低,使血清IL-1β含量降低。 2.

7炎症细胞模型，检测了银杏叶多糖(PGBL)对炎症细胞的增殖活性、前炎症细胞因子及相关基因表达的影响；并通过检测PGBL对炎症细胞内核转录因子-κB的作用，探讨了PGBL在NF-κB炎性信号通路的作用，为PGBL的抗炎药物研发及临床应用提供理论与实验依据。 可能 方法：建立LPS诱导的RAW264.7炎症细胞模型，利用MTT法检测PGBL对炎症细胞RAW264.7增殖活性；双夹心ELISA法测定前炎症细胞因子TNF-α的表达；RT-PCR法测定前炎症细胞因子基因TNF-α、IL-6的mRNA表达；Westernblot法测定核NF-κB在细胞内的表达。 结果：成功建立了RAW264.7炎症细胞模型；在特定浓度范围内，PGBL可显著抑制炎症细胞RAW264.7的增殖能力，且对RAW264.7细胞无毒性作用；PGBL可抑制炎症细胞RAW264.7的TNF-α的表达，且抑制率与PGBL浓度呈正相关；PGBL对炎症细胞RAW264.7的TNF-α和IL-6mRNA的表达有抑制作用，且抑制率与PGBL浓度呈正相关；PGBL对炎症细胞RAW264.7的NF-κB表达有抑制作用。 结论：PGBL可以抑制炎症细胞RAW264.7的增殖，且对正常RAW264.7未表现出毒性作用。PGBL可通过调节炎性信号转导通路中NF-κB的表达，抑制TNF-α和IL-6基因的表达发挥抗炎活性。
目的

研究黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞(GMC)增殖的抑制作用及NF-κB表达的影响,充实DN肾脏复杂的细胞因子网络理论,揭示黄芩苷防治DN的药效机制,为中医药防治DN提供实验依据。 PI3K抑制剂 方法 本实验将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)分为六组：(1)低糖组(LG5.5mmol/L),(2)高糖组(HG25mmol/L),(3)黄芩苷低剂量组(HG+黄芩苷25μmol/L),(4)黄芩苷中剂量组(HG+黄芩苷50μmol/L),(5)黄芩苷高剂量组(HG+黄芩苷100μmol/L),(6)氯沙坦组(HG+氯沙坦钾10μmol/L)。每组设平行6孔,培养24h、48h、72h。实验结束时应用MTT比色法检测各组GMC生长情况。根据MTT法检测结果,选择最佳作用时间点,采用免疫组化法检测FN蛋白表达情况。收集细胞并提取核蛋白,应用Western

blot方法检测各组NF-κB表达情况。 结果 (1)高糖组在24h、48h、72h时间段的吸光值均较低糖组增高,且随培养时间延长而增高明显(P<0.05)；黄芩苷低剂量组、黄芩苷中剂量组、黄芩苷高剂量组、氯沙坦组在24h时间段吸光值均较高糖组高,48h、72h时间段较高糖组低(P黄芩苷中剂量组>黄芩苷高剂量组。氯沙坦组NF-κB表达量与高糖组比较未见明显差异。 结论 高糖环境下体外培养的GMC存在异常增殖现象,黄芩苷能抑制高糖诱导的GMC异常增殖,且呈时间、剂量依赖关系,其机制可能与黄芩苷下调NF-κB表达有关。
目的： 环维黄杨星D (Cyclovirobuxinum D, Cvb-D)为黄杨科植物小叶黄杨及其同属植物中提取精制所得生物碱,可行气活血,通络止痛,对与心肌肥厚发生发展密切相关的因子都有明显调节作用,但对心肌肥厚疗效尚未见报道。本研究利用异丙肾上腺素(ISO)诱导小鼠心肌肥厚、左旋甲状腺素(L-thy)诱导大鼠心肌肥厚两个模型,从组织病理形态学、神经体液因子、心肌能量代谢以及相关信号通路探讨Cvb-D对心肌肥厚的药效及其作用机制,为其临床应用提供实验依据,拓展中医药防治心血管疾病的新领域。

PLX4032半抑制浓度 方法： 取KM小鼠皮下注射ISO1.0mg/kg,每d两次,连续14d,制备小鼠心肌肥厚模型,给予低、中、高剂量环维黄杨星D(6.0、9.0、12.0mg/kg·d),灌胃给药14d。以小鼠心脏重量指数(HW=全心重量/体重)、左心室重量指数(LIWI=左心室重量/体重)、病理形态学(HE染色)、心肌能量代谢变化(游离脂肪酸FFA、乳酸LD)和凋亡调控基因bax、bcl-2蛋白阳性表达量(免疫组织化学)为指标考察Cvb-D对小鼠心肌肥厚的保护作用。 取SD大鼠腹腔注射L-thy1.0mg/kg-d,连续14d,制备大鼠心肌肥厚模型,给予低、中、高剂量环维黄杨星D(6.0、12.0、24.0mg/kg·d),灌胃给药14d。以大鼠心脏重量指数、左心室重量指数、病理形态学、心肌NO系统(NO、NOS)、抗氧化损伤(SOD、MDA含量)为指标考察Cvb-D对大鼠心肌肥厚的疗效。以凋亡调控基因bax、bcl-2蛋白阳性表达量、原癌基因c-fos、c-jun mRNA和丝裂原活化蛋白激酶MAPK通路中p38a, p381βmRNA的表达变化(实时荧光相对定量RT-PCR)为指标,初步探讨Cvb-D对大鼠心肌肥厚的保护作用机理。 结果： 1环维黄杨星D (Cvb-D)对心肌肥厚的药效研究 与模型对照组比较,Cvb-D高剂量组小鼠心脏重量指数(HW)和左心室重量指数(LHWI)明显降低(P<0.01或P<0.05)；Cvb-D低、中、高剂量组大鼠心脏重量指数(HW)和左心室重量指数(LHWI)明显降低(P<0.01或P<0.05)：Cvb-D中、高剂量组大鼠和小鼠心肌细胞肥厚扩大、细胞间隙紊乱现象有明显的改善；Cvb-D低、中、高剂量组小鼠血清游离脂肪酸(FFA)和乳酸(LD)含量显著下降(P<0.01,或P<0.05);Cvb-D中、高剂量组大鼠心肌组织SOD活性显著升高；Cvb-D低、中、高剂量组大鼠心肌组织MDA含量明显降低(P<0.05)；Cvb-D低、中、高剂量组大鼠心肌组织NO含量显著上升(P<0.01或P<0.05)；Cvb-D中、高剂量组大鼠心肌组织NOS的含量显著升高(P<0.01或P<0.05或P<0.05或P<0.

01）。熊果酸干预组的gp91phox、p67phox蛋白的表达高于DPI及LY294002干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸能抑制瘦素诱导的gp91phox、 p22phox、 p67phox、 Rac1蛋白表达。 2．熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞PI3K、Akt及P38MAPK信号通路活化的影响 2.1.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞PI3K蛋白表达的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后，细胞内PI3K蛋白表达较空白对照组显著升高（P<0.01）；给予熊果酸干预后PI3K蛋白的表达明显低于瘦素组（P<0.01）。DPI及LY294002干预后PI3K的表达均低于瘦素组（均P0.05）。上述结果表明熊果酸可以抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达。 2.2.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞Akt蛋白磷酸化的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后，细胞内P-Akt表达较空白对照组显著升高（P<0.01）；给予熊果酸干预后P-Akt表达明显低于瘦素组（P<0.01）。DPI及LY294002干预后P-Akt表达均低于瘦素组（均P<0.01）；熊果酸干预组的P-Akt蛋白的表达低于DPI干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸可以抑制瘦素诱导的Akt蛋白磷酸化。

Gefitinib研究购买 2.3.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞P38MAPK蛋白磷酸化的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞30min后，细胞内p-P38MAPK表达较空白对照组显著升高（P<0.01）；给予熊果酸干预后p-P38MAPK表达明显低于瘦素组（P<0.01）。DPI、SB203580及LY294002干预后p-P38MAPK均低于瘦素组（均P<0.01）；熊果酸干预组的p-P38MAPK的表达低于SB203580及LY294002干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸可以抑制瘦素诱导的P38MAPK蛋白磷酸化。 3．熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞TIMP-1、MMP-1蛋白表达的影响 很少 3.1.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞TIMP-1蛋白表达的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞24h后TIMP-1蛋白表达较空白对照组升高（P<0.05）；给予熊果酸干预后TIMP-1蛋白表达明显低于瘦素组（P<0.01）。DPI、SB203580及LY294002干预后TIMP-1蛋白表达均低于瘦素组（均P<0.01）；熊果酸干预组的TIMP-1的表达低于LY294002干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸可以抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达。

3.2.熊果酸对瘦素诱导的HSC-T6细胞MMP-1蛋白表达的影响 瘦素刺激HSC-T6细胞24h后MMP-1蛋白表达较空白对照组降低（P<0.05）；熊果酸干预后MMP-1蛋白表达明显高于瘦素组（P<0.01）。分别给予DPI、SB203580及LY294002干预后MMP-1的表达均高于瘦素组（P<0.01或P<0.05）；熊果酸干预组的MMP-1的表达高于SB203580干预组（P0.05）。上述结果表明熊果酸可以阻断瘦素诱导的MMP-1蛋白表达下调。

结论： 1.熊果酸能抑制瘦素诱导的大鼠HSC-T6细胞NOX亚基gp91phox、p22phox、p67phox、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化。 2.熊果酸下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与熊果酸抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关。
目的： 研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor4α,HNF4α)对肝癌细胞凋亡的影响以及与p38MAPK信号转导通路的关系,揭示HNF4a抗肝癌的机制。 方法： 1.收集处于对数生长期的肝癌细胞HepG2,利用阳离子聚合物转染技术用外源基因pCMVHNF4a转染肝癌细胞HepG2,对照组转染pEGFP-N1,转染24h后将培养基更换为新鲜的10%胎牛血清DMEM培养基,继续培养24h荧光显微镜观察对照组绿色荧光蛋白表达,选取三个视野白光下计算视野内细胞数,激发光下计算同视野发绿色荧光的细胞数,计算对照组转染效率,Western Y-27632核磁共振 blot检测目的基因在肝细胞HepG2中的蛋白表达。 2.P38MAPK信号通路阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号转导通路,AnnexinV-FITC-PI双染细胞后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,比较转染HNF4α组的肝癌细胞HepG2凋亡率与转染pCMV组以及HNF4α+SB203580组凋亡率。RT-PCR检测凋亡相关基Caspase-3、Fas表达量,比较HNF4α组两种基因表达量与pCMV组以及HNF4α+SB203580组两种基因表达量。 结果： 1.利用阳离子聚合物转染技术用HNF4α转染肝癌细胞HepG2,荧光显微镜下观察对照组绿色荧光蛋白表达,计算48h时对照组转染效率为57%,Western blot检测转染HNF4a蛋白表达,实验组表达量明显高于对照组,与对照组相比HNF4a蛋白表达量有显著差异(P<0.

However,its role in trophectoderm(TE) remains unknown.METHODS:In the present study,we investigat…
【目的】PM2.5对机体多个组织和细胞都有危害作用,星形胶质细胞的激活发生在各种中枢神经系统损伤的反应中起着重要作用。在本研究中,我们探讨PM2.5能否诱导星形胶质细胞的炎症活化以及其机制。【材料和方法】采用C6星形胶质细胞观察PM2.5诱导星形胶质细胞炎症激活以及通路。首先,采用Western

blot、酶联免疫吸附试验方法和半定量RT-PCR方法检测PM诱导星形细胞C6炎症因子iNOS、TNF-α和IL-1β的表达和分泌;其次,采用Western blot方法检测PM2,。5引起的C6细胞的总蛋白中STAT3、p-STAT3、JAK2和P-JAK2的蛋白水平变化,为进一步确证JAK2/ST…
Objective To investigate the effect of p38 MAPK on the expression of MRP1 and drug resistance with refractory epileptic rats.Methods We used a rat model of refractory epilepsy to examine whether p38 MAPK affect the expression of MRP1 and the concentrations of AEDs in the brain.The expression of M…
目的多药转运体P-糖蛋白(P-glycoprotein,PGP)介导的难治性癫痫耐药己被国内外公认。但PGP表达上调的分子机制目前尚未清楚。我们前期研究发现在体外培养的K562细胞上,p38 MAPK信号通路调控了PGP的表达。但在难治性癫痫大鼠脑内p38 MAPK信号通路是否调控了PGP的表达,并参与了癫痫的耐药目前尚不清楚。本实验旨在探索在难治性癫痫大鼠脑内p38 或者 MAPK信号通
目的观察p38 MAPK对难治性癫痫大鼠脑内MRP1表达的影响及对癫痫大鼠海马细胞外液抗癫痫药物浓度的影响,从而明确p38 MAPK是否参与了难治性癫痫的耐药。方法健康雄性SD大鼠,随机分成两组,分别是正常对照组(n=16)和模型组(n=44),采用戊四氮腹腔注射
Circulating angiotensinⅡ(AngⅡ) levels are elevated in hypertensive patients,while cyclooxygenase -2(COX-2) may act as the culprit selleck of vascular inflammation

and is found in atherosclerotic plaques.Although both AngⅡand COX-2 are associated with vascular inflammation and remodeling,it remains elusiv…
缺血及再灌注(Ischemia and reperfusion,I/R)是心脑血管疾病及治疗过程中常见的病理改变。远距预处理(Remote preconditioning,remote PC)则是种通过短暂的远离靶器官的远端组织的缺血起到靶器官保护作用的技术。1993年Przyklenk等发现,对左旋支施行预处理可明显增强前降支所支配区域心肌的
Objective Our previous study has demonstrated

that in response to hypoxia and 以及 serum deprivation(hypoxia/SD),both components of ischemia in vivo,rat bone marrow-derived mesenchymal stem cells(MSCs)underwent the caspase-dependent apoptosis involving changes in mitochondrial integrity and function.
AIMS: To investigate possible relationship of caveolin-1 and SR-A in foam cells derivedfrom macrophage induced by ox-LDL and explore possible molecular mechanisms.METHORDS: RAW 264.7 mouse macrophages were used. Western blot analysis was usedto detect protein expression. High performance liquid …
目的观察。肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)在人喉癌中表达、分布,探讨其临床意义及相关机制。方法运用半定量RT-PCR 方法检测喉癌组织、非癌喉粘膜中肾上腺髓质素mRNA 的表达差异;运用免疫组化方法观察喉癌标本中肾上腺髓质素分布规律;运用放射免疫测定人喉鳞癌细胞系hep-2培养基、不同组织标本、血浆中ADM 浓度:运用氚胸腺嘧啶(H~3-TDR)掺入方法观察肾上腺髓质素促进hep-2细胞增殖效应以及信号传导通路。结果H~3-PCR 结果发现在hep-2细胞、喉癌组织、非癌喉黏膜中均可以看到ADM 基因扩增。喉癌组织ADM 基因表达水平较非癌喉黏膜高2.96倍,(F=73.2…
Attachment of leukocytes to the vascular endothelium and the subsequent migration of cells into the vessel wall are early events in atherogenesis. Expression of endothelial adhesion molecules play an important role in this process. In the present study, we tested the effect of Epigllocatechin-3-…