05)。结论透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的部分作用机制是有效抑制退变软骨细胞caveolin-1、p38MAPK的表达。
脂多糖(LPS)在细菌破坏细胞的过程中起着重要的作用。Toll样受体(TLR)2对LPS的识别是通过与TLR1和TLR6构成异源二聚体来完成的,TLR2识别LPS后介导的细胞内免疫反应遵循髓样分化因子(MyD)88依赖性通路。MyD88的死亡结构域募集下游的白细胞介素-1受体相关激酶1和4,肿瘤坏死因子受体相关因子6和转化生长因子-β1活化激酶等信号分子,促使核因子-κB、激活蛋白1和P38促丝裂原激活蛋白激酶活化,继而导致促炎症细胞因子相关基因转录。MyD88非依赖性通路分别募集和激活下游分子受体相互作用蛋白1或肿瘤坏死因子受体相关因子3,通过核因子-κB、激活蛋白1和干扰素调节因子3,诱导Ⅰ型干扰素的产生。CD14和MyD2是LPS与TLR4结合的关键蛋白,控制CD14或MyD2可阻止LPS和TLR4的结合,将炎症反应阻断在信号转导的上游。TLR2和TLR4对LPS的识别是引发炎症反应的关键,限制细胞对TLR2和TLR4的表达是进行炎症控制最直接有效的方法。调控TLR2和TLR4信号通路,有望给予牙周炎、炎症性肠炎、心血管疾病及和自身免疫性疾病等更有效和更安全的临床治疗。
目的探究p38MAPK抑制剂对重症胰腺炎大鼠急性肺损伤的保护作用。方法采用随机数字表法将60只大鼠分为三组,A组为假手术组,B组为重症胰腺炎模型组,C组为重症胰腺炎模型加p38MAPK抑制剂组;检测三组大鼠的肺组织病理学切片、肺组织湿干重比、髓过氧化物酶活性以及p38MAPK

可能 mRNA的表达水平。结果 B组大鼠与A组大鼠相比,其肺组织损伤病理评分、肺组织湿干重比、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性以及肺组织p38MAPK mRNA的表达水平均显著升高,而C组大鼠与B组大鼠相比上述指标均有所下降,P
目的探讨p38抑制剂对心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响。方法将44只大鼠随机分为4组:对照组(9只)、缺血组(15只)、缺血再灌注组(10只)和干预组(10只)。对照组大鼠只暴露心脏,缺血组大鼠制备心肌缺血模型,缺血再灌注组大鼠制备心肌缺血再灌注模型,干预组大鼠在左冠状动脉前降支结扎前30 min注射p38抑制剂SB20358(100μg·kg-1),其余操作均与缺血再灌注组一致。观察各组大鼠心肌组织形态学变化及心肌组织中p38、c-Jun氨基端激酶(JNK)和细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)水平的变化。结果对照组大鼠心肌组织中未检测到p38、ERK1/2和JNK蛋白。缺血组缺血60、90 PCI-34051临床试验 min时大鼠心肌组织中p38蛋白水平显著高于缺血30 min时,差异均有统计学意义(P<0.05);各个时间点,干预组大鼠心肌组织中p38蛋白水平显著低于缺血组和缺血再灌注组,差异均有统计学意义(P0.05)。随着缺血和再灌注时间延长,缺血组大鼠心肌组织中ERK1/2和JNK水平略有升高,缺血再灌注组和干预组大鼠心肌组织中ERK1/2和JNK水平略有降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 MAPK中p38参与心肌缺血再灌注损伤,但JNK和ERK1/2的作用不显著。
哺乳动物精子在雌性生殖道内及体外获能培养过程中伴随着胆固醇外流、质膜重组、离子通道调节及获能相关蛋白磷酸化状态改变等相关生理调节过程,其中信号通路及相应信号分子对精子获能及功能修饰起到重要调节作用,成为精子细胞超激活运动及完成受精作用的关键环节。根据近年来的研究报道,对哺乳动物精子获能过程中已知的信号通路、信号分子及调节因子、离子通道、存在的问题及未来研究主要方向进行综述,为精子体外培养及辅助生殖等提供理论参考。
流行病学研究证实大气细颗粒物(PM2.5)与多种呼吸道疾病及心血管疾病的发病率与死亡率密切相关。PM2.5的毒性损伤机制除了与炎性损伤、氧化损伤相关外,还与多条细胞内信号通路有关,已成为研究的热点之一。生物活性物质因具有的抗氧化等活性已被应用于拮抗PM2.5毒性作用的研究中。因此,该文就PM2.5健康危害的流行病学研究及对细胞内信号通路的影响和生物活性物质对PM2.5的拮抗作用的研究进展进行综述。
目的研究PKA-RhoA信号传导通路在EAE发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效,探讨益肾达络饮治疗EAE的作用机制,以及对EAE小鼠中枢神经损伤后神经再生的作用。方法采用Western

CDK抑制剂 blot方法测定各组小鼠脑和脊髓组织中PKAC-a、RhoA的含量,旨在了解PKAC-a、RhoA在EAE发生后的作用以及益肾达络饮对神经再生的作用情况。结果检测脑组织中PKAC-a表达显示,正常组和模型组、中药组、激素组均有差异(P值均<0.05);模型组和抑制剂组、中药组、激素组均有显著性差异(P值均<0.05);中药组和激素组有极显著性差异(P值<0.01)。RhoA根据多项比较组间P值可知:脊髓组织中,正常组和模型组、激素组、中药+激素组、抑制剂组均有差异(P值均<0.05);模型组和抑制剂组有显著性差异(P值<0.05),和中药组、激素组、中药+激素组有极显著性差异(P值<0.

本试验中主要选用的遗传背景为C57BL/6J×129Sv的小鼠对促性腺激素应答效果良好,卵泡和卵母细胞发育正常。研究发现,22~24日龄C57BL/6J×129Sv野生型小鼠在PMSG(5 IU)诱导44~48 h后,卵巢表面获得的排卵前卵泡数量较多,卵泡内EGFR表达水平与分布正常;h CG继续诱导12 h后,输卵管内收集到大量MII期的卵母细胞,IVF的受精率偏低,但受精后胚胎发育良好,形态正常;IVM的自发成熟率较高,染色体形态规则。~2.卵母细胞成熟在Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠中被显著抑制。Western Blot结果表明,Egfrfl/flCyp19Cre/+和Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠卵巢颗粒细胞内EGFR蛋白水平显著下降,分别为对照组的35%和15%左右。应用PMSG和h 购买Necrostatin-1 CG进行超数排卵处理后,卵巢内的卵丘细胞紧紧包围卵母细胞,透明质酸酶很难将其从卵母细胞上剥离;Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠相对于对照组仍有60%左右处于GV期;此时从Egfrfl/flCyp19Cre/+和Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠输卵管壶腹部收集到的卵母细胞数量都有明显降低,尤其是Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠,仅为对照组的18%左右,且成功排卵的卵母细胞中,部分仍处于GV期,Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠高达50%以上。3.卵巢颗粒细胞中CNP的产生受FSH的正调控和LH的负调控。通过对钠肽家族表达过程进行全基因组水平实时监测以及进一步转录和翻译水平的研究发现,FSH和LH/h

CG仅对NPPC具有调控作用,而对NPPA和NPPB没有影响,且FSH上调NPPC表达,LH/h CG抑制NPPC表达。受体NPR2在壁层颗粒细胞和卵丘细胞中都有表达,在卵丘细胞略高,FSH/PMSG引起了NPR2 m RNA的缓慢提高,44 h后显著下降,LH/h CG处理3 h后抑制其表达。CNP对于体外培养的卵泡中LH介导的卵母细胞GVBD没有影响,但可有效促进体外培养的壁层颗粒细胞中c GMP的产生和抑制体外培养的卵丘卵母细胞复合体中卵母细胞GVBD的发生。体外培养的壁层颗粒细胞中,LH/h CG抑制了CNP诱导的c GMP的产生过程,即降低了壁层颗粒细胞对CNP的敏感性。此外,Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠中,NPPC的表达仍响应LH调控发生了显著的下降,与野生型小鼠表现一致,说明EGFR的缺失不影响LH对NPPC的调控作用。4.EGF/EGFR通路调控LH介导的c

GMP的早期迅速下降,但对于LH依赖性NPPC m RNA表达下调不是必要的。在活体和离体情况下,LH/h CG处理都导致了c GMP水平和NPPC m RNA的显著下降,但c GMP的下调非常迅速,早于NPPC m RNA的下降1 h以上。体外培养的小鼠卵泡经EGF样生长因子Areg处理后,卵泡中NPPC m RNA的表达受到抑制,等同于LH的抑制效果;并且Areg的抑制作用被EGFR激酶抑制剂AG1478完全阻止,但LH依赖性NPPC表达抑制对AG1478不敏感。卵泡中LH对NPPC的抑制作用在4类EGFR信号通路缺陷小鼠中也未受到影响,进一步表明,LH依赖性NPPC m RNA表达调控不是通过EGFR信号通路介导的。采用AG1478抑制体外培养的卵泡内EGFR的效应后,早期LH对c

Selleck Gemcitabine GMP水平的迅速下调被完全抑制;进一步研究发现,EGFR在LH诱导15~30 min内即发生了显著的磷酸化,表明EGF/EGFR参与了c GMP的早期调控,而配体CNP可能作用于后期的反应。Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠体外培养的排卵前卵泡中,c GMP的水平在LH诱导后发生了迅速的部分下降,但该下降不足以引发卵母细胞的GVBD。综上所述,本文选用在卵巢颗粒细胞中特异性敲除EGFR基因的小鼠模型,从细胞、组织和活体水平验证了CNP/NPR2和EGF/EGFR信号通路在卵母细胞发育和成熟过程中的关键调控作用。该过程中,c AZD2281 花费 GMP水平受多条冗余信号通路的调控。EGF/EGFR通路调控LH介导的c GMP的早期迅速下降,对于卵母细胞成熟是必需的。本研究为理解卵母细胞的成熟调控提供了必要的实验依据,为临床上卵母细胞相关的不孕不育症的预防和治疗提供了新的研究思路。
细胞缝隙连接通讯(Gap junctional intercellular communication, GJIC)是哺乳动物细胞间普遍存在的一种通讯方式,在细胞增殖、分化、凋亡、死亡等生理过程中具有重要作用。镉是一种重要的工业和环境污染物,危害人和动物的健康,肝脏是镉的重要靶器官之一。镉不仅引起肝细胞凋亡,还能抑制肝细胞GJIC,影响细胞缝隙连接蛋白的表达和分布,但GJIC在镉暴露肝脏损伤过程中的作用机制尚不明确。本研究在体外用2.5、10 μmol/L镉和50 μmol/L红景天苷(Salidroside, Sal)单独或联合作用BRL 3A细胞6、12h；并选择80-100g雌性SD大鼠,50 mg/L镉自由饮水,35 mg/kg B.W. Sal每天灌胃一次,单独或联合处理12周,建立动物模型。通过细胞生物学和分子生物学方法,探讨镉致大鼠肝脏损伤过程中GJIC的变化以及其在钙离子通路、MAPK通路以及自噬调控镉致肝细胞毒性损伤中的作用机制,并阐明Sal在上述过程中的保护作用。为揭示镉致肝脏毒性损伤的分子机制提供依据。1、镉致大鼠肝细胞损伤及Sal的保护作用为了研究镉对大鼠肝细胞毒性的影响,本试验通过体内、体外试验检测镉及Sal对SD大鼠细胞活力、细胞形态、细胞指数、肝脏脏器指数、肝脏组织病理学变化和肝细胞超微结构的变化。体外试验结果表明,不同剂量镉(2.

研究内容第一部分高迁移率族蛋白B1对严重烧伤大鼠KCs分泌促炎性细胞因子的影响 实验使用健康成年雄性SD大鼠32只，体重200-250g，购自安徽医科大学动物中心。大鼠实验前进行一周环境适应。大鼠分为A组（烫伤组）及B组（假烫组），A组大鼠(16只)予戊巴比妥（30mg/kg）腹腔内注射麻醉，剃除背部毛发，大鼠背部置于98℃的热水中浸润12秒，获得总体表面积（TBSA）30%的Ⅲ°烫伤模型（经病理切片证实，以下称烧伤）。烧伤后立即给予每只大鼠腹腔注射乳酸林格氏液（30ml/kg）复苏；假烫组（16只）大鼠予同样的处理，但给予室温水水浴且不予液体复苏。各组大鼠于烧伤或假烫后24h行心脏取血处死。采用肝脏原位灌注、密度梯度离心和选择性粘附法分离KCs。分别经锥虫蓝染色和乳胶微粒吞噬实验判断和鉴定。KCs活性和纯度均大于95%以上。分离后的KCs以1×10~6每孔的密度接种于24孔板中。A、B两组大鼠KCs各分为4组，分别接受不同浓度HMGB1（0、50、100、200ng/mL）刺激48h。收集细胞培养的上清液，使用大鼠TNF-α和IL-1β酶联免疫吸附试剂盒（美国BioSource公司）检测，相关操作按照生产商提供的说明书实行。

ERK inhibitor 第二部分RAGE受体在高迁移率族蛋白B1诱导严重烧伤大鼠KCs分泌促炎性细胞因子中的作用 健康成年雄性清洁级SD大鼠32只，体质量200~250g，购自安徽医科大学实验动物中心。大鼠常温下饲养1周，20g/L戊巴比妥钠腹腔注射（30mg/kg）麻醉后，背部置于98°C水中12s，造成30%TBSA Ⅲ度烫伤（经病理切片证实，以下称烧伤），烧伤后立即给予乳酸林格液腹腔注射（30mL/kg）进行液体复苏。伤后24h行心脏取血处死大鼠，采用肝脏原位灌注、不连续密度梯度离心和选择性粘附法分离KCs。分别经锥虫蓝染色和乳胶微粒吞噬实验判断和鉴定。KCs活性和纯度均大于95%以上。（1）取部分细胞按随机数字表法分为2组，各组样本数为8：①PBS对照组，加入1mL BMS-354825核磁共振 PBS液培养；②HMGB1刺激组，加入1mL浓度为100ng/mL HMGB1刺激。培养48h后行RAGE检测。（2）另取部分细胞按随机数字表法分为4组，各组样本数为8：①对照组，加入1mL PBS液培养；②HMGB1组，加入1mL浓度为100ng/mL HMGB1培养；③HMGB1＋抗RAGE抗体组，经1mL浓度为20μg/mL抗大鼠RAGE单克隆抗体孵育2h后，加入1mL浓度为100ng/mL HMGB1刺激；④HMGB1＋重组大鼠RAGE/Fc嵌合体（rrRAGE/Fc）组，0.5mL浓度为100ng/mL HMGB1与0.5mL浓度为5μg/mLrrRAGE/Fc孵育2h后，作用于细胞。培养48h后行TNF-α和IL-1β蛋白和mRNA表达检测。

第三部分Toll样受体在高迁移率族蛋白B1诱导严重烧伤大鼠KCs分泌促炎性细胞因子中的作用 健康成年雄性清洁级SD大鼠32只，体质量200~250g，购自安徽医科大学实验动物中心。大鼠常温下饲养1周，20g/L戊巴比妥钠腹腔注射（30mg/kg）麻醉后，背部置于98°C水中12s，造成30%TBSA Ⅲ度烫伤（经病理切片证实，以下称烧伤），烧伤后立即给予乳酸林格液腹腔注射（30mL/kg）进行液体复苏。伤后24h行心脏取血处死大鼠，采用肝脏原位灌注、不连续密度梯度离心和选择性粘附法分离KCs。分别经锥虫蓝染色和乳胶微粒吞噬实验判断和鉴定。KCs活性和纯度均大于95%以上。分离后的KCs以每孔1×106个的密度接种于24孔板中。大鼠的KCs分离后分为四组：⑴对照组，RPMI-1640培养液中培养48h；⑵HMGB1刺激组，100ng/ml HMGB1刺激48h；⑶HMGB1+抗TLR2抗体组，20μg/ml抗TLR2抗体（美国Invivgen公司）培养2h后加入100ng/ml HMGB1刺激48h；⑷HMGB1+抗TLR4组,20μg/ml抗TLR4抗体（美国Invivgen公司）培养2h后加入100ng/ml HMGB1刺激48h。ELISA法测定KCs上清液中的TNF-α和IL-1β含量。Northern blot法检测KCs中TNF-α和IL-1β

mRNA的表达，Westernblot法检测KCs中p38及JNK的表达，EMSA法检测KCs中NF–κB活性。 四．研究结果 第一部分 来源于对照组和烧伤组大鼠的KCs分别用不同浓度的HMGB1（50-200ng/ml）处理48小时。运用ELISA法检测上清液中的TNF-α和IL-1β蛋白含量。结果表明：在正常情况下，KCs仅产生极少基础量的TNF-α和IL-1β。HMGB1通过剂量依赖的方式刺激KCs分泌TNF-α和IL-1β。此外，在至少给予50ng/ml剂量的HMGB1刺激情况下，烧伤组大鼠KCs产生TNF-α和IL-1β显著多于对照组。这种差异在使用100ng/ml或者更高浓度HMGB1刺激的实验组中更为明显。 时间 第二部分 培养48h后，HMGB1刺激组KCs表面RAGE表达水平（1.036±0.101）明显高于PBS对照组(0.191±0.024，t=-23.158，P=0.000)。培养48h后，与对照组比较，HMGB1组、HMGB1+抗RAGE抗体组和HMGB1+rrRAGE/Fc组KCs培养上清液中TNF-α和IL-1β含量均显著增高（P值均小于0.01），后3组组间两两比较差异均无统计学意义（P值均大于0.05）。培养48h后，与对照组比较，HMGB1组、HMGB1+抗RAGE抗体组和HMGB1+rrRAGE/Fc组TNF-α、IL-1β mRNA表达水平均显著增高（P值均小于0.01），后3组组间两两比较差异均无统计学意义（P值均大于0.05）。 第三部分 使用抗TLR2抗体或抗TLR4抗体预培养KCs都显著减少了HMGB1诱导的TNF-α和IL-1β分泌（p<0.01）。抗TLR4抗体较之抗TLR2抗体对HMGB1诱导的TNF-α产生具有更强的抑制作用（73%对53%，p0.05）。同时，TLR2阻断较之TLR4阻断更显著的抑制HMGB1诱导的IL-1β产生（80%对50%，p0.05）。 同时，KCs RNA的Northern blot分析表明：使用HMGB1刺激48小时后的KCs TNF-α和IL-1β的mRNA水平显著增加。此外，经过抗TLR2和TLR4预培养的烧伤后大鼠KCs显著抑制了HMGB1诱导的TNF-α和IL-1β的mRNAs表达(p<0.

018)神经元树突棘的密度显著降低。 经过45d的皮质酮处理以后的,海马的所有亚区的神经元树突棘的密度均明显少于相应的溶剂对照组的神经元树突棘的密度(CA1：P=0.004；CA3：P=0.000；DG：P=0.002)。经过60d的皮质酮处理以后海马各区神经元树突棘的密度均明显的少于相应的溶剂对照组的树突棘的密度(CA1：P=0.001；CA3：P=0.000；DG：P=0.004)。 经过10d的氟西汀处理以后,与相应的CORT组相比,经氟西汀处理的CORT+FLX组的CA1区(P=0.000)和CA3区(P=0.004)的神经元树突棘的密度显著提高。经过25d的氟西汀处理以后,与相应的CORT组相比,CORT+FLX组的海马所有亚区的神经元树突棘的密度均显著升高(CA1：P=0.000；CA3：P=0.000；DG：P=0.010)。

(3)慢性皮质酮暴露及长期氟西汀治疗对小鼠海马区神经元胞体内BDNF水平的影响 经过10d的皮质酮处理后,与相应的对照组相比,DG区的新生神经元(t=4.416,P=0.002)与成熟神经元(t=3.371,P=0.010)胞体中的BDNF的水平显著升高。经过20d的皮质酮处理后,与相应的对照组相比,DG区成熟神经元(t=3.848,P=0.005),DG区新生神经元(t=3.991,P=0.004)和CA3(t=3.495,P=0.008)区神经元胞体中的BDNF的水平显著升高。经过35d的皮质酮处理后,与相应的对照组相比,DG区成熟神经元(t=2.501,P=0.037),CA3区(t=3.670,P=0.006),CA1区(t=3.549,P=-0.008)神经元中的BDNF水平显著提高。 Selleck Chk 抑制剂 与相应的VEH组相比,45天的皮质酮处理后,CA1区神经元(P=0.001)和DG区新生神经元（P=0.001)的BDNF的水平显著减少。经过60d的皮质酮处理后,与相应的VEH组相比,海马CA1区、CA3区神经元和DG区新生神经元中的BDNF的水平均显著升高(CA1：P=0.031；CA3：P=0.008；DG-N：P=0.012)。 经过10d(36d-45d)的氟西汀处理后,与相应的CORT组相比,DG区成熟神经元(P=0.000)和新生神经元(P=0.003)胞体内的BDNF的水平显著减少。与相应的各CORT组相比,经过25d的氟西汀处理后,海马CA3区神经元、DG区成熟神经元和新生神经元中的BDNF的水平均显著降低(CA3：P=0.025；DG-M：P=0.001；DG-N：P=0.001)。 还有 2.氯胺酮抗抑郁作用与神经可塑性和BDNF的关系及其机制研究 (1)氯胺酮对BDNF的促进作用及糖皮质激素皮质酮的影响 与给予单次氯胺酮注射的正常鼠相比,给抑郁鼠单次注射氯胺酮,给药后30min时,抑郁鼠海马BDNF的表达显著升高(F=12.493,P=0.008),并且糖皮质激素受体抑制剂Ru486可以显著抑制这种升高(F=15.499,P=0.004)。但是短期(3d)的皮质酮处理却不能达到相似的效果,氯胺酮可显著促进海马区BDNF的表达(F=927.149,P=0.000)；短期(3d)的糖皮质激素受体抑制剂处理不会对氯胺酮的BDNF促进作用产生影响(F=0.165,P=0.690)。单剂量给予氯胺酮以后30min时,小鼠海马突触素(Synaptophysin)表达水平较对照组没有发生显著变化(F=0.897,P=0.358)。糖皮质激素受体抑制剂Ru486对突触素的表达也没有显著影响(F=1.524,P=0.235)。单剂量给予氯胺酮以后7d时,与对照组相比,小鼠海马BDNF水平没有出现显著改变(F=1.539,P=0.233)。并且短期的糖皮质激素受体抑制剂Ru486处理也没有对氯胺酮的BDNF促进作用产生显著影响(F=2.275,P=0.151)。单剂量给予氯胺酮以后7d时,给予了氯胺酮的各组小鼠海马突触素(Synaptophysin)表达水平显著提高(F=466.104,P=0.000)。并且短期的Ru486处理(3d)不影响突触素的表达(F=4.308,P=0.054)。

(2)氯胺酮对Rac1信号通路的影响 与对照组相比,在给予单剂量氯胺酮后,Rac1-GTPase在15min(t=4.023,P=0.016)和45min(t=3.939,P=0.017)两个时间点均显示升高,在给药后的4h时,恢复到正常水平(t=0.570,P=0.599)；在给予单剂量氯胺酮后15min时间点,与对照组相比,Tiam1水平显著升高(F=953.626,P=0.000),并且在给予单剂量氯胺酮后45min时,Tiam1仍显著升高(F=70.369,P=0.000),在单剂量注射氯胺酮以后4h时间点Tiam1的表达恢复到基础水平(F=1.259,P=0.278)；在给予单剂量氯胺酮后15min时,与对照组相比,RacGAP1表达水平显著降低(F=20.750,P=0.000),并且持续到给予单剂量氯胺酮后45mmin时间点,RacGAP1仍显著降低(F=181.808,P=0.000)。给予单剂量氯胺酮以后4h时间点,RacGAP1的表达恢复到基础水平(F=0.343,P=0.566)；在给予单剂量氯胺酮的15min,与对照组相比,Cofilin的磷酸化水平显著升高(F=617.735,P=0.000)；单剂量给予氯胺酮后的45min(F=259.295,P=0.000)和4h(F=148.986,P=0.000),Cofilin的磷酸化水平均持续显著升高。在单剂量给予氯胺酮后的24h的时间点,Cofilin的磷酸化水平回到基础水平(F=2.453,P=0.137)。 也许 3.常春藤皂苷元结构改造与生物活性及其机制研究 (1)通过普通化学合成的方法,经柱色谱分离,得到了白色粉末状化合物N-(3-二甲氨基丙基)-常春藤皂苷元-17-甲酰胺(HGA)。质谱图显示分子离子峰是558.0([M+H]+)而HGA的相对分子质量为556.86；核磁氢谱的数据：1H-NMR(CD3OD):δ5.26(t,J=3.4Hz,1H,C=C-H),3.99(dd,J1=14Hz,J2=7.2Hz,1H),3.48-3.52(m,1H),3.41(d,J=10.8,1H),3.05-3.11(m,1H),2.91(t,J=7.2Hz,2H),2.71(s,6H,NMe2),1.91(s,1H),1.05-1.43(m,22H),0.78-0.95(m,18H),0.686(3H,s,CH3),0.596(3H,s,CH3),与HGA的结构相吻合；核磁碳谱数据：6180.02(C=0),143.67(C=C),122.65(C=C),72.30,65.76,60.07,55.38,46.20,46.10,42.22,41.82,41.51,40.99,39.20,37.97,36.43,35.90,33.58,33.20,33.02,31.81,30.14,27.06,25.93,25.03,24.87,23.06,22.57,22.44,19.38,17.62,16.56,14.

绵马素PB能够诱导HepG2细胞发生凋亡。首先,使用罗丹明123染色法检测绵马素PB作用于人肝癌HepG2细胞后线粒体跨膜电位的变化,结果呈现明显地下降趋势。其次,采用琼脂糖凝胶电泳检测梯状条带(DNA Ladder)的产生,可以看出加入绵马素PB后的HepG2细胞的泳道内均有明显的DNA Ladder出现。最后,利用AnnexinV-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡百分率,结果显示绵马素PB作用于HepG2细胞48h后,细胞的凋亡百分率显著升高,并且呈浓度依赖的方式。 3.绵马素PB通过调节PI3K/Akt/GSK-3β信号通路从而引起HepG2肝癌细胞凋亡(1)绵马素PB可以抑制PI3K的表达,抑制Ser473Akt的磷酸化,抑制Ser9GSK-3β的表达,随后上调NAG-1的表达。相似地,加入PI3K抑制剂渥曼青霉素后,各蛋白的表达效果和绵马素PB作用一致。该结果说明PI3K/Akt/GSK-3β信号通路可能是绵马素PB作用于HepG2肝癌细胞的主要分子机制之一。 BKM120分子量 (2)绵马素PB诱发了caspase-3的激活和PARP的裂解。用广谱caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理HepG2细胞2h后,可明显地抑制二者的变化。这说明绵马素PB诱导的HepG2细胞凋亡是通过caspase所依赖的途径。

综上所述,绵马素PB在不影响正常细胞生长的状况下,可以有效地抑制HepG2肝癌细胞的增殖,这种增殖抑制作用与其诱导的细胞凋亡密切相关。绵马素PB通过caspase所依赖的途径诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡,其中PI3K/Akt/GSK-3β/NAG-1信号通路可能作为最主要的分子机制之一。上述研究结果将对绵马素PB进一步的研究并开发为新药提供良好的理论基础。
世界范围内，乳腺癌发病率与死亡率高，是影响女性健康的重要疾病。其中HER-2(Human epidermal growth factor receptor-2)蛋白过表达乳腺癌，传统检测易误诊、漏诊，在治疗过程中易产生副作用及引发不良预后。随着纳米科技理论的进步及纳米颗粒制备工艺的改善，因金纳米颗粒独特的理化特性，将其引入肿瘤医学领域，对乳腺癌的检测与治疗有创新意义。 目的 通过金纳米颗粒制备及曲妥珠金纳米探针合成，探讨颗粒毒性、探针暗场应用及处理乳腺癌细胞实验效果，为乳腺癌纳米医学诊断与治疗研究提供依据。 时间 方法 以柠檬酸盐还原法制备金纳米颗粒(Gold nanoparticles,GNPs)，对颗粒进行透射镜(TEM)表征及紫外吸收光谱检测，通过静置检测金纳米颗粒时间稳定性；GNPs通过静电作用吸附曲妥珠单抗(Herceptin)，进而合成曲妥珠金纳米探针(GNP@Herceptin)，表征及稳定性检测方法同GNPs；中科院上海细胞库购买人乳腺癌细胞株MCF-7、SK-BR-3，免疫组化检测细胞HER-2蛋白表达；利用扫描电镜(SEM)，检测定位于细胞膜表面GNP@Herceptin，并在暗场环境下观察细胞膜上GNP@Herceptin；设置0-400mg/mL7浓度梯度GNPs，并设置培养液空白组，细胞增殖抑制剂盒检测GNPs细胞毒性；设置0-200ng/mL7浓度梯度GNPs、Herceptin和GNP@Herceptin，并设置培养液空白组，细胞增殖抑制试剂盒检测MCF-7与SK-BR-3细胞增殖抑制效果；设置0-1.0μg/mL4浓度梯度Herceptin、GNP@Herceptin，细胞凋亡试剂盒检测SK-BR-3细胞凋亡，细胞周期试剂盒检测SK-BR-3细胞周期阻滞；运用SPSS21.0对同种细胞不同浓度颗粒毒性、抗体与探针增殖抑制、细胞凋亡及周期阻滞数据进行单因素方差分析，同一浓度两种细胞颗粒毒性数据及抗体与探针最佳处理剂量采用两组独立样本t检验，检验水平α为0.05。

结果 金纳米颗粒近似圆形，粒径大小(14.11±1.13) nm，并可与曲妥珠单抗成功吸附，溶液澄清透亮，稳定性好；GNPs与Herceptin结合率为2.25：1，结合效果好；通过SEM检测，可发现定位于细胞膜表面的GNPs@Herceptin，并且在暗场环境下，可看到SK-BR-3细胞周围的橘黄色生物探针；GNPs浓度在400μg/mL时，MCF-7细胞存活率减少至43.9%(t=39.709，P=0.001)，在100μg/mL时，SK-BR-3细胞存活率为65.1%(t=6.796，P=0.002)，均有明显细胞毒性效果，但金纳米颗粒浓度下降至50μg/mL时，SK-BR-3与MCF-7细胞生存率分别为82.8%(t=1.979，P=0.119)、99.3%(t=0.177，P=0.868)，且未显示出细胞增殖抑制效果，说明低浓度GNPs有良好的生物相容性。Herceptin处理SK-BR-3细胞后，最佳用药剂量为7.143ng/1×104细胞，GNP@Herceptin处理细胞后最佳用药量从50ng/mL降低至25ng/mL，且差异具有统计学意义(t=14.774，P
目的：研究磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002联合丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）特异性抑制剂AZD6244对耐顺铂卵巢癌细胞株（SKOV3/DDP）增殖的影响，并探讨其可能机制。

Dacomitinib订单 方法： （1）MTT法检测SKOV3/DDP细胞的耐药性。 （2）MTT法检测LY294002（5、10、20μmol/L）、AZD6244（1、2、4μmol/L）单独及联合作用对SKOV3/DDP细胞增殖的影响，Chou-Talalay联合指数法计算半数抑制浓度（Inhibitory concentration50％，IC50）及合用指数（Confidence interval，CI）。 （3）根据MTT结果确定联合用药的浓度，将实验分为对照组、LY294002组（5μmol/L）、AZD6244组(7μmol/L)及联合组(LY2940025μmol/L+AZD62447μmol/L);作用48h后，采用MTT法绘制细胞生长0d、1d、2d、3d、4d、5d的曲线。 （4）计算各组细胞倍增时间。 （5）平板克隆实验检测各组细胞集落形成能力。 （6）AnnexinⅤ-PE/7-ADD染色结合流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率，并测定细胞周期。 （7）Western blot法检测各组细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化的ERK1/2（P-ERK1/2）、AKT、磷酸化的AKT(P-AKT)、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）及激活型Caspase3蛋白的水平。 结果： （1）SKOV3/DDP细胞顺铂的IC50为2.3512μg/ml, SKOV3细胞顺铂的IC50为0.3035μg/ml，SKOV3/DDP细胞耐药指数为7.

84%（13/147）。 2.NSCLC患者原发灶与配对淋巴结转移灶c-MET基因扩增的差异性比较 c-MET扩增阳性率配对原发灶为8.45%（6/71），配对淋巴结转移灶为18.31%（13/71）。配对的71对原发灶、转移灶组织中，原发灶扩增阳性6例，转移灶扩增阳性13例，转移灶扩增阳性而对应的原发灶扩增阴性8例，原发灶扩增阳性而对应的转移灶扩增阴性1例，淋巴结转移灶扩增阳性率高于原发灶，两组间差异有统计学意义（McNemar检验,p=0.039）。

3. NSCLC患者原发灶与配对淋巴结转移灶c-MET基因扩增的一致性比较 用淋巴结转移灶预测原发灶c-MET扩增阳性，其一致性良好（kappa=0.464, p＜0.001），通过淋巴结转移灶判断原发灶扩增情况，灵敏度为83.3%（5/6），特异度为87.7%（57/65）。原发灶和淋巴结转移灶两组间c-MET基因扩增阳性率有统计学差异，但是一致性良好，说明淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率的升高是基于原发灶的扩增情况的，它是对原发灶扩增情况的一个放大。 4. NSCLC患者原发灶和淋巴结转移灶c-MET基因扩增与临床特征的关系 （1）147例NSCLC原发灶当中，c-MET扩增阳性率在男、女两个亚组当中分别为10.6%和7.1%（p＝0.489），在高龄（≥60岁）和非高龄（＜60岁）两个亚组当中分别为7.1%和11.3%（p＝0.372），在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为12.8%和3.1%（p＝0.213），在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为4.2%和10.1%（p＝0.362），均无统计学差异。即在NSCLC原发灶当中c-MET基因扩增与性别、年龄、吸烟史及病理类型无关。 （2）71例NSCLC配对原发灶当中，c-MET扩增阳性率在男、女两个亚组当中分别为8.6%和8.3%（p＝1.000），在高龄和非高龄两个亚组当中分别为7.3%和10.0%（p＝0.692），在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为12.1%和3.6%（p＝0.142），在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为4.0%和10.9%（p＝0.414），均无统计学差异。即在配对的71例NSCLC原发灶当中c-MET基因扩增与性别、年龄、吸烟史及病理类型无关。 哪里 那个 （3）71例NSCLC配对转移灶当中，c-MET扩增阳性率在男、女两个亚组当中分别为28.6%和8.3%（p＝0.035），在吸烟和不吸烟两个亚组当中分别为28.2%和6.3%（p＝0.029），差异均存在统计学意义。在高龄和非高龄两个亚组当中分别为17.6%和23.3%（p＝0.371），在鳞癌和腺癌两个亚组当中分别为8.0%和23.9%（p＝0.414），差异均无统计学意义。即在NSCLC配对转移灶当中c-MET扩增在男性、吸烟患者明显升高：出现N2以上淋巴结转移患者的淋巴结转移灶组织中，男性为28.6%（10/35）存在扩增，吸烟患者为28.2%（11/39）存在扩增，其中男性吸烟患者味30.4%（7/23）存在扩增。

结论 1.参与本次实验中国人群NSCLC患者的肿瘤组织原发灶中c-MET基因扩增阳性率为8.84%，较国外文献报道偏高，与国内报道的阳性率并不一致，但本次结果在国内报道阳性率的范围内，由此预测中国人群c-MET基因扩增率高于欧美人群。考虑到针对c-MET基因扩增的分子靶向药物治疗可以使近十分之一的NSCLC患者获益，故c-MET基因扩增检测应当同EGFR、EML4-ALK等共同作为NSCLC的常规基因检测项目。 2.在原发灶和淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率并不相同，淋巴结转移灶高于原发灶。考虑到淋巴结转移灶c-MET扩增阳性率的升高是基于原发灶的扩增情况的，发生淋巴结转移能够放大原发灶扩增的情况。原发灶扩增阳性者淋巴结转移灶扩增更加明显，原发灶未发生扩增者淋巴结转移灶亦无明显扩增，原发灶只是发生轻度扩增而导致无法检出者，淋巴结转移灶会发生较明显的扩增，从而将这部分c-MET扩增患者检出。多数原发灶c-MET扩增阳性的患者，淋巴结转移灶扩增也为阳性，灵敏度和特异度均较高，一致性良好。因而，对淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增检测能筛出更多有适应症的患者。以往的分子靶向治疗经验已证明，无论是原发灶还是转移灶出现基因突变，都可以作为相应分子靶向药物治疗的适应症。综上所述，用淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增的检测，效果优于原发灶。 3.本次研究当中发现c-MET基因扩增在原发灶与基线资料无关，但在淋巴结转移灶男性患者高于女性患者，吸烟患者高于不吸烟患者，提示对于存在N2级以上淋巴结转移的男性吸烟患者，c-MET基因扩增检测对其有非常重要的临床诊疗价值，对于这类型的患者，如果有可能，均应对其淋巴结转移灶进行c-MET基因扩增的检测。
目的：通过检测常见的45个肿瘤基因在NSCLC中的突变状况，筛查与NSCLC相关的驱动基因，分析其常见的突变位点及突变类型，并探讨其与NSCLC的临床一般资料、病理特点、疗效及预后的相关性，为NSCLC患者的个体化治疗提供一定的理论依据。

方法： 1.收集大连医科大学附属第一医院2012年3月至2013年12月、经组织病理学证实的NSCLC患者共96例，收集并记录所有患者的临床信息，包括1）一般资料，如性别、年龄、吸烟史等；2）病理特点，如标本来源、病理类型及分化程度；3）肺癌TNM分期（根据2009年第七版IASLC新分期）；4）治疗情况，如治疗方案、疗效和生存期随访等。 2.采用Ion Torrent新型基因测序技术，检测与肿瘤相关的常见45个基因状态，筛选出样本中突变频率大于10%的相关基因，分析每个基因具体的突变信息。针对筛选出的驱动基因，进行精确度更高的Sanger测序验证。 Mdm2 pathway 抑制剂 3.采用SPSS13.0统计软件，探讨驱动基因与临床资料的相关性，应用χ2检验、Fisher确切概率法及秩和检验，进行各组间率的分析；应用Kaplan-Meier法分析生存时间，并绘制生存曲线，不同组间的生存曲线采用log-rank检验；采用Cox多因素回归模型，分析多个可能影响预后的因素；应用Spearman相关分析，探究基因之间的相关性，所得统计结果，以P10）的基因进行筛选并分析： 2.1EGFR基因突变占34.4%（33/96），其中19外显子突变率60.0%（20/33），突变类型为缺失突变；20外显子突变者率6.1%(2/33)、21外显子突变率45.5%(12/33)，二者突变类型为错义突变。 2.2KDR基因突变占24.0%（23/96），其中6外显子突变率为30.4%(7/23)，突变类型为翻译终止突变；7外显子突变率占60.9%(14/23)、11外显子突变率17.4%（4/23），二者突变均为错义突变。 2.3KRAS基因突变占10.4%（10/96），10例突变全部发生在2外显子，突变类型为错义点突变。 3.驱动基因与一般临床资料及病理特征的相关性： 3.1EGFR在女性中突变率高于男性（P=0.007）,腺癌高于鳞癌（P=0.038），不吸烟者高于吸烟者（P=0.02），中-高分化者高于低分化者（P=0.

The properties oftumors to release and induce several angiogenic

and anti-angiogenic factors which play crucial roles in regulatingendothelial cell (EC) proliferation,migration,apoptosis orsurvival,cell-cell and cell-matrix adhesion through differentintracellular signaling are thought to be the essentialmechanisms during tumor-induced angiogenesis.Tumorangiogenesis actually starts with tumor cells releasingmolecules that send signals to surrounding normal hosttissue.This signaling activates certain genes in the hosttissue that,in turn,make proteins to encourage growth ofnew BVD-523供应商 blood vessels.In this review,we focus the mechanismsof tumor-induced angiogenesis,with an emphasis on theregulatory role of several angiogenic and anti-angiogenicagents

during the angiogenic process in tumors.Advancesin understanding the mechanisms of tumor angiogenesishave led to the development of several most effective anti-angiogenic and anti-metastatictherapeutic agents and alsohave provided several techniques for the regulation ofcancer’s angiogenic switch.The 购买CHIR-258 suggestion is made thatstandard cytotoxic chemotherapy and angiogenesis inhibitorsused in combination may produce complementarytherapeutic benefits in the treatment of cancer.
Ten new 1, 5-diarylpyrazole-3-carboxamide compounds were synthesized and their structures were identified by 1H-NMR and FAB-MS. The primary biological tests showed that compound 4j

exhibited some ALK5 inhibitory activity at concentration of 1μmol/L.
目的:探讨表达可溶性TβRⅡ胞外区片段的腺病毒载体构建,及其在肿瘤生物治疗学方面的作用机制和效果。方法:RT-PCR法克隆鼠源性TβRⅡ胞外区编码序列,采用AD-easyXLAdenovirusVectorSystem试剂盒构建表达上述基因的腺病毒载体。通过ELISA试验验证表达可溶性TβRⅡ胞外区序列的腺病毒载体转染细胞后所具有的阻断TGF-β的作用。应用于小鼠体内试验,观察该病毒载体对免疫效应细胞抗肿瘤活性的影响,从而评价其在肿瘤治疗方面的作用。结果:克隆了鼠源性TβRⅡ胞外区编码序列并成功地构建了表达这些基因的腺病毒载体。功能试验表明由腺病毒表达的TβRⅡ胞外区片段具有阻断TGF-β信号通路的作用。体内试验则表明应用于荷瘤小鼠可抑制肿瘤的发展。结论:表达可溶性TβRⅡ胞外区片段的腺病毒载体可显著地提高免疫细胞的杀伤能力,抑制肿瘤生长,为肿瘤的生物学治疗提供了新的研究方向。
衰老是人类生命过程中的必然规律,但并不意味着人类在自身衰老方面无所作为,长期以来,人类都梦想着延缓衰老,延长寿命,近年来在细胞生物学和分子生物学迅速发展的推动下,衰老机理研究已取得重大进展,抗衰老研究已成为生命科学和医学领域的前沿课题,本文对近年来在衰老领域的最新进展作一综述。

目的:转化生长因子β具有调控细胞的生长和分化、细胞的黏附和迁移、细胞外基质的产生和纤维化等一系列生物过程的作用。已有不少研究发现转化生长因子β参与增殖性玻璃体视网膜病变的发生发展过程,导致视功能的严重损伤。资料来源:应用计算机检索Medline及Highwire1990-01/2004-08的转化生长因子β在增殖性玻璃体视网膜病变中作用的相关文章,检索词为“TGF,ProliferativeVitreoretinopathy”,并限定文章语言种类为Eng-lish。同时计算机检索维普中文科技期刊数据库1998-01/2004-08的转化生长因子β在增殖性玻璃体视网膜病变中作用的相关文章,检索词为“转化生长因子β,增殖性玻璃体视网膜病变”。资料选择:对资料进行初审,选取有关转化生长因子β的生物学物性及其在增殖性玻璃体视网膜病变发生发展的过程中所起作用的文献。资料提炼:共收集到26篇相关文献。资料综合:对收集的文献按几个部分进行归类如介绍转化生长因子β的生物学特性、相关受体和增殖性玻璃体视网膜病变发生机制。结论:增殖性玻璃体视网膜病变是糖尿病视网膜病变、玻璃体出血、裂孔源性视网膜脱离等眼底疾病的致视功能丧失严重并发症,近年来已成为眼科研究热点之一。对于参与其发生发展的转化生长因子β及其他相关生长因子需做进一步的分子生物学方面的深入研究,以期为早期干预保护视功能奠定理论依据。
The KRX-0401制造商 asymmetric synthesis of (-)-(4R, 5R)-4-[5-(benzo[1, 3]dioxol-5-yl)-4-hydroxyl-1- (pyridin-2-yl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol-3-yl]-benzamide with improved Juliá-Colonna asymmetric epoxidation procedure as key step was described.

5μ mol/L GDC-0941)及联合Ⅱ组(5.0μ mol/L AZD6244+5.0μ mol/L GDC-0941)。细胞经过不同组合浓度的抑制剂作用后,MTT法绘制增殖抑制曲线；平板集落形成法检测集落形成能力的改变；流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布；Western blot检测不同组中抑制剂靶点下游周期及凋亡相关蛋白表达的差异。 在两株NSCLC细胞中,单独抑制RAS/RAF/MEK通路或PI3K/AKT/mTOR通路效果较差。抑制剂AZD6244或GDC-0941作用于A549细胞的抑制率分别可达25.5%和38.1%,作用于NCI-H157细胞的抑制率分别可达16.9%和35.1%。Westernblot结果显示AZD6244抑制RAS/RAF/MEK通路后(降低pERK活化)激活PI3K/AKT/mTOR通路(增强pAKT活化)。相反,GDC-0941抑制PI3K/AKT/mTOR通路后激活了RAS/RAF/MEK通路。结果表明单通路突变的细胞,仅抑制该突变通路,效果差。未突变通路的抑制剂对肺癌细胞的增殖也有抑制作用。无论肺癌细胞是KRAS单突变,还是KRAS/PTEN双突变,单通路抑制效果较差,需要双通路联合抑制提高疗效。 RAS/RAF/MEK和PI3K/AKT/mTOR双通路联合抑制可增强KRAS/PTEN双突变的NSCLC细胞的生长抑制作用。在NCI-H157细胞中,低剂量的联合Ⅰ组表现为两药协同作用(q值=1.22),高剂量的联合Ⅱ组表现为两药相加作用(q值=0.92)；集落形成能力下降[77.2±1.54个/孔VS61.5±2.12个／孔,P<0.01]；凋亡率增加[18.3±0.82%VS21.32±0.56%,P<0.01]和[27.14±1.58%VS42.45±4.42%,P<0.01]；凋亡率显著增加[37.85±3.18%VS52.27±4.36%,P
研究背景及意义

DNA Methyltransferase inhibitor体内 银配合物已经被研究证明具有抗菌、抗肿瘤特性。单质子化的脱氢脱甲基斑螯酸银配聚物(Ag-SP-DNC)是我们合作课题组在前期的实验研究中新合成的银配聚物。在这项研究中,我们得到的实验结果表明Ag-SP-DNC是通过活性氧(ROS)介导的线粒体依赖性细胞凋亡通路导致肺癌细胞发生凋亡。Ag-SP-DNC对人非小细胞肺癌细胞A549有生长抑制作用,将细胞周期抑制于G2/M期,导致细胞发生凋亡。Ag-SP-DNC引起细胞发生凋亡是与细胞内活性氧(ROS)的水平密切相关。进一步研究证明Ag-SP-DNC可破坏细胞线粒体膜电位,诱导caspase-3活化促使凋亡诱导因子AIF、EndoG从线粒体转移到细胞核诱导细胞发生凋亡。这个研究的意义在于为开发银化合物为新的抗肿瘤药物提供实验依据。 方法 1.常规复苏、培养人非小细胞肺癌细胞株A549细胞至对数生长期备用。 2.MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测细胞生存率。 3.SRB(磺酰罗丹明B)法检测细胞存活率。 或者 4.PI单染流式细胞术检测细胞周期情况。 5. DTNB[二硫代二硝基苯甲酸]法检测细胞内GSH水平。 6.倒置显微镜下观察A549细胞形态学变化。 7. TRITC—鬼笔环肽标记扫描共聚焦显微镜观察细胞微丝骨架。 8. Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪分析细胞凋亡率。 9.JC-1标记流式细胞仪分析细胞线粒体膜电位。 10.荧光探针DCFH-DA进行细胞内活性氧水平检测 11.caspase-3(Asp175) antibody (Alexa fluor488conjugate)标记流式细胞术检测细胞内caspase-3活化水平。

12.Fluo-3/AM标记流式细胞术检测细胞内游离Ca2+水平。 13. Western blot检测细胞内AIF, EndoG, Bcl-2, P53等凋亡相关蛋白表达。 14.实验结果采用SPSS16.0软件进行Student’s T test, P<0.05表示有显著差异,P
恶性肿瘤正成为威胁人类生命健康的头号疾病。目前临床上应用的直接作用于细胞有丝分裂、DNA合成和修复等过程的传统细胞毒类药物存在选择性低、毒性大等缺点。因此,以与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号通路的关键酶作为药物筛选靶点,寻找选择性作用于特定靶点的新型抗癌药物已成为当今抗肿瘤药物研发的重要方向。这些小分子抑制剂与传统的肿瘤治疗药物相比往往具有更好的疗效和较小的毒副作用。磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide3-kinase, 确认细节 PI3K)是细胞生命活动中的关键信号分子。PI3K介导的信号通路是细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,控制着细胞生长、增殖、存活、分化、调亡、转移、代谢、转录和翻译等多种细胞生物学过程。大量研究表明PI3K/Akt信号通路与人类多种肿瘤的发生发展密切相关。以该信号通路中关键酶为靶点的抗肿瘤药物研究成为肿瘤预防和肿瘤靶向治疗的热点之一。 BENC-511是本研究室发现的3-硝基-2H-苯并吡喃类抗肿瘤衍生物,在体内外均表现出良好的抗肿瘤活性。BENC-511的药理学特点主要表现为：1)通过作用于PI3K/Akt信号通路,抑制肿瘤细胞中Akt的磷酸化及下游蛋白mTOR/p70S6K、4E-BP-1的表达；2)通过诱导肿瘤细胞凋亡相关蛋白PARP的裂解,活化caspase-3,诱导肿瘤细胞的凋亡；3)在体外,BENC-511对包含血液瘤、固体瘤等10余种肿瘤细胞的生长均有较强的抑制作用；4)在多发性骨髓瘤(OPM2, RPMI-8226)异种移植模型中,小鼠口服给药50mg/kg/d,连续给药20天,与对照组相比,BENC-511对肿瘤生长的抑制率高达75%以上,而对小鼠肝脏酶、血液生化指标等没有影响,未观察到任何毒副作用。因此,BENC-511是一个靶向作用于PI3K/Akt通路、具有良好抗肿瘤活性和较低毒性的好的苗头化合物。 为了寻找抗肿瘤活性和选择性更好的3-硝基-2H-苯并吡喃类化合物,我们以BENC-511为先导化合物,以计算机辅助药物设计方法为指导,结合PI3K激酶以及下游信号通路关键酶的三维结构对其进行结构修饰,确定6位为主要的结构修饰位点。我们以氨基取代6位的溴,然后在伯氨基上引入不同的酰基侧链,设计了一系列酰胺衍生物。以3-乙氧基水杨醛为起始原料,经硝化,醛基、酚羟基保护,钯-碳催化氢化还原,氨基Boc保护,醛基脱保护以及环合反应得到6-叔丁氧甲酰氨基-3-硝基-8-乙氧基-2H-苯并吡喃关键中间体。在酸性条件下脱掉氨基的Boc保护基,与不同取代的羧酸,在EDCI/HOBt的经典条件下,缩合得到目标化合物。 本研究共合成BENC-511类似物24个,并对其抗肿瘤活性做了初步研究。体外细胞(K562, DU145和Hela)活性筛选试验结果显示,这一系列化合物对白血病K562细胞和前列腺癌DU145细胞均表现出较好的抑制活性,对子宫颈癌Hela细胞抑制活性较弱。其中,化合物KGS-19、KGS-22和KGS-24具有良好的抗肿瘤活性,对K562细胞的IC50值分别为0.53、0.43和0.

Platinum-based doublet chemotherapy has been a standard for patients with advanced

stage disease.Improvements in overall survival and quality of life have been modest.Improved knowledge of the aberrant molecular signaling pathways found in NSCLC has led to the development of biomarkers with associated targeted therapeutics,thus changing the treatment paradigm for many NSCLC patients.In this review,we present a summary of many of the currently investigated biologic targets in NSCLC,discuss their current clinical trial status,and also discuss the potential for development of other targeted agents.
背景与目的间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma OSI-744溶解度 kinase,ALK)阳性非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的一个重要亚型。ALK阳性NSCLC脑转移患者的治疗尚无标准模式。方法本研究对我院2013年3月-2016年3月期间确诊的ALK阳性NSCLC脑转移患者的临床资料和治疗情况进行回顾性分析,探讨不同治疗模式患者的转归。结果

84例晚期ALK阳性NSCLC患者中,22例初诊时有脑转移,剔除3例合并表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)双突变患者,共19例纳入分析。中位颅内疾病进展时间(progression-free 还有 survival,PFS)为12.0个月,一线脑部局部治疗(P=0.021)及一线克唑替尼治疗(P=0.030)可延长PFS;一线克唑替尼联合脑部局部治疗的中位颅内PFS为27.0个月,而单纯克唑替尼治疗的PFS仅为4.2个月。结论一线克唑替尼联合脑部局部治疗有助于延长ALK阳性晚期NSCLC患者的颅内PFS,因例数少,尚有待大样本多中心前瞻性临床研究证实。
背景与目的伴有脑转移的肺癌预后差。克唑替尼可有效治疗ROS1(C-ros oncogene 1 receptor tyrosine kinase)融合基因阳性的肺癌,但由于血脑屏障通透率较低,对脑转移灶的治疗效果不佳。本文总结1例综合运用手术、全脑放疗+残留灶补量放疗及克唑替尼等手段治疗ROS1融合基因阳性伴有症状脑转移的肺腺癌患者,并对其有效性及安全性进行讨论和分析。方法采用手术切除占位效应明显、引起头疼症状的颅内病灶,获得病理;因ROS1融合基因阳性,给予克唑替尼治疗,250

mg,2次/d;术后进行全脑放疗+残留灶补量放疗。按照实体瘤疗效评价标准1.1版(Response Evaluation Criteriation in Solid Tumours,RECIST v1.1)评价客观疗效。按照不良反应通用术语标准4.0版(Common Terminology Criteria for Adverse Events v4.0,CTC AE v4.0)评估用药期间发生的不良事件。结果该患者服用克唑替尼3个月后,肺部病变接近完全缓解(complete Vandetanib核磁共振 remission,CR),颅内病变部分缓解(partial response,PR),腹腔病变CR,视物模糊症状减轻。结论综合运用手术、全脑放疗+残留灶补量放疗、克唑替尼治疗ROS1融合基因阳性伴有症状脑转移的肺腺癌患者,可有效控制颅内颅外病灶,耐受性好。
克唑替尼是MET/ALK激酶双靶标抑制剂,可能成为ALK融合蛋白呈阳性的非小细胞肺癌患者的潜在靶向药物。从2007年立项到2011年FDA批准上市,仅用了4年时间。现综述了克唑替尼的合成进展,为该药的进一步研究提供参考。
写下这个题目真有点别扭,有人懂你的意思吗?这个学术社会就这样,新名词总是令人应接不暇。鲁迅说过,世上本无路,人走多了就成为路。这新名词讲多了,说不定就出现一个新学科呢。肺癌的生物学分类,一直以来沿用组织学的分类法:将肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌两大
1文献来源研究一:TakahashiT,SonobeM,KobayashiM,et al.Clinicopathologic features of non-small-cell lungcancer with EML4-ALK fusion gene[J].Ann SurgOncol,2010,17(3):889-897.

2%。
神经母细胞瘤(neuoblastonma,NB)是小儿最常见的实体肿瘤之一,临床表现变异较大,高危NB进展迅速,即使行高强度清髓化疗,肿瘤复发仍然常见,死亡率较高为发现有效NB治疗药物和靶点,必须充分研究认识NB发病机制中的关键分子。间变性淋巴瘤激酶(ALK)是一种受体型酪氨酸激酶,其异常存在于多种肿瘤中,与肿瘤发生发展密切相关,如间变性大细胞淋巴瘤、横纹肌肉瘤、炎症性肌纤维母细胞瘤、NB。ALK的异常形式主要包括基因融合、基因突变、基因扩增及蛋白表达增加随着酪氨酸激酶抑制剂在临床抗肿瘤治疗中的应用以及新的特异性小分子ALK抑制剂的研发,ALK异常与NB发生发展关系及针对ALK异常的NB靶向治疗获得了较多关注和研究。本文主要针对ALK异常与NB发生发展关系的研究进行综述
肺癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,其中85%以上为非小细胞肺癌(non-small 或者 cell lung cancer,NSCLC)。目前,对于复发或转移性晚期NSCLC,化疗是必选治疗方法之一,但其疗效已进入平台期,近期和远期疗效均不甚理想。靶向治疗作为20世纪90年代以来的肿瘤研究重点,在NSCLC的治疗中已占据重要地位。针对表皮生长因子受体的单克隆抗体(西妥昔单抗)和小分子酪氨酸激酶抑制剂(厄洛替尼尼或吉非替尼)、血管内皮生长因子的单克隆抗体(贝伐珠单抗)以及针对ALK阳性突变的抑制剂Crizotinib均已成为晚期NSCLC的一线治疗选择其中,尤其以小分子酪氨酸激酶抑制剂疗效卓越,在表皮生长因子受体突变的患者中,其单药应用的疗效优于一线化疗,有效率高达60%以上,可使患者的无疾病进展时间延长至10个月。本文将就以上几种药物的相关临床研究对目前晚期NSCLC一线靶向治疗加以综述。
1例52岁男性患者,因”右肺腺癌全身多发转移,肾功能不全”入院,入院后给予透析治疗,并拟接受抗肿瘤治疗。通过查阅大量文献,结合化疗药物在透析患者的药代动力学特点,最终制定标准剂量多西他赛联合顺铂(DP)的治疗方案,化疗结束后立即给予透析。治疗后患者血液学毒性反应0级,胃肠道反应2级,血肌酐波动在167.3~298.7μmol·L~(-1),治疗过程中未出现严重不良反应。本病例提示给予非小细胞肺癌(NSCLC)透析患者标准剂量的多西他赛联合顺铂方案是相对安全的,即使为肾功能不全透析患者,临床上选择合适的治疗方案,患者也可以耐受化疗。
色瑞替尼是一种口服酪氨酸激酶抑制剂,用于治疗间变型淋巴瘤激酶(ALK)阳性的转移性非小细胞肺癌或经克唑替尼治疗后病情恶化及不能耐受治疗的非小细胞肺癌。现有临床试验数据证明了色瑞替尼的有效性及安全性。该药于2014年4月29日通过美国FDA加速审批程序批准上市。本文对其药理作用、药动学、临床试验、安全性评价等进行归纳总结。
非小细胞肺癌(non-small

HSP抑制剂 cell lung cancer,NSCLC)是造成人类死亡最多的恶性肿瘤之一,其五年生存率一直徘徊在20%以下。自肺癌领域首个分子靶向药物吉非替尼上市以来,靶向药物因其低毒、高效、便于给药的临床特点,己逐渐成为治疗NSCLC的重要选择之一。因此,筛选和证实肿瘤驱动基因已经成为未来靶向药物研发的重中之重。近来,越来越多的学者把焦点转移到ROS1融合基因上,并且已经有相关数据及研究表明ROS1融合基因被证实为NSCLC新的有潜力的治疗靶点,因此我们现就ROS1融合基因在NSCLC中的相关研究进展做一综述。
肝细胞生长因子/c-MET(hepatocyte growth factor/c-MET,HGF/c-MET)信号通路可通过多种机制如c-MET突变、扩增、过表达和HGF过表达被异常激活,并在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的发生发展以及表皮生长因子受体抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)的耐药性方面发挥重要作用。因此,c-MET是继EGFR、ALK之后NSCLC的又一分子治疗靶点。目前c-MET抑制剂在一些临床试验中表现出了良好的的应用前景,但其在临床应用中的有效性和安全性的评估,以及对于c-MET检测方法的选择及判定标准还需进一步讨论。本文就c-MET在NSCLC中的作用机制、治疗前景和检测方法的选择作一综述。
目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)中棘皮动物微管相关蛋白4-间变型淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因和表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况,从而指导有效的个体化靶向治疗。方法采用扩增阻滞突变系统(ARMS)-聚合酶链反应(PCR),检测200例NSCLC患者EML4-ALK融合基因和EGFR基因表达情况。结果

200例NSCLC患者中,EML4-ALK融合基因扩增阳性为16例(8%),EGFR基因突变为64例(32%),18外显子(G719X)突变1例,19外显子突变32例,20外显子突变4例,21外显子突变25例,19外显子和20外显子联合突变1例20外显子和21外显子联合突变1例。本组EML4-ALK融合基因阳性患者中均无EGFR基因突变发生。结论NSCLC患者中,EML4-ALK融合基因和EGFR基因突变检测对有效的个体化靶向治疗至关重要。
肿瘤已成为严重威胁人类健康的重大疾病之一。近年来随着对肿瘤细胞内的信号转导、细胞周期调控、细胞凋亡过程的深入研究,针对分子靶点的高效、低毒、特异性强的新型抗肿瘤药物已成为当今抗肿瘤药物研究开发的重要方向。笔者综述了近5年FDA批准上市的单靶点小分子抗肿瘤药物、多靶点小分子抗肿瘤药物和抗肿瘤单克隆抗体的临床应用和临床研究进展。
美国FDA于2015年12月11日批准Genentech公司生产的Alecensa(alectinib)用于治疗ALK(anaplastic CYC202 lymphoma kinase,间变性淋巴瘤激酶)阳性的晚期转移性非小细胞肺癌(NSCLC),适用于对Xalkori(crizotinib,辉瑞公司出品)不耐受或经Xalkori治疗后病情继续恶化的肺癌患者。肺癌是美国最主要的致死性癌症之一,据美国国立癌症研究院(NCI)估计,美国2015年约有221 200例新诊断肺癌病例,致死约158 040人。有几类癌症的癌细胞可能会发生ALK基因突变,其中就包括肺癌,非小细胞肺
There is high expectation for significant improvements in cancer patient care after completion of the human genome project in 2003.