建立氯胺酮相关性大鼠模型及收集尿液、血液。取2个月龄健康、体重为180-200g的雄性Sprague Dawley(SD)大鼠20只,随机分为4组：空白对照(CON),生理盐水组(NS),低剂量组(LK)(10mg/Kg),高剂量组(HK)(50mg／kg),每组5只,饲养时间为16周。每日上午9时各实验组分别予腹腔注射0.9%生理盐水,10mg/Kg及50mg/Kg氯胺酮。生理盐水组大鼠同时注射等量体积生理盐水,空白对照组不予以任何处理。每周测量一次大鼠体重以调整注射剂量。大鼠单独饲养在自制的代谢笼中,利用自制的尿液染色试纸记录大鼠排尿频率。于第1,4,7,10,13,16周处死前在给大鼠注射药物后,收集大鼠24小时尿液。收集的尿液行尿常规检查。第16周处死时取深静脉血血清行肝、肾功能检查。 2.处死后,收集各组大鼠的膀胱和肾脏组织。膀胱用于HE染色、马松染色、免疫组化,观察膀胱粘膜层、粘膜下层及平滑肌层组织学形态,用以确定KC大鼠模型的建立。

selleck怎么样 3.大鼠肾脏洗净后,部分行HE染色,马松染色,TUNEL凋亡检测,用于分析大鼠肾脏形态学上的改变及细胞凋亡情况。液氮冻存部分用于后续的蛋白质组学研究,验证长期滥用氯胺酮可能导致肾脏损害及发生间质纤维化。 结果 1.大鼠行为学改变及体重变化 NS组大鼠在注射生理盐水后,饮水、进食、行为活动等和正常大鼠无明显区别；LK组(10mg/kg)大鼠在注射氯胺酮之后,10分钟内相比CON组和NS组出现轻微兴奋躁动和活动增加的状态,之后约20分钟恢复至正常；HK组(50mg/kg)大鼠在注射氯胺酮后,通常约1分钟即出现全身僵硬症状,疲倦嗜睡,随后10分钟开始出现共济失调,头尾不停摇摆晃动,左右跌倒,接着保持平静不动约1小时直到复原正常活动。我们观察到约12周左右开始HK组和LK组大鼠排尿的频数较NS组和CON组均有明显增多的趋势。大鼠体重变化趋势分析,从第2-6周开始,LK组的平均体重值就随着时间推移较HK组和NS组高；第6周到第16周,NS组和LK组大鼠体重总体趋势均比HK组高.(P0.05).第16周时,NS组和HK组大鼠尿比重的比较,NS组尿比重均值(1.005±0.0038)；HK组尿比重均值(1.006±0.0035)；两组比较无显著性差异(t=-0.346,P=0.738>0.05) Selleckchem Palbociclib 3.大鼠肝肾功能指标结果。

Scr、BUN、TP、ALB、G、ALT、ALP在各组之间比较并无显著性差别。只有UA在HK组和LK均较NS组降低,HK组降低更多。AST在HK和LK组较NS有所降低,但是HK和LK之间无显著差别。虽然各组Scr、BUN均数无差别,但是HK和LK组仍有7只(7/10)大鼠的Scr高于NS组的均值,两组有7只(7/10)大鼠的BUN高于NS组的均值,提示氯胺酮对大鼠肾脏滤过功能有损害作用。氯胺酮处理组几乎所有大鼠(9/10)的UA值都降低,提示经过氯胺酮长期作用的大鼠,可能发生贫血。正常ALT/AST≤1,HK组1只(1/5)大鼠出现ALT/AST≥1,提示滥用高剂量氯胺酮可导致肝炎的发生。 4.大鼠膀胱HE染色结果 在CON组和NS组中,大鼠膀胱组织在结构形态上未见明显的病理改变。实验组(HK、LK组)大鼠膀胱粘膜上皮层表现为膀胱黏膜上皮层增厚,黏膜下层出现明显水肿,可见大量炎症细胞浸润,部分上皮细胞层全层脱落。HK组的膀胱病理改变较LK组更加明显。各组间膀胱平滑肌未见明显病理学改变。 5.大鼠膀胱马松染色结果 CON、NS组大鼠膀胱组织未见明显的病理学改变。相比之下,长期注射氯胺酮的HK组及LK组大鼠膀胱黏膜下层和肌层之间均可见纤维组织含量增加和胶原沉积,染色深染,提示膀胱粘膜下层发生纤维化增加。半定量分析发现：CON组平均胶原面积比是(0.31±0.069)；NS组平均胶原面积比是(0.317±±0.073)；LK组平均胶原面积比是(0.639±0.102)；HK组平均胶原面积比是(0.737±0.066).LK组平均胶原面积比,较NS组显著增多(平均差±标准尿频率。于第1,4,7,10,13,16周处死前在给大鼠注射药物后,收集大鼠24小时尿液。收集的尿液行尿常规检查。第16周处死时取深静脉血血清行肝、肾功能检查。

2.处死后,收集各组大鼠的膀胱和肾脏组织。膀胱用于HE染色、马松染色、免疫组化,观察膀胱粘膜层、粘膜下层及平滑肌层组织学形态,用以确定KC大鼠模型的建立。 那个 3.大鼠肾脏洗净后,部分行HE染色,马松染色,TUNEL凋亡检测,用于分析大鼠肾脏形态学上的改变及细胞凋亡情况。液氮冻存部分用于后续的蛋白质组学研究,验证长期滥用氯胺酮可能导致肾脏损害及发生间质纤维化。 结果 1.大鼠行为学改变及体重变化 NS组大鼠在注射生理盐水后,饮水、进食、行为活动等和正常大鼠无明显区别；LK组(10mg/kg)大鼠在注射氯胺酮之后,10分钟内相比CON组和NS组出现轻微兴奋躁动和活动增加的状态,之后约20分钟恢复至正常；HK组(50mg/kg)大鼠在注射氯胺酮后,通常约1分钟即出现全身僵硬症状,疲倦嗜睡,随后10分钟开始出现共济失调,头尾不停摇摆晃动,左右跌倒,接着保持平静不动约1小时直到复原正常活动。我们观察到约12周左右开始HK组和LK组大鼠排尿的频数较NS组和CON组均有明显增多的趋势。大鼠体重变化趋势分析,从第2-6周开始,LK组的平均体重值就随着时间推移较HK组和NS组高；第6周到第16周,NS组和LK组大鼠体重总体趋势均比HK组高.(P0.05).第16周时,NS组和HK组大鼠尿比重的比较,NS组尿比重均值(1.005±0.0038)；HK组尿比重均值(1.006±0.0035)；两组比较无显著性差异(t=-0.346,P=0.738>0.05) 3.大鼠肝肾功能指标结果。 Scr、BUN、TP、ALB、G、ALT、ALP在各组之间比较并无显著性差别。只有UA在HK组和LK均较NS组降低,HK组降低更多。AST在HK和LK组较NS有所降低,但是HK和LK之间无显著差别。虽然各组Scr、BUN均数无差别,但是HK和LK组仍有7只(7/10)大鼠的Scr高于NS组的均值,两组有7只(7/10)大鼠的BUN高于NS组的均值,提示氯胺酮对大鼠肾脏滤过功能有损害作用。氯胺酮处理组几乎所有大鼠(9/10)的UA值都降低,提示经过氯胺酮长期作用的大鼠,可能发生贫血。正常ALT/AST≤1, HK组1只(1/5)大鼠出现ALT/AST≥1,提示滥用高剂量氯胺酮可导致肝炎的发生。 4.大鼠膀胱HE染色结果 在CON组和NS组中,大鼠膀胱组织在结构形态上未见明显的病理改变。实验组(HK、LK组)大鼠膀胱粘膜上皮层表现为膀胱黏膜上皮层增厚,黏膜下层出现明显水肿,可见大量炎症细胞浸润,部分上皮细胞层全层脱落。HK组的膀胱病理改变较LK组更加明显。各组间膀胱平滑肌未见明显病理学改变。 5.