本试验中主要选用的遗传背景为C57BL/6J×129Sv的小鼠对促性腺激素应答效果良好,卵泡和卵母细胞发育正常。研究发现,22~24日龄C57BL/6J×129Sv野生型小鼠在PMSG(5 IU)诱导44~48 h后,卵巢表面获得的排卵前卵泡数量较多,卵泡内EGFR表达水平与分布正常;h CG继续诱导12 h后,输卵管内收集到大量MII期的卵母细胞,IVF的受精率偏低,但受精后胚胎发育良好,形态正常;IVM的自发成熟率较高,染色体形态规则。~2.卵母细胞成熟在Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠中被显著抑制。Western Blot结果表明,Egfrfl/flCyp19Cre/+和Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠卵巢颗粒细胞内EGFR蛋白水平显著下降,分别为对照组的35%和15%左右。应用PMSG和h 购买Necrostatin-1 CG进行超数排卵处理后,卵巢内的卵丘细胞紧紧包围卵母细胞,透明质酸酶很难将其从卵母细胞上剥离;Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠相对于对照组仍有60%左右处于GV期;此时从Egfrfl/flCyp19Cre/+和Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠输卵管壶腹部收集到的卵母细胞数量都有明显降低,尤其是Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠,仅为对照组的18%左右,且成功排卵的卵母细胞中,部分仍处于GV期,Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠高达50%以上。3.卵巢颗粒细胞中CNP的产生受FSH的正调控和LH的负调控。通过对钠肽家族表达过程进行全基因组水平实时监测以及进一步转录和翻译水平的研究发现,FSH和LH/h

CG仅对NPPC具有调控作用,而对NPPA和NPPB没有影响,且FSH上调NPPC表达,LH/h CG抑制NPPC表达。受体NPR2在壁层颗粒细胞和卵丘细胞中都有表达,在卵丘细胞略高,FSH/PMSG引起了NPR2 m RNA的缓慢提高,44 h后显著下降,LH/h CG处理3 h后抑制其表达。CNP对于体外培养的卵泡中LH介导的卵母细胞GVBD没有影响,但可有效促进体外培养的壁层颗粒细胞中c GMP的产生和抑制体外培养的卵丘卵母细胞复合体中卵母细胞GVBD的发生。体外培养的壁层颗粒细胞中,LH/h CG抑制了CNP诱导的c GMP的产生过程,即降低了壁层颗粒细胞对CNP的敏感性。此外,Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠中,NPPC的表达仍响应LH调控发生了显著的下降,与野生型小鼠表现一致,说明EGFR的缺失不影响LH对NPPC的调控作用。4.EGF/EGFR通路调控LH介导的c

GMP的早期迅速下降,但对于LH依赖性NPPC m RNA表达下调不是必要的。在活体和离体情况下,LH/h CG处理都导致了c GMP水平和NPPC m RNA的显著下降,但c GMP的下调非常迅速,早于NPPC m RNA的下降1 h以上。体外培养的小鼠卵泡经EGF样生长因子Areg处理后,卵泡中NPPC m RNA的表达受到抑制,等同于LH的抑制效果;并且Areg的抑制作用被EGFR激酶抑制剂AG1478完全阻止,但LH依赖性NPPC表达抑制对AG1478不敏感。卵泡中LH对NPPC的抑制作用在4类EGFR信号通路缺陷小鼠中也未受到影响,进一步表明,LH依赖性NPPC m RNA表达调控不是通过EGFR信号通路介导的。采用AG1478抑制体外培养的卵泡内EGFR的效应后,早期LH对c

Selleck Gemcitabine GMP水平的迅速下调被完全抑制;进一步研究发现,EGFR在LH诱导15~30 min内即发生了显著的磷酸化,表明EGF/EGFR参与了c GMP的早期调控,而配体CNP可能作用于后期的反应。Egfrdelta/flCyp19Cre/+小鼠体外培养的排卵前卵泡中,c GMP的水平在LH诱导后发生了迅速的部分下降,但该下降不足以引发卵母细胞的GVBD。综上所述,本文选用在卵巢颗粒细胞中特异性敲除EGFR基因的小鼠模型,从细胞、组织和活体水平验证了CNP/NPR2和EGF/EGFR信号通路在卵母细胞发育和成熟过程中的关键调控作用。该过程中,c AZD2281 花费 GMP水平受多条冗余信号通路的调控。EGF/EGFR通路调控LH介导的c GMP的早期迅速下降,对于卵母细胞成熟是必需的。本研究为理解卵母细胞的成熟调控提供了必要的实验依据,为临床上卵母细胞相关的不孕不育症的预防和治疗提供了新的研究思路。
细胞缝隙连接通讯(Gap junctional intercellular communication, GJIC)是哺乳动物细胞间普遍存在的一种通讯方式,在细胞增殖、分化、凋亡、死亡等生理过程中具有重要作用。镉是一种重要的工业和环境污染物,危害人和动物的健康,肝脏是镉的重要靶器官之一。镉不仅引起肝细胞凋亡,还能抑制肝细胞GJIC,影响细胞缝隙连接蛋白的表达和分布,但GJIC在镉暴露肝脏损伤过程中的作用机制尚不明确。本研究在体外用2.5、10 μmol/L镉和50 μmol/L红景天苷(Salidroside, Sal)单独或联合作用BRL 3A细胞6、12h；并选择80-100g雌性SD大鼠,50 mg/L镉自由饮水,35 mg/kg B.W. Sal每天灌胃一次,单独或联合处理12周,建立动物模型。通过细胞生物学和分子生物学方法,探讨镉致大鼠肝脏损伤过程中GJIC的变化以及其在钙离子通路、MAPK通路以及自噬调控镉致肝细胞毒性损伤中的作用机制,并阐明Sal在上述过程中的保护作用。为揭示镉致肝脏毒性损伤的分子机制提供依据。1、镉致大鼠肝细胞损伤及Sal的保护作用为了研究镉对大鼠肝细胞毒性的影响,本试验通过体内、体外试验检测镉及Sal对SD大鼠细胞活力、细胞形态、细胞指数、肝脏脏器指数、肝脏组织病理学变化和肝细胞超微结构的变化。体外试验结果表明,不同剂量镉(2.