针对EML4-ALK基因突变的新靶向药物———ALK抑制剂crizotinib,现已经进入Ⅲ期临床试验。Ⅰ期及Ⅱ期临床试验均证实,crizotinib治疗EML4-ALK阳性晚期NSCLC患者有效,能够改善肿瘤患者症状,患者的无进展生存期(progression free survival,PFS)延长,总体有效率(overall res以及ponse rate,ORR)提高。且crizotinib的毒性作用较小,与传统化疗相比,患者耐受性较好。与其他TKI一样,crizotinib也存在获得性耐药现象,其耐药机制有待进一步研究。本文就crizotinib从基础研究向治疗EML4-ALK阳性晚期NSCLC患者临床应用的转化过程作一回顾。
棘皮动物微Selleckchem LY294002管结合样蛋白4(echinoderm microtubule associated protein-like 4,EML4)与间变淋巴瘤激酶(anaplastie lymphoma kinase,ALK)融合基因EML4-ALK是非小细胞肺癌中继EG-FR突变,K-ras突变后又一特异性分子标记物,近些年来引起了PLX4032体内高度重视,有望成为NSCLC新的靶点。本文就EML4-ALK融合基因的发现和检测,生物学特性,EML4-ALK抑制剂的应用等综
分子靶向治疗是目前最具前景的研究领域,而融合基因分子靶点检测是分子靶向治疗的前提。EML4-ALK融合基因是新近发现主要表达于非小细胞肺腺癌中,可能与非小细胞肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)耐药相关,文章就其发现过程以及临床应用进行综述。

目的：验证槚如酸对前列腺癌LNCap细胞株的细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响；研究槚如酸作用前列腺癌LNCap细胞株的最佳作用时间和作用剂量。方法：MTT法检测不同剂量的槚如酸作用前列腺癌LNCap细胞不同时间后,肿瘤细胞生长和增殖的变化；流式细胞仪检测槚如酸对LNCap细胞凋亡和细胞周期的影响。结果：槚如酸抑制前列腺癌LNCap细胞株的增殖；槚如酸的最佳作用时间Erlotinib为24小时至48小时,最佳作用浓度为125umol/L。槚如酸诱导前列腺癌LNCap细胞株的凋亡增加(p<0.05)；同时对比AA组,AA+p300-siRNA组的AR的mRNA转录和蛋白表达均上升(P<0.05)。使用p53-siRNA转染LNCap细胞后,MTT检测AA组LNCap细胞的存活率为(34.85±4.41)%,细胞凋亡率为(什么22.2±0.91)%,AA+转染p53-siRNA组细胞存活率为(52.17±4.50)%,细胞凋亡率为(12.4±0.72)%。p53-siRNA转染后槚如酸对LNCap细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用均降低(P<0.05)。对比AA组,AA+p53-siRNA组的p21的mRNA转录和蛋白表达均下降(P
目的：通过观察Cripto-1、C59体内β-catenin蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿、子宫腺肌病、卵巢子宫内膜异位囊肿合并子宫腺肌病的异位、在位内膜是否存在表达差异性及相关性,探析二者在异位病灶形成过程中的作用及意义。 方法：应用免疫组化SP二步法检测Cripto-1、β-catenin蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿(巧囊组)、子宫腺肌病(腺肌病组)、卵巢子宫内膜异位囊肿合并子宫腺肌病(巧囊合并腺肌病组)异位、在位内膜的表达特点,并与正常子宫内膜(对照组)进行比较。

2. pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体稳定转染K562细胞后,RT-PCR检测Apollon mRNA表达水平；细胞免疫荧光结合激光共聚焦技术分析Apollon蛋白的表达量的变化；MTT及FCM法分别检测Apollon siRNA或联合中药TMP后K562细胞对化疗药物长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(dselleck激酶抑制剂aunorubicin, DNR)的敏感性及凋亡率的变化。结果：1.设计合成的siRNA 中 siRNA2抑制Apollon基因表达最显著,Apollon mRNA抑制率(inhibitory rate, IR)达(67.308±7.686)%, Apollon蛋白表达为(14.97±2.08)%,细胞增殖抑制率和达(73.361±2.118)%；酶切鉴定及测序显示pGPHI/GFP/Neo-Apollon真核表达载体构建成功。2. pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体能在K562细胞内稳定表达,其Apollon mRNA及蛋白的相对表达量分别为(27.622±0.057)%、(15.96±1.71)%,对细胞增还有值抑制率IR=(63.1±6.3)%,细胞凋亡率达(16.513±1.060)%,与细胞对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；稳转细胞加入中药TMP后增殖抑制率IR达(80.1±6.5)%,与RNA干扰组、TMP+RNA干扰组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1.筛选出的靶向Apollon基因siRNA2序列能有效沉默Apollon基因的表达,也能抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖。

本论文根据HDACIs的结构特点,结合计算机辅助药物设计(computer-aided drug design, CADD)方法,设计、合成了新型的HDACIs,并对抑制剂与酶的作用方式进行了研究。 首先,根据HDACIs的结构和作用机理,用计算机辅助设计与合成了若干基于L-2-氨基-7-溴庚酸与L-2-氨基-8-溴辛酸的新型抑制剂。活性检测结果显示,所有的化合物均在较低浓度下对Selleckchem BI6727HDACs和肿瘤细胞具有抑制活性,对HDAC1和HDAC2的活性要好于HDAC8。抑制剂表面识别区的N-端引入苄氧羰基可大大增强抑制剂对酶的作用,连接区为5或6个亚甲基,以及表面识别区的C-端为酰胺或酯对活性影响不大。通过分子模拟表明,在这些抑制剂与HDAC2和HDAC8的结合中,酶活性位点的Zn2+都形成六配体形式,氢键、疏水作用和芳香基团间的π-π作以及用起到了重要作用；同一个抑制剂与HDAC2形成的氢键数目要多于与HDAC8形成的氢键数目；HDAC2活性位点处的Leu276有利于酶与抑制剂的结合,而在HDAC8中与之相应的Met274则对结合是不利的。 在此基础上,应用计算机辅助药物设计方法设计与合成了一系列基于L-2-氨基-8-溴辛酸的新型HDACIs.所有化合物均显示了较好的HDACs抑制活性和抗Selleckchem LY294002肿瘤细胞增殖活性,其中两个化合物b3和b8与Trichostatin A(TSA)在同一水平。构效关系研究表明,在表面识别区的C-端引入2-氨基-4-苯噻唑基团或9-芴甲氧基团可大大增强抑制剂对酶的作用。通过分子模拟可知,引入的2-氨基-4-苯噻唑基团和9-芴甲氧基团可使抑制剂与酶之间多形成一个较强的氢键,并使结合自由能降低。 对金属结合区为巯基的新型环肽类抑制剂进行了设计,并对它们与第Ⅰ类和第Ⅱ类HDACs的作用方式进行了研究。

Endoglin是新生血管的标记物，主要表达于卵巢癌边缘的微血管，其表达水平与上皮性卵巢癌（Epithelial ovariancancer, ECO）血管生成密切相关，提示RGS5可能参与了卵巢癌早期血管生成的调控。 2.第一次阐述了RGS5蛋白在卵巢癌细胞有表达，其表达的高低与卵巢癌患者腹膜转移显著相关，高表达RGS5的无患者腹膜转移的发生率明显低于低表达RGS5的患者，预后亦优于后者。此外，RGS5在卵巢癌细胞的表达还与CD34标记的微血管密度（microvascular densities, MVD）呈负相关。 3.与正常内皮细胞多处于静止期不同，ODMECs增生活跃，胞核遗传物质丰富，高表达促血管生成因子VEGselleckchemF、TGF-β的受体VEGFR2和Endoglin，体外成管能力增强。RGS5的表达在ODMECs体外管腔样结构形成时降低，并且随细胞培养时间的延长递减，推测可能与离开肿瘤微环境有关，然而与RGS5作用密切相关的VEGF与PDGF-BB对其在体外的表达无明显的刺激作用，说明RGS5在肿瘤组织的表达可Selleck Ipatasertib能不依赖于或不仅仅依赖于VEGFR和PDGF-β信号通路的调节。 4.缺氧可诱导RGS5在ODMECs表达，通过慢病毒载体携带的RGS5特异性siRNA，实现对原代培养的ODMECs表达RGS5蛋白的高效抑制后发现在缺氧条件下RGS5可抑制ODMECs细胞增殖，使细胞周期停滞于G1期到S期的转化节点。此外RGS5在ODMECs缺氧时还可诱导细胞的凋亡，但不影响细胞的迁移能力。

于是,根据骨架跃迁原理,设计了一系列以邻苯甲酰磺酰亚胺作为母核的直链型异羟肟酸HDACi,并进行了初步的活性筛选。期间总共还合成了30个新化合物,其中16个目标化合物,14个中间体,均通过核磁共振氢谱、核磁共振碳谱、电喷雾质谱或高分辨质谱等方法进行了结构确证。
本论文主要围绕具有潜在抗肿瘤活性的三环骨架羟肟酸类HDACi的设计与合成及其药理活性评价展开,同时在Beckmann重Selleck BAY 73-4506排反应催化体系的建立及应用方面进行了方法学研究。 1.在基于四氢丫咔啉骨架的羟肟酸类化合物的设计合成及药理活性评价方面： 根据计算机辅助药物设计及已经报道的组蛋白去乙酰化酶抑制剂的药效团模型,经Fischer反应制备原料8-溴-四氢Y咔啉后,将N2位置的R1取代基变换为不同的苄基,酰基,磺酰基及饱和或不饱和烷基等,改变N5位置上取代基的碳链长度及其上带有已经的取代基变换为二甲胺、二乙胺、哌啶、吡咯、吗啡啉等,共经十步反应制备得到了四氢γ咔啉为骨架的35个的肉桂基羟肟酸类HDACi用于活性测试。 药理测试结果表明,四氢γ咔啉骨架化合物均表现出良好的总酶HDACs及HDAC1亚型的酶抑制活性,并且多数化合物对于多种肿瘤细胞株的抑制作用明显优于阳性对照药物SAHA或与之相当。药理机制研究表明,该系列化合物可以诱导获悉更多乙酰化组蛋白H3和抑癌基因p21WAF/CIPI的表达,引起周期阻滞和细胞凋亡。在动物模型试验中,化合物Ⅱ-10a对接种Lewis(?)市癌荷瘤小鼠模型具有良好的治疗效果,并且没有观察到明显的体重变化和毒性反应。采用计算机分子对接对化合物与靶标模型的结合模式进行预测,结果显示N5取代基上的碱性N原子与Asp99存在静电相互作用,羟肟酸基团与活性口袋的Zn2+产生螯合作用,四氢γ骨架中的苯环与Phe205与Phe150存在π-π相互作用。

MCF-7RAF-1原发瘤原代培养产生的MCF-7RAF-1细胞中，AURKA蛋白出现了显著的高表达,同时细胞周期检查点蛋白Cyclins如D1、E和A并未显示高表达,但Cyclin B、CDC25A和Claspin则显示了高表达。基因芯片分析显示了MCF-7RAF-1中MAPK信号通路和TGFB/smad信号通路中的相关因子的表达出现时间异常。 3 MCF-7RAF-1 1GX的CD24阴性细胞所占百分比为34%,显著高于其来源的母系细胞系。CD24阴性细胞群中心体表型出现了扩增,AURKA出现了过表达,发展了EMT特征,Wnt6、Smad家族、THBS1、PCDH8表达出现了异常,ERa表达下降而HER-2表达增加。 4 AURKA抑制剂能够www.selleck.cn/products/Adriamycin.html使细胞周期阻滞于G2／M期,显著降低AURKA蛋白的表达。重要的是,AURKA抑制剂MLN8237只在MCF-7RAF-1 1GX细胞系诱导了细胞凋亡标记物cleaved PARP的表达。同时CD24阳性细胞百分率增加,由对照组的60%增加到85%(处理48小时)和94%(处理72小时)。 5给予CD24阴性细而且胞群AURKA抑制剂也能够诱导细胞凋亡,但DR不能诱导其发生凋亡,此外AURKA还可使CD24阴性细胞群上皮标记物E-cadherin、B-catenin重新获得表达,而间质标记物vimentin表达显著下降,smad家族蛋白表达下调,THBS1和PCDH8表达恢复。shRNA AURKA处理的裸鼠显示了明显的肿瘤体积缩小,AURKA蛋白表达下降,中心体扩增的表型受到抑制,未发生远处转移。