33±0.07)%及(51.67±0.04)%。三组细胞相比,F=3.055,P=0.12,无明显统计学差异。显微镜下计数每个克隆的细胞数,未转染、转染空质粒及转染IL-24真核表达载体的SKOV3细胞,每个克隆的细胞数分别为303±15.67、295±13.54及99±11.97,三组细胞相比,F=699.868,P=0.000,有统计学意义。经SNK-q法两两分析,转染空载体组与未转染组细胞每个克隆细胞数无显著统计学差异(P=0.326),两者与IL-24转染组细胞之间每个克隆细胞数有显著性差异(P=0.000)。表明IL-24可抑制SKOV3细胞的增殖。
7、倒置显微镜下观察细胞形态学改变,可见死亡细胞明显增多。Hoechest 33258荧光染色观察IL-24转染后细胞核的变化,可见未转染组及转染空载体组细胞发出较微弱的蓝色荧光,细胞核大小基本一致,为圆形或椭圆形,被染成均匀的淡蓝色,无明显的形态学改变,极少见到凋亡细胞和凋亡小体。IL-24转染组可见较多凋亡细胞,发出较强的蓝色荧光,细胞浆密度增大、颜色变深,细胞核体积变小,形态不规则,大小不一,见呈碎块状致密浓染,形状不规则的染色质,核膜呈境界分明的块状或新月形小体,有凋亡小体形成及核裂解。 8、流式细胞仪检测IL-24转染后细胞周期变化,未转染、转染空载体及转染IL-24真核表达载体后的SKOV3细胞,G2/M期平均分别为4.29%、4.79%和12.88%。转染IL-24后的SKOV3细胞与未转染及转染空载体的细胞相比,G2/M期细胞比例明显增加,有统计学意义(F=309.805,P=0.000)。两两分析表明,未转染、空载体转染与IL-24真核表达载体转染的SKOV3细胞之间,G2/M期的细胞数有显著差异(P=0.000)。未转染与转染空质粒的SKOV3细胞相比,G2/M期细胞比例无明显变化,无统计学意义(P=0.233)。 并且 9、流式细胞仪检测IL-24转染后细胞凋亡率变化,未转染、转染空载体及转染IL-24真核表达载体后的SKOV3细胞,细胞凋亡率平均分别为3.33%,3.60%,14.51%,差异具有统计学意义(F=1205.073,P=0.000)。两两分析表明,未转染、空载体转染与IL-24转染的SKOV3细胞之间,细胞凋亡率有显著性差异(P=0.000)。未转染与空载体转染组之间,细胞凋亡率无显著性差异(P=0.318)。
10、用RT-PCR法检测SKOV3细胞转染IL-24、转染空载体与未转染组细胞中p53 mRNA表达的变化,实验组和对照组均在600~+bp左右处扩增出p53 mRNA特异性条带,在550bp左右处扩增出β-actinmRNA特异性条带,SKOV3未转染组、空载体转染组和IL-24转染组p53 mRNA相对表达量分别为0.43±0.005、0.44±0.004和0.44±0.005。实验组及对照组上皮性卵巢癌SKOV3细胞中p53 确认细节 mRNA相对表达水平无显著性差异(F=3.000,P=0.125)。用RT-PCR法检测SKOV3细胞转染IL-24、转染空载体与未转染细胞中caspase-3 mRNA表达的变化,实验组和对照组均在260bp左右处扩增出caspase-3mRNA特异性条带,在550bp左右处扩增出β-actin mRNA特异性条带,SKOV3未转染组、空载体转染组和IL-24转染组caspase-3 mRNA相对表达量分别为0.26±0.005、0.20±0.004和0.64±0.003。实验组及对照组上皮性卵巢癌SKOV3细胞中caspase-3mRNA相对表达水平有显著性差异(F=1741.000,P=0.000)。 结论: 1.利用电穿孔转染可以将IL-24基因高效导入上皮性卵巢癌SKOV3细胞株; 2.选择培养后的IL-24转染组SKOV3细胞,能稳定表达IL-24mRNA和蛋白,即建立了IL-24稳定表达的上皮性卵巢癌细胞模型; 3.IL-24基因转染后对上皮性卵巢癌SKOV3细胞株的体外增殖有抑制作用; 4.IL-24基因能导致上皮性卵巢癌SKOV3细胞株G2/M期阻滞。 5.IL-24基因表达增高对上皮性卵巢癌SKOV3细胞株凋亡有促进作用。 6.IL-24促凋亡的作用与p53无关,与caspase-3有关。 目的:本部分拟观察将pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24真核表达质粒,稳定转染至上皮性卵巢癌SKOV3细胞表达后,是否能提高肿瘤细胞对放疗的敏感性。
方法:稳定转染IL-24并筛选出阳性克隆之后,采用进口西门子直线加速器,单次照射上皮性卵巢癌SKOV3细胞。MTT比色法观察细胞增殖抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果: 1、MTT比色法测SKOV3细胞各组的吸光度值。经析因设计的方差分析,经放射治疗后,IL-24基因的导入可使人上皮性卵巢癌细胞系SKOV3的生长受到明显抑制(P=0.000)。两两分析表明,转染pcDNA3.1-myc-his(—)B-IL-24真核表达载体的SKOV3细胞,细胞增殖能力与其它两组相比,差异具有统计学意义(P=0.000)。未转染和转染pcDNA3.1-myc-his(—)B空载体的SKOV3细胞相比,差异无明显统计学意义(P=0.184)。 寻找更多 2、未转染、转染空载体及转染IL-24后的SKOV3细胞,经6Gy放射线处理24小时后,流式细胞仪检测细胞凋亡率平均分别为6.90%,8.13%,20.12%。三组SKOV3细胞凋亡率的差异具有统计学意义(F=350.499,P=0.000),各组之间两两比较发现,未转染组、空载体转染组与IL-24转染组SKOV3细胞之间,凋亡率有显著性差异(P=0.000)。而未转染组与空载体转染组之间,凋亡率无显著性差异(P=0.053)。 结论: 1.外源IL-24基因的过表达,可提高上皮性卵巢癌SKOV3细胞株对射线的辐射敏感性。 目的:本部分拟建立上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤模型,用pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24真核表达质粒对上皮性卵巢癌荷瘤裸鼠进行治疗研究,观察IL-24是否能抑制上皮性卵巢癌荷瘤裸鼠癌细胞的生长。 方法:建立人上皮性卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤模型,瘤体直接注射pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24后,观察肿瘤体积、重量和抑瘤率。 结果: 1、pcDNA3.1-myc-his(—)B-IL-24真核质粒直接瘤体注射治疗上皮性卵巢癌荷瘤Balb/c nu/nu裸鼠后,肿瘤体积增长较慢,与未转染组及空质粒转染组相比,有显著差异(P=0.000)。 2、IL-24治疗后抑瘤率为63.21%。pcDNA3.1-myc-his(—)B-IL-24真核质粒直接瘤体注射治疗上皮性卵巢癌荷瘤Balb/c nu/nu裸鼠后,肿瘤重量增长较慢,与未转染组及空质粒转染组相比有显著差异(P=0.000)。 结论: 1.IL-24可抑制上皮性卵巢癌SKOV3细胞株荷瘤裸鼠的肿瘤细胞生长。 2.