绵马素PB能够诱导HepG2细胞发生凋亡。首先,使用罗丹明123染色法检测绵马素PB作用于人肝癌HepG2细胞后线粒体跨膜电位的变化,结果呈现明显地下降趋势。其次,采用琼脂糖凝胶电泳检测梯状条带(DNA Ladder)的产生,可以看出加入绵马素PB后的HepG2细胞的泳道内均有明显的DNA Ladder出现。最后,利用AnnexinV-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡百分率,结果显示绵马素PB作用于HepG2细胞48h后,细胞的凋亡百分率显著升高,并且呈浓度依赖的方式。 3.绵马素PB通过调节PI3K/Akt/GSK-3β信号通路从而引起HepG2肝癌细胞凋亡(1)绵马素PB可以抑制PI3K的表达,抑制Ser473Akt的磷酸化,抑制Ser9GSK-3β的表达,随后上调NAG-1的表达。相似地,加入PI3K抑制剂渥曼青霉素后,各蛋白的表达效果和绵马素PB作用一致。该结果说明PI3K/Akt/GSK-3β信号通路可能是绵马素PB作用于HepG2肝癌细胞的主要分子机制之一。 BKM120分子量 (2)绵马素PB诱发了caspase-3的激活和PARP的裂解。用广谱caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理HepG2细胞2h后,可明显地抑制二者的变化。这说明绵马素PB诱导的HepG2细胞凋亡是通过caspase所依赖的途径。
综上所述,绵马素PB在不影响正常细胞生长的状况下,可以有效地抑制HepG2肝癌细胞的增殖,这种增殖抑制作用与其诱导的细胞凋亡密切相关。绵马素PB通过caspase所依赖的途径诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡,其中PI3K/Akt/GSK-3β/NAG-1信号通路可能作为最主要的分子机制之一。上述研究结果将对绵马素PB进一步的研究并开发为新药提供良好的理论基础。
世界范围内，乳腺癌发病率与死亡率高，是影响女性健康的重要疾病。其中HER-2(Human epidermal growth factor receptor-2)蛋白过表达乳腺癌，传统检测易误诊、漏诊，在治疗过程中易产生副作用及引发不良预后。随着纳米科技理论的进步及纳米颗粒制备工艺的改善，因金纳米颗粒独特的理化特性，将其引入肿瘤医学领域，对乳腺癌的检测与治疗有创新意义。 目的 通过金纳米颗粒制备及曲妥珠金纳米探针合成，探讨颗粒毒性、探针暗场应用及处理乳腺癌细胞实验效果，为乳腺癌纳米医学诊断与治疗研究提供依据。 时间 方法 以柠檬酸盐还原法制备金纳米颗粒(Gold nanoparticles,GNPs)，对颗粒进行透射镜(TEM)表征及紫外吸收光谱检测，通过静置检测金纳米颗粒时间稳定性；GNPs通过静电作用吸附曲妥珠单抗(Herceptin)，进而合成曲妥珠金纳米探针(GNP@Herceptin)，表征及稳定性检测方法同GNPs；中科院上海细胞库购买人乳腺癌细胞株MCF-7、SK-BR-3，免疫组化检测细胞HER-2蛋白表达；利用扫描电镜(SEM)，检测定位于细胞膜表面GNP@Herceptin，并在暗场环境下观察细胞膜上GNP@Herceptin；设置0-400mg/mL7浓度梯度GNPs，并设置培养液空白组，细胞增殖抑制剂盒检测GNPs细胞毒性；设置0-200ng/mL7浓度梯度GNPs、Herceptin和GNP@Herceptin，并设置培养液空白组，细胞增殖抑制试剂盒检测MCF-7与SK-BR-3细胞增殖抑制效果；设置0-1.0μg/mL4浓度梯度Herceptin、GNP@Herceptin，细胞凋亡试剂盒检测SK-BR-3细胞凋亡，细胞周期试剂盒检测SK-BR-3细胞周期阻滞；运用SPSS21.0对同种细胞不同浓度颗粒毒性、抗体与探针增殖抑制、细胞凋亡及周期阻滞数据进行单因素方差分析，同一浓度两种细胞颗粒毒性数据及抗体与探针最佳处理剂量采用两组独立样本t检验，检验水平α为0.05。
结果 金纳米颗粒近似圆形，粒径大小(14.11±1.13) nm，并可与曲妥珠单抗成功吸附，溶液澄清透亮，稳定性好；GNPs与Herceptin结合率为2.25：1，结合效果好；通过SEM检测，可发现定位于细胞膜表面的GNPs@Herceptin，并且在暗场环境下，可看到SK-BR-3细胞周围的橘黄色生物探针；GNPs浓度在400μg/mL时，MCF-7细胞存活率减少至43.9%(t=39.709，P=0.001)，在100μg/mL时，SK-BR-3细胞存活率为65.1%(t=6.796，P=0.002)，均有明显细胞毒性效果，但金纳米颗粒浓度下降至50μg/mL时，SK-BR-3与MCF-7细胞生存率分别为82.8%(t=1.979，P=0.119)、99.3%(t=0.177，P=0.868)，且未显示出细胞增殖抑制效果，说明低浓度GNPs有良好的生物相容性。Herceptin处理SK-BR-3细胞后，最佳用药剂量为7.143ng/1×104细胞，GNP@Herceptin处理细胞后最佳用药量从50ng/mL降低至25ng/mL，且差异具有统计学意义(t=14.774，P
目的：研究磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002联合丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）特异性抑制剂AZD6244对耐顺铂卵巢癌细胞株（SKOV3/DDP）增殖的影响，并探讨其可能机制。
Dacomitinib订单 方法： （1）MTT法检测SKOV3/DDP细胞的耐药性。 （2）MTT法检测LY294002（5、10、20μmol/L）、AZD6244（1、2、4μmol/L）单独及联合作用对SKOV3/DDP细胞增殖的影响，Chou-Talalay联合指数法计算半数抑制浓度（Inhibitory concentration50％，IC50）及合用指数（Confidence interval，CI）。 （3）根据MTT结果确定联合用药的浓度，将实验分为对照组、LY294002组（5μmol/L）、AZD6244组(7μmol/L)及联合组(LY2940025μmol/L+AZD62447μmol/L);作用48h后，采用MTT法绘制细胞生长0d、1d、2d、3d、4d、5d的曲线。 （4）计算各组细胞倍增时间。 （5）平板克隆实验检测各组细胞集落形成能力。 （6）AnnexinⅤ-PE/7-ADD染色结合流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率，并测定细胞周期。 （7）Western blot法检测各组细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化的ERK1/2（P-ERK1/2）、AKT、磷酸化的AKT(P-AKT)、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）及激活型Caspase3蛋白的水平。 结果： （1）SKOV3/DDP细胞顺铂的IC50为2.3512μg/ml, SKOV3细胞顺铂的IC50为0.3035μg/ml，SKOV3/DDP细胞耐药指数为7.