2 pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体稳定转染K562细胞后,RT-PCR检测Apollon mRNA表达水平;细胞

2. pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体稳定转染K562细胞后,RT-PCR检测Apollon mRNA表达水平;细胞免疫荧光结合激光共聚焦技术分析Apollon蛋白的表达量的变化;MTT及FCM法分别检测Apollon siRNA或联合中药TMP后K562细胞对化疗药物长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(dselleck激酶抑制剂aunorubicin, DNR)的敏感性及凋亡率的变化。结果:1.设计合成的siRNA 中 siRNA2抑制Apollon基因表达最显著,Apollon mRNA抑制率(inhibitory rate, IR)达(67.308±7.686)%, Apollon蛋白表达为(14.97±2.08)%,细胞增殖抑制率达(73.361±2.118)%;酶切鉴定及测序显示pGPHI/GFP/Neo-Apollon真核表达载体构建成功。2. pGPHI-GFP-Neo-Apollon载体能在K562细胞内稳定表达,其Apollon mRNA及蛋白的相对表达量分别为(27.622±0.057)%、(15.96±1.71)%,对细胞增还有值抑制率IR=(63.1±6.3)%,细胞凋亡率达(16.513±1.060)%,与细胞对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);稳转细胞加入中药TMP后增殖抑制率IR达(80.1±6.5)%,与RNA干扰组、TMP+RNA干扰组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.筛选出的靶向Apollon基因siRNA2序列能有效沉默Apollon基因的表达,也能抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖。

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