F组P2X4R在致炎后第4天表达增多,于第7天时达高峰,第10天和第14天逐渐下降。2.与NS组相比,M组P2X4阳性细胞表达增多。3.M组和FM组在鞘内第6次予以吗啡后形成吗啡耐受,FM组比M组更易形成吗啡耐受。 结论：P2X4R可能参与大鼠急性吗啡耐受和福尔马林炎性痛的形成。
【研究目的】高分子量激肽原（high

molecular weight kininogen, HK）是血浆激肽释放酶-激肽系统（kallikrein-kinin system, KKS）的主要成分之一，当KKS活化时，HK被降解为活化型的高分子量激肽原（HKa）。众多资料表明，KKS活化参与多种生理与病理学过程，因此认识活化产物HKa的血管生物学功能具有十分重要的意义。内皮祖细胞（EPC）是成熟内皮细胞（EC）的前身，在促进内皮再生和新生血管中发挥重要作用。虽然有研究表明，HKa抑制EC功能，但是HKa是否调控EPC功能不清楚。在这项研究中，我们检测了HKa是否诱导EPCs的衰老，并对其作用的分子机制进行了探索。 【研究方法】（1）我们从人外周血分离EPC，并建立可体外培养的细胞株。（2）为判定HKa是否影响EPC的功能，50nM HKa处理EPCs，检测其对EPC克隆形成及增殖能力的影响。（3）为检测HKa是否加速EPCs衰老，30-100nM HKa处理EPCs，检测酸性β-半乳糖苷酶活性和端粒酶活性情况。（4）为研究HKa加速EPCs衰老的机制，我们分别使用10、30、50、100nM Ion Channel Ligand Library nmr HKa处理EPCs，检测胞内ROS产生、JNK在Thr183/Tyr185位点和转录因子FOXO4在Thr451位点的磷酸化及p38激酶的磷酸化、锰超氧化物歧化酶和p16的表达情况。（5）为确定HKa的功能域，我们构建了人源HK重链（HC,19-380aa）和轻链(LC,390-644aa)重组蛋白，分析HKa作用的结构域。

【研究结果】（1）HKa抑制EPCs克隆形成及增殖能力。（2）HKa处理后的EPC变得大且扁平并出现空泡。使用酸性β-半乳糖苷酶染色法检测，显示HKa导致衰老细胞的百分比增加了2-3倍（P
神经干细胞（neural stem cells, NSCs）通过不断分裂增殖以维持自身稳定，并可分化成神经系统中所有种类的神经细胞，此外还具有高效迁移特性。在胚胎期的神经系统发育过程中，NSCs自脑室侧壁（lateral ventricle, LV）不断迁移至特定区域形成具有特定功能组织，进而构建出复杂的中枢神经系统（central 查找更多 nerve system,CNS），而NSCs的迁移缺陷则会导致许多神经退行性疾病；存在于成年大脑侧脑室外侧壁（subventricular zone, SVZ）和海马齿状回（dentate gyrus, DG）区域中的NSCs可定向迁移至分子颗粒层和嗅球（olfactory bulb, OB）等神经发生部位，参与神经组织的形成；最近有研究报道，NSCs还可朝向病灶位点做趋化性迁移，NSCs的这一特性给治疗神经损伤性疾病带来希望。因此，针对NSCs定向迁移机制的研究十分有必要。 有研究报道，大脑损伤区域以及病灶位点分泌多种细胞生长因子、趋化因子以及炎症因子。基质细胞衍生因子（stromal cell-derived factor, SDF-1α）是研究最为广泛的趋化因子之一，它通过与其专一性受体CXCR4结合，激活下游一系列信号通路。其中，PI3K/Akt和MAPKs信号通路参与调节SDF-1α诱导的NSCs的定向迁移。NSCs的迁移受到多种因素的综合调节，除了细胞外因子对其有促进或抑制作用，在特定环境中，还受到细胞自身状态的影响。有研究发现，具有初步分化特征的神经祖细胞（neural progenitor

cells, NPCs）展现出趋化性迁移能力，如：DCX或PSA-NCAM阳性的神经元前体细胞和表达A2B5的少突胶质细胞前体细胞，而未分化的NSCs（高表达干细胞标记物nestin）迁移能力相对低下，大部分停留在初始点。我们猜测处于特定分化阶段的NSCs具有更强趋化性迁移能力。为了验证这一假设，我们选用了来源于小鼠小脑皮层的神经干细胞系C17.2，对其进行分化诱导得到不同分化状态的NSCs并进行表型鉴定；利用Boyden chamber和Dunn chamber趋化性迁移装置检测不同分化状态的NSCs对SDF-1α的趋化性应答差异；通过探测肌动蛋白微丝F-actin的组装与聚合，对不同分化状态的NSCs中细胞骨架的重组频率和微丝的排列分布进行比较；为了进一步探索NSCs迁移与细胞分化状态之间的关系，我们随后在分子水平上研究与迁移分化相关联的内在机制。运用Western 也许 blot技术对细胞内涉及迁移的信号通路如PI3K/Akt和MAPKs蛋白家族信号通路（ERK1/2、SAPK/JNK、p38MAPK信号通路）的激活水平进行检测，分析了在不同分化状态NSCs中这些信号通路对SDF-1α刺激的应答差异；最后，利用特异性抑制剂将上述信号通路分别阻断，通过趋化性迁移实验检测了不同分化状态NSCs的迁移变化。综合上述实验，我们主要得到了以下结果： 1. NSCs向SDF-1α的趋化性迁移能力受分化状态的影响：在Boyden chamber趋化迁移实验中，不同分化状态的NSCs在5ng/ml SDF-1α的诱导下，迁移至下室的细胞数目不同，分化0.5天和1天的NSCs对SDF-1α应答能力最强；同时，分化0天、0.5天和1天的NSCs出现最大迁移数目的SDF-1α浓度为5ng/ml，而分化3天NSCs对应的最佳迁移浓度为50ng/ml，说明不同分化状态的NSCs对SDF-1α敏感程度不同。 2.特定分化阶段的NSCs拥有较强细胞趋化性迁移能力。细胞的迁移速度和迁移效率是构成迁移的基础要素，两者相互独立，受到不同信号通路的调控。在NSCs的不同分化状态下，NSCs具有不同的运动活性。分化0.5天和1天的NSCs随机迁移速度比其他分化状态的NSCs快。同时它们对SDF-1α的响应能力也因分化状态的不同而发生改变；在25ng/ml SDF-1α浓度梯度中，分化1天的NSCs迁移方向性效率最高，并且具有最大迁移速度。 3.

006);6)p-AKt及p-mTOR在维吾尔族GCB型DLBCL与non-GCB型DLBCL中的表达差异具有统计学意义(P0.05);7) LY294002分子重量 p-Akt的表达仅与维吾尔族DLBCL患者的年龄相关(P0.05), p-mTOR则与维吾尔族DLBCL患者的临床特征无显著相关(P>0.05);8)p-AKt的表达与Bcl-2表达显著相关(P0.05);

p-AKt及p-mTOR的表达与survivin表达显著相关(P0.05);9) p-AKt及p-mTOR的表达与MRP1mRNA的扩增显著相关(P0.05);10) p-mTOR表达阴性组与阳性组的3年OS率分别为72%、33.8%,其差异具有统计学意义(P=0.01),而p-PI3K及p-AKt的表达与维吾尔族DLBCL患者的生存无显著相关(P>0.05)。结论：1)新疆维吾尔族DLBCL患者可能大多属于non-GCB型DLBCL (Choi分类法),新疆维吾尔族non-GCB组DLBCL的预后可能较GCB组DLBCL患者预后差；临床分期、IPI评分及Choi免疫学分型可能是新疆地区维吾尔族DLBCL患者的独立预后因素；2)新疆维吾尔族DLBCL患者的不同免疫学亚型可能具有不同的凋亡及耐药特征。Bcl-2、survivin及MRP1结合免疫学分型可以考虑作为新疆维吾尔族DLBCL患者的预后参考指标；3)PI3K/Akt/mTOR信号传导通路可能参与了新疆维吾尔族DLBCL的凋亡及耐药调控；4)PI3K/Akt/mTOR信号传导通路可能参与了新疆维吾尔族DLBCL不同免疫学亚型的发病。
糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN）是糖尿病最重要的微血管并发症之一。据发达国家统计资料表明，DN已跃升为终末期肾病的首位病因。近年来我国糖尿病患者人数日益增多，DN已成为我国导致慢性肾功能衰竭的重要原因之一。目前认为DN与糖代谢紊乱、血流动力学异常、氧化应激、糖基化终末产物堆积、细胞因子异常表达等多种因素有关。其中炎症因子与氧化应激、免疫反应相互作用是导致糖尿病肾损害，造成系膜外基质积聚的重要原因。白藜芦醇具有抗炎、抗氧化、抗癌、心脏保护等作用，作用机理涉及包括环氧酶、脂氧酶、蛋白激酶B(protein kinase B，PKB/Akt)、丝裂原活化蛋白激酶家族、去乙酰化酶等多个信号传导通路。最新的研究发现白藜芦醇还具有降低血糖，改善胰岛素抵抗，调节异常脂代谢，减少炎症因子分泌和表达等作用。Akt能够通过对葡萄糖转运、糖原合成、糖酵解和糖异生的调节及相关基因的突变、沉默、敲除影响葡萄糖的代谢及糖尿病的发生和发展,在糖尿病血管并发症产生、发展的病理生理过程中也起到关键作用。核因子κB

并且 (nuclear factor-κB， NF-κB)是参与氧化应激、炎性反应的关键因子之一,与血管内皮细胞损伤、组织细胞凋亡等糖尿病血管并发症的多个病理生理过程相关。多项研究提示白藜芦醇可能成为治疗糖尿病及其并发症的新型药物，而这些作用的发挥可能与该药可以对细胞内多个信号转导通路产生影响有关，其中Akt、NF-κB可能发挥了重要作用。本研究旨在探讨白藜芦醇对于糖尿病所致的肾脏炎症与系膜细胞增殖的保护作用及相关机制。 在体外实验当中，我们应用高糖模拟糖尿病患者的体内环境，应用Western blot、ELISA以及BRDU、CCK8试剂盒检测炎症因子、细胞通路蛋白及细胞增殖情况。通过观察不同浓度、不同处理时间点白藜芦醇对高糖环境下原代大鼠系膜细胞对人纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogenactivator inhibitor-1，PAI-1）表达和Akt活性的影响确定白藜芦醇的有效作用浓度和有效作用时间。应用白藜芦醇及两种Akt活性抑制剂，作用于Akt上游磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）的LY294002和直接作用于Akt的MK2206，处理高糖环境下原代大鼠系膜细胞。结果显示，与正常对照组相比，高糖处理组中NF-κB、PAI-1表达明显增加(P<0.05)；与高糖处理组相比，白藜芦醇和Akt活性抑制剂处理组NF-κB、PAI-1表达明显下降(P<0.05)，白藜芦醇和Akt活性抑制剂处理组细胞增殖较高糖处理组细胞增殖水平下降(P<0.05)。与正常对照组相比，高糖处理组FN表达明显增加(P<0.05)，白藜芦醇和Akt活性抑制剂处理组FN表达水平较高糖处理组明显下降(P0.05)。与正常对照组小鼠相比，糖尿病组与白藜芦醇治疗组小鼠的尿白蛋白与尿肌酐比值（albumin/creatinine

AUY-922化学结构 ratio, ACR）显著升高(P<0.05)；与糖尿病组相比，白藜芦醇治疗组ACR显著降低(P<0.05)。与糖尿病组相比，上述指标在白藜芦醇治疗组明显下降(P<0.05)。免疫组化结果显示，糖尿病组小鼠肾脏每单位面积当中PCNA阳性细胞明显多于正常对照组(P<0.05)，而经过白藜芦醇治疗则明显减少了小鼠肾脏每单位面积当中的PCNA阳性细胞数目(P
背景及目的：骨肉瘤(osteosarcoma, OS)是骨骼系统最常见的恶性肿瘤，常发生于儿童和青少年。结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)最初在原发性和转移性的结肠癌样本中鉴定，并被证实为转移形成和无转移生存率的独立预后因子。许多研究表明其作用机制可能是与很多肿瘤相关的信号途径交汇作用共同调控肿瘤的增殖、分化、凋亡和转移。本研究旨在探讨骨肉瘤中MACC1表达、调控、分子机制及其临床意义。 方法：(1)采用免疫组织化学检测骨肉瘤组织和正常骨组织中MACC1蛋白的表达；采用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR技术分别检测不同临床阶段、不同转移状态以及新鲜的骨肉瘤组织中MACC1mRNA的相对表达水平，并应用Kaplan–Meier存活曲线分析MACC1与骨肉瘤病人预后的关系。(2)采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测人骨肉瘤细胞系(MG-63、HOS、SaOS-2和U2OS)以及人成骨细胞hFOB1.

6±0.4×106。各种病毒载体对视网膜细胞的亲嗜性不尽相同,但都能有效转导RPE细胞。在活体视网膜细胞中,Ad5-EGFP、Ad5/F35-EGFP和LV-EGFP介导的GFP表达与其主要受体CAR、CD46和CD4的在视网膜内的分布不完全一致,仅rAAV2感染细胞的类型与HSPG阳性细胞分布基本一致。 【结论】5种病毒载体对视网膜细胞的转导效率、基因表达和亲嗜性各有特点,在实际应用中,应根据疾病的性质、受累细胞的类型和病程特点等,有针对性的选择合适的载体。 【目的】研究提高rAAV2对视网膜细胞的转导效率及基因表达水平的新方法,并初步探讨其可能的机理,改善眼底病基因治疗的效果。【方法】采用低剂量腺病毒或不同浓度的化疗药物与携带报告基因EGFP或LUC的rAAV2联合感染人hRPE细胞株、原代培养的成人RPE、IPE细胞以及原代培养的SD大鼠视网膜神经细胞。通过荧光显微镜、Western

selleck产品 blot、流式细胞仪等方法观察GFP表达,荧光定量PCR和RT-PCR检测GFP的DNA拷贝数和mRNA表达丰度,以及AAV2的受体HSPG、FGFR-1、ανintegrin mRNA等的表达水平是否发生变化。rAAV2-LUC或rAAV2-GFP单独或联合腺病毒或化疗药物注射到Balb/c小鼠或SD大鼠视网膜下,小动物活体成像或荧光体视镜观察LUC及GFP表达、分布及持续时间。用TUNEL方法检测视网膜原位凋亡。rAAV2- CNTF单独或联合腺病毒或化疗药物注射到遗传性视网膜变性的RCS大鼠视网膜下,HE染色观察并计数RCS大鼠视网膜外核层中细胞的层数和数量。【结果】荧光显微镜、Western blot、流式细胞仪等检测结果均表明,低剂量腺病毒和化疗药物可以在体外提高rAAV2对RPE及视网膜神经细胞的转导效率和外源基因表达水平。其中低剂量腺病毒可使外源基因的蛋白表达水平提高1-5倍,mRNA表达水平提高3-5倍;化疗药物可使外源基因的蛋白表达水平提高10-20倍,mRNA表达水平提高9-27倍。但两者均不改变GFP的DNA拷贝数。化疗药物或腺病毒与rAAV2联合感染RPE细胞时,可使AAV2相关的细胞表面受体的mRNA表达水平轻微上调。体内实验表明rAAV2-CMV-GFP联合低剂量腺病毒或化疗药物注射到SD大鼠视网膜下,可以加快并提高GFP在视网膜内的表达。单纯注射rAAV2-CNTF、或联合1×104复制缺陷型腺病毒或联合0.1μg/ml阿霉素注射后8周计数RCS大鼠外核层残存的光感受器细胞层数(每微米)分别为X=3.96±0.16、为X=5.25±0.21和X=8.05±0.28,联合应用组与单独使用组比较p值均小于0.05。应用低剂量腺病毒时视网膜组织未见明显的免疫反应,应用化疗药物时视网膜细胞未见凋亡增加。【结论】低剂量腺病毒或化疗药物可以有效提高rAAV2对视网膜细胞的转导效率和基因表达水平,并改善基因治疗效果。腺病毒或化疗要药物可能是在转录水平上提高rAAV2介导的基因的表达水平的。此外,这种方法也是安全的。

【目的】研究化疗药物对2型腺相关病毒载体和复制缺陷型腺病毒载体对肿瘤细胞的外源基因表达的影响,并初步探讨可能的作用机理。为进一步研究化疗药物与基因治疗的相互作用和关系,以及提高肿瘤基因治疗的效果提供实验证据。 GSK1120212 价格 【方法】采用rAAV2-GFP或Ad5-GFP单独或联合不同浓度的化疗药物感染NCI-H446、NCI-H460、A549、SMMC-7721、SGC7901、SK-BR-3、BTT、KB和KB/VCR等肿瘤细胞。采用荧光显微镜、Western blot、流式细胞仪检测GFP表达,荧光定量PCR和RT-PCR检测GFP的DNA拷贝数和mRNA表达的丰度,以及病毒受体HSPG、FGFR-1、ανintegrin mRNA表达。Ad-GMCSF单独或联合化疗药物感染NCI-H460、A549、SMMC-7721、SGC7901、SK-OV-3和BTT后,ELISA方法检测培养液中GMCSF含量。小动物活体成像观察Ad5-RFP单独或联合化疗药物感染T739小鼠体内生长的肿瘤后RFP荧光。【结果】荧光显微镜、Western blot、流式细胞仪等检测结果均表明,化疗药物可以提高rAAV2-GFP和Ad5-GFP在多种肿瘤细胞中的表达水平。可使Ad5-CMV-GFP介导的外源基因的蛋白表达水平提高10-20倍,mRNA表达水平提高8-10倍;可使rAAV2-GFP介导的外源基因的蛋白表达水平提高1-5倍,mRNA表达水平提高15-25倍。但GFP的DNA拷贝数没有明显改变。化疗药物联合rAAV2感染肿瘤细胞后细胞表面受体的mRNA表达水平有轻微上调。Ad-GMCSF联合化疗药物感染肿瘤细胞后可以提高GMCSF含量1-4倍。小动物活体成像结果表明化疗药物可以提高Ad5-RFP在活体肿瘤内的基因表达水平。【结论】化疗药物可显著提高2型腺相关病毒载体和复制缺陷型腺病毒载体对多种肿瘤细胞的转导效率和外源基因表达水平,使外源基因快速、高效的在靶细胞内表达。化疗药物可能是在转录水平上提高rAAV2和Ad5介导的基因的表达的。
目的在建立二亚硝基哌嗪诱导气虚体质状态大鼠鼻咽黏膜上皮细胞癌变模型基础上,应用益气解毒方干预模型大鼠,研究“气虚染毒”病机与鼻咽上皮细胞癌变启动和发展过程中细胞凋亡活性异常改变的相关性及其信号传导机理,确定不同凋亡信号传导通路中的关键基因；探讨益气解毒方诱导鼻咽上皮癌变细胞凋亡信号传导的主要通路及其主要环节相关责任基因的表达调控和干预靶点,验证对应性治疗法则“益气解毒”对“气虚染毒”病机所诱发鼻咽上皮细胞癌变病程的阻逆效应。

通常 方法研究工作分两步进行。 1.二亚硝基哌嗪诱发力竭游泳大鼠鼻咽上皮细胞癌变(“气虚染毒”)的细胞凋亡信号传导通路研究健康雄性SD大鼠56只,随机分为模型组Ⅰ24只,模型组Ⅱ24只和空白对照组8只。模型组Ⅰ腋部皮下注射二亚硝基哌嗪(DNP)和氟波酯(TPA),模型组Ⅱ于进行力竭游泳的同时同组Ⅰ注射DNP和TPA,空白组同法注射用生理盐水稀释10倍的二甲基亚砜(DMSO),共注射28次。实验周期最长达到400天。定期分批处死大鼠,取鼻咽组织进行鼻咽癌变诱发过程中各阶段的病理组织学检查,以TUNEL法检测各阶段组织标本细胞凋亡活性,应用免疫组织化学SABC法检测各组织标本PCNA指数、细胞凋亡信号传到通路线粒体途径(Bcl-2、Bax、Cyt-C和Caspase-3)及NF-κBp65信号传导途径(NF-κBp65和IκB)的主要相关蛋白活性表达,并应用RT-PCR技术检测Bcl-2和Bax mRNA的表达,以验证相关指标免疫组化检测结果。 2.

5g/kg·d给治疗组灌胃30天，观察各组大鼠一般情况，称体重；用放射免疫法检测各组大鼠性激素水平；用精子自动检测仪检测精子的密度及活率；用免疫组织化学法检测各组大鼠睾丸中TGF-β1/CYP19的表达。 研究结果：模型组大鼠体重与对照组相比明显减轻（P﹤0.05），与正常对照组相比，模型组T、E2显著降低(P0.05)；精子密度显著降低（P﹤0.05），精子活率显著减弱（P﹤0.05）；免疫组化结果显示，TGF-β1和CYP19均表达于睾丸长形精子细胞，模型组大鼠睾丸TGF-β1的表达显著高于对照组，而金匮肾气丸治疗后，其表达略有降低，但金匮肾气丸治疗组TGF-β1的表达仍高于正常对照组，模型组大鼠CYP19的表达明显低于正常对照组，而金匮肾气丸治疗组的表达略高于模型组而低于正常对照组。

研究结论：金匮肾气丸能够显著增加肾阳虚大鼠的体重、血清性激素水平及精子的密度与活率，降低肾阳虚大鼠睾丸中TGF-β1的表达，同时能增加CYP19基因的表达。 第二部分：阻滞TGFβRⅠ后肾阳虚大鼠精子生成及 TGF-β1/CYP19的表达 研究目的：观察显微注射后大鼠性激素水平、精子密度及活率、TGF-β1/CYP19的表达等。 研究方法：将40只成年雄性SD大鼠随机分为4组：正常组、模型组、正常+阻滞组、模型+阻滞组，每组10只。20只成年雄性SD大鼠进行显微注射TGFβRⅠ阻滞剂，阻滞TGF-β1表达；检测大鼠的性激素水平；用精子自动检测仪检测精子的密度及活率；用免疫组织化学法观察各组大鼠睾丸中TGF-β1/CYP19的表达。研究结果：进行显微注射后，模型组、正常+阻滞组、模型+阻滞组与正常组比较，血清T及E2水平升高，精子密度及活率升高，均具有统计学意义(P0.05)；免疫组织化学染色结果显示，TGF-β1/和CYP19阳性表达位于长形精子细胞，两组大鼠TGF-β1/和CYP19表达均无显著差异，但较正常组大鼠相比，TGF-β1表达仍较高，而CYP19表达仍较低。

有 研究结论：金匮肾气丸能显著改善模型大鼠的肾阳虚症状，增加精子生成，其机制可能是通过抑制了TGFβRⅠ的表达，进而影响了精子生成，为进一步探讨金匮肾气丸治疗雄性生殖障碍的机制提供了可靠的实验依据。
研究目的 骨质疏松症是一种以骨量低下、骨微结构破坏,导致骨脆性增加、易发生骨折为特征的系统性、全身性骨病。在老年人群及绝经后妇女中骨质疏松发病率很高,严重影响了生活质量。据统计,60岁以上老年人中,患此症的比例达60%-80%,骨质疏松症已成为一个全球性的健康问题,该病的预防和治疗已经成为我国公共卫生事业面临的严峻问题。目前,用于治疗骨质疏松的药物可分为1、抗骨吸收的药物,如降钙素、维生素D、雌激素、双膦酸盐等。2、增加骨形成的药物,如氟化物、甲状旁腺激素等。3、具有促进骨形成和抑制骨吸收双重作用的药物,雷奈酸锶(strontium 一般 ranelate)。由于雷奈酸锶在抑制骨吸收的同时促进骨的形成,因此,比起传统的治疗骨质疏松症药物,雷奈酸锶在影响骨代谢方面具有双重作用,锶盐代表了在骨质疏松症治疗史上一个新的发展方向。目前对其在抗骨质疏松症方面的研究已成为热点。 骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)是一种多潜能成体干细胞,具有向成骨细胞分化的能力。在BMSCs向成骨细胞分化中,受到多种信号通路调控,其中TGF-p(研究转化生长因子β1、transforming growth factor β1)、 BMPs(骨形态发生蛋白,bone morphogenetic BLU9931订购 proteins)、Wnt、MAPK(丝裂原活化蛋白激酶,mitogen-activated protein kinase)和Hedgehog(刺猬蛋白信号通路)信号通路发挥了重要作用。TGF-β在骨形成和骨吸收中的平衡方面起重要作用,可促进骨髓间充质干细胞向成骨分化,抑制其向破骨细胞分化,它在骨重建过程中的作用逐渐成为人们研究的热点。Smads蛋白直接参与TGF-β超家族成员的信号转导过程,它作为TGF-β下游的信号蛋白分子,将TGF-β信号从细胞外转导到细胞核内,是TGF-β信号转导通路的始动因子。Runx2又称为核心结合因子al

(Cbfα1),是一种多功能转录因子蛋白,在成骨细胞的分化和骨形成方面起重要的作用,TGF-β、BMP-2等多种因子可作为Runx2的上游调节因子调节Runx2的活性。 我们前期研究已经证实Sr可通过上调TGF-β1和Runx2表达来促进BMSCs向成骨细胞分化。因此,本实验在前期研究基础上进一步阐明Sr是否通过TGF-β1/Smad信号通路诱导BMSCs向成骨分化。 1.材料与研究方法 1.1、BMSCs的获取取四周龄SD大鼠颈推脱臼处死,75%乙醇浸泡5-10min,无菌操作下取双侧股骨和胫骨,剪去干垢端,用无菌注射器吸取含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素G和100mg/ml链霉素的DMEM/F12培养液反复冲洗骨髓腔得到骨髓细胞悬液,并移至15ml离心管；1000r/min,5min离心,制成单细胞悬液,以1-3x105cells/cm2接种于25cm2培养瓶中,置于37℃、5%CO2培养箱内进行培养；24h后半量换液,以后每2-3d换液一次；倒置显微镜下观察细胞,至细胞融合至80%时进行传代,此后每隔3-4d传代一次。 1.2、BMSCs的成骨诱导选取第3-5代BMSCs,将细胞种植于培养皿或培养板中,待细胞贴壁后加入成骨诱导液(含10%胎牛血清、100U/ml青霉素及100μg/ml链霉素、10-8mol/L地塞米松、10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μg/ml抗坏血酸的DMEM/F12培养基)培养。 1.3、Western blotting法检测p-Smad2、Smad2和Runx2蛋白的表达水平选取第3代细胞,接种于60mm培养皿中,收集细胞时,先用预冷的PBS洗2遍,加入细胞裂解液,4℃裂解20-30min,在冰上用预冷的细胞刮刀将细胞刮下移至1.

0统计软件分析数据。2、在细胞水平,采用血清饥饿合并释放同步化处理卵巢癌细胞,流式细胞仪检测细胞周期,Western Sorafenib分子量 blot及核浆分离技术检测Cyclin H及相关分子的表达。构建Cyclin H过表达、核定位缺失及干扰表达载体,并稳定转染细胞株,MTT法、Western blot、核浆分离、Transwell及免疫共沉淀等实验分析Cyclin H参与卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响及其机制。3、在体内研究水平,采用裸鼠成瘤实验研究Cyclin H对卵巢肿瘤生长的影响。 结果1.免疫组化结果显示：在不同组织分级的卵巢癌中,Cyclin H在卵巢癌中的表达水平随肿瘤恶性程度增高而增高,有显著差异(P2+)的患者(P=0.003)。 2.构建Cyclin H过表达、核定位缺失及干扰表达载体,筛选稳定转染细胞株,并鉴定。MTT法检测正常的及以上稳定转染的卵巢癌H08910细胞株的增殖情况,过表达Cyclin H能促进H08910细胞的增殖(P0.05)。在血清饥饿-释放的H08910细胞增殖模型中,Cyclin H、CDK7及MAT1的表达上调,同时CDK2的磷酸化水平也上调。核浆分离显示在H08910细胞增殖中,胞核中的Cyclin

H、CDK7及MAT1表达增加,而胞质中无明显改变。免疫共沉淀显示在H08910细胞的增殖中,Cyclin H与CDK7及MAT1形成复合物的能力上调。Western Blot检测过表达Cyclin H的H08910细胞中的P-CDK2的表达上调,抑制Cyclin H的表达能抑制P-CDK2的水平。 3.Transwell实验发现,过表达Cyclin H的H08910细胞的侵袭能力增加(P
目的1、通过44种细胞常见信号通路蛋白靶向抑制剂作用小鼠MC3T3-E1细胞,从中筛选出对细胞的增值有明显抑制作用的抑制剂。 2、选取有效抑制剂作用于小鼠MC3T3-E1细胞,观察抑制剂对细胞周期的影响以及对细胞周期与细胞凋亡相关蛋白表达的影响。探讨影响成骨细胞增殖的相关信号通路。 方法1、应用44种细胞信号蛋白抑制剂,分别以4种不同浓度(0.01uM/L、0.1uM/L、1uM/L、10uM/L)作用于小鼠MC3T3-E1细胞,应用MTS法检测各组细胞存活率,筛选出对小鼠MC3T3-E1细胞有明显抑制且呈剂量依赖性的抑制剂。 2、选取其中S1021(Dasatinib)(靶点为SRC/ABL)、S1111(XL880(GSK1363089))(靶点为MET/VEGFR)两种抑制剂,分别以0.5uM/L作用于小鼠MC3T3-E1细胞,运用FACS法检测各周期(Sub-G1,G1,

S, G2/M)细胞百分比,分析抑制剂对成骨细胞增殖周期的影响。 3、运用western blot检测抑制剂作用后MC3T3-E1细胞CCND1、P53、AKT、 P-AKT及BAX的表达。 结果1、通过MTS法共筛选出7种抑制剂,可以显著抑制小鼠MC3T3-E1细胞的增殖,且抑制效果呈剂量依赖关系。七种抑制剂为：S2703(GSK1838705A)、 A-1210477制造商 S2743(PF-04691502)、S1021(Dasatinib)、S1064(Masitinib)、S1065(GDC-0941)、 S1111(XL880)、S1120(Everolimus)。 2、以0.5uM/L的抑制剂S1021(Dasatinib)、S1111(XL880)分别作用于小鼠MC3T3-E1细胞。与对照组比较,S1021组Sub-G1细胞比例显著增高(P=0.00)；S1111组Sub-G1期细胞比例显著升高(P=0.01),且两组药物间无显著差异(P=0.26)。

3、与对照组比较,S1021可以抑制CCND1的表达,且可降低P-AKT的水平,对于P53及BAX的表达无明显影响。S1111可以抑制CCND1的表达,而对P-AKT、P53及BAX表达无明显影响。 结论：抑制SRC/ABL可以通过抑制AKT的磷酸化并下调CCND1抑制成骨细胞MC3T3-E1的增殖,抑制VEGFR/MET可以通过下调CCND1抑制成骨细胞增殖,说明SRC/ABL通过依赖AKT磷酸化的信号通路在成骨细胞增殖过程中起到关键作用。VEGFR/MET受体介导的信号通路在成骨细胞增殖中同样发挥重要作用,且其介导成骨细胞增殖过程不依赖于AKT的磷酸化。
背景 没有 胃肠道间质瘤是最常见的间质源性的消化道肿瘤,该肿瘤主要分子特点是存在能够异常激活KIT与PDGFRA的基因突变。虽然病例的总体生存率随着酪氨酸激酶抑制剂的问世得到了很大的改善,但由于治疗过程中会产生KIT或PDGFRA的继发性突变,大多数病例最终仍然会发展到耐药阶段,造成病情的恶化。近来的研究表明,组蛋白乙酰基转移酶(histone acetyltransferase, HAT) CBP及p300的功能与多种肿瘤的发生发展密切相关,而应用针对CBP和p3DD的靶向小分子抑制剂则可以抑制某些实体瘤细胞的增殖并且诱导肿瘤细胞发生凋亡。此外,另有报道显示,CBP/p300可以在体外细胞模型中直接作用于一种转录因子ETV1,通过催化ETV1的乙酰化从而促进其的转录活性；而在GIST组织中,ETV1则有着特异性的表达,并且被认为是一种与GIST生存相关的特殊因子。因此,转录后乙酰化修饰在GIST起源与成瘤过程中的潜在作用已逐渐受到重视。 目的 明确ETV1在GIST组织与细胞中的表达特征及潜在生物学作用,进而探究其调控因子CBP/p300在GISTs成瘤和肿瘤细胞增殖过程中的作用,并评估它们在GIST靶向治疗中的应用前景。对选择性CBP/p300抑制剂C646的潜在治疗作用进了探索,并对具体的分子机制进行了深入的研究。 方法 通过向GIST细胞转染特异的小干扰RNA序列从而下调细胞中的ETV1.

Thomas停跳液后缺血40min,复灌K-H液60min；IPO组：灌注4℃ST.Thomas停跳液后缺血40min,于复灌开始前予以复灌K-H液10s、停灌10s的循环6次,续灌K-H液58min; 5-HD+IPO组：灌注4℃ST.Thomas停跳液后缺血40min,行5-羟葵酸灌注5min,继以K-H液复灌10s、停灌10s循环6次,续灌K-H液53min。观察并记录各组平衡末和续灌末心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVDEP)、以及最大dp/dt等心功能的变化。 寻找更多 2.以差速离心法及Nycodenz密度梯度离心法提取、纯化大鼠心肌线粒体,并以Western blot法验证其纯度。 3.按照2中方法获取纯化的心肌线粒体；提取各组线粒体蛋白并行纯化后定量；采用Cydye染料对各组荧光标记后行2D-DIGE分离。采用DeCyder V6.0软件分析对比组差异表达蛋白点并将差异蛋白质斑点进行全自动斑点处理工作站处理；最后进行MALDI-TOF-MS鉴定和数据检索。 结果： 1.平衡末各组间心功能无明显差异；续灌末Nor,

IPO组心功能显著优于Con组,5-HD+IPO组与Con组比较心功能无明显差异。 2.采用Nycodenz不连续密度梯度离心法提纯了大鼠心肌线粒体,并以Western blot法证实了所获线粒体纯度较高。 3.对各组进行2D-DIGE,得到聚焦良好、相似性高的图谱,在各组胶上平均检测出752±49个蛋白斑点；各组分析鉴定后得到28个较好的差异蛋白点图谱,本研究重点关注其中差异1.5倍以上的5个蛋白。 4.(1)Nor和Con组比较鉴定出：spot554 (NDUFA10, NADH dehydrogenase [ubiquinone] 1 alpha subcomplex subunit 10, mitochondrial; NADH脱氢酶亚基)表达水平降低3.84倍；spot555 (rCG55630,isoform CRA,推测为NADH脱氢酶亚基)表达水平降低3.76倍。 (2)IPO和Con组比较鉴定出：spot554(NDUFA10)、spot254(SDHA, Succinate dehydrogenase [ubiquinone]

flavoprotein subunit, mitochondrial;琥珀酸脱氢酶—黄素蛋白)两种蛋白表达水平显著分别降低3.33倍、1.68倍；spot645 (CoQ9,合成CoQ的必须酶)表达水平降低3.43倍、spot648 (CoQ9)表达水平升高2.42倍。 (3) 5-HD+IPO和IPO组比较鉴定出：spot254 (SDHA)表达水平升高1.65倍。 结论： 1.缺血后处理能改善大鼠心脏功能；而5-羟葵酸拮抗缺血后处理能抑制缺血后处理改善心功能的作用。 2. Nycodenz不连续密度梯度离心法可获得纯度较高心肌线粒体。 3.(1)心肌缺血再灌注损伤影响NDUFA10的活性。 (2)缺血后处理可维持线粒体NADH呼吸链稳定。 selleck (3) SDHA和线粒体敏感性K+通道(mitoKATP)存在着密切的关系；两者相互作用共同参与了缺血后处理内源性保护机制。 (4)缺血后处理用于缺血再灌注心肌时可能造成CoQ9发生剪切或修饰。
研究背景:在许多有活性的羰基化合物和糖化终末产物(AGEs)的前体中,甲基乙二醛(MG)可能对细胞内的AGEs的形成起着关键作用。以前的研究已经报道AGEs与阿尔茨海默病(AD)的发病机制有关,即与由异常磷酸化的tau聚合而成的神经原纤维缠结(NFTs)的形成有关。研究报道AD患者体内的MG水平是正常人体内的两倍,而其在脑脊液的浓度是血浆中的五到七倍。MG的特异清除酶——乙二醛酶I(Glyoxalase I)的表达在AD的早期阶段有减少,而在AD的中末期有增加。另外有研究证明乙二醛酶I在tau的转基因小鼠P301L中有明显的升高,这表明MG与tau之间有联系。而细胞内的AGEs与PHF-tau共定位,AGEs和糖化的tau蛋白培养可以诱导氧化应激并最终导致神经功能障碍和细胞死亡,暗示了AGEs和tau之间有某种内在联系。我们推测,MG作为AGEs重要的高活性的前体,可能是AD的tau病理性改变重要的上游致病因素之一。因此,探明其在tau蛋白异常磷酸化中的机制,对进一步理解AD和寻找新的防治途径具有重要意义。

目的:探讨MG对tau蛋白磷酸化的影响及其作用机制。 方法:用不同浓度的MG处理SK-N-SH细胞不同时间,观察在不影响细胞活性的MG浓度和处理时间的条件下,通过western blotting和免疫荧光等方法检测经MG处理后的细胞,tau蛋白磷酸化变化模式,并探讨tau磷酸化相关的蛋白激酶和磷酸酶活性及其在tau磷酸化中的作用;使用相关激酶的抑制剂和氨基胍阐明MG影响tau蛋白异常磷酸化的可能机制。 结果: 1.用不同浓度的MG处理SK-N-SH细胞1小时,或者用1.0 mM浓度的MG处理细胞不同时间,发现用少于5 mM的MG处理细胞1小时或者用1 mM的MG处理细胞时间低于4小时对细胞的活性无明显影响。 2.用不同浓度的MG分别处理细胞1小时,或者用1.0 mM浓度的MG处理细胞不同小时,可以观察到MG能够诱导tau在许多不同位点磷酸化。 3. GSK-3β和p38在MG诱导的tau异常磷酸化中激活。 4. JNK,Erk1/2,cdk5在MG诱导的tau异常磷酸化中不起作用。 5. PP2A的活性在MG诱导的tau异常磷酸化中未改变。 6.使用GSK-3β和p38的抑制剂能够减弱MG诱导的tau的异常磷酸化。 7.使用氨基胍(AG)处理细胞,能够改善MG引起的tau的异常磷酸化。 并且 结论:MG能够引起SK-N-SH细胞中tau蛋白的磷酸化,这可能是通过调节GSK-3β和p38,而氨基胍可以逆转tau蛋白的磷酸化。
目的: 制作大鼠四动脉结扎(four-vessel occlusion, 4-VO)全脑缺血(global cerebral ischemia, GCI)模型,研究延迟性脑缺血后处理(delayed ischemic postconditioning, PostC)介导的Akt/GSK3β信号通路对大鼠缺血性神经元损伤的保护作用及抗线粒体凋亡机制。 方法: 1. SPF级成年雄性SD大鼠,体重250～300 g,制作四动脉结扎全脑缺血模型,缺血8 min。实验动物随机分为:假手术组(sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、延迟性脑缺血后处理组(PostC组)、溶剂对照组(PostC + Vehicle组)、抑制剂组(PostC + LY294002组)。假手术组仅暴露双侧颈总动脉,但不进行缺血;缺血再灌注组暴露双侧颈总动脉并夹闭8 min;延迟性脑缺血后处理组于缺血8 min后,再灌注48 h后行二次缺血3 min,溶剂对照组及抑制剂组分别在二次缺血前20 min脑室注射DMSO及LY294002。实验分组和流程如Fig. 1所示。 2.

05）。各处理组p-Akt表达均下降。DRAM1基因可以促进自噬。顺铂联合电离辐射同单纯电离辐射相比DRAM1表达明显增高。各处理组MAPLC3-II蛋白（表明自噬体形成）表达明显增高（p
第一部分SENP1表达预测非小细胞肺癌化疗敏感性和预后 背景非小细胞肺癌(NSCLC)是最常见的恶性肿瘤,占全部肺癌的80%左右。超过65%的NSCLC患者发现时已为中晚期,只能采取放、化疗为主的综合治疗。近年来,尽管在治疗方式上已有较大进展,但非小细胞肺癌患者的死亡率仍然很高。其中,1/3-1/2的患者对铂类药物耐药。研究发现缺氧通过多个通路导致肿瘤细胞对顺铂耐药,而SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)在缺氧-HIF1α-VEGF信号通路中起重要作用。为此,进行本研究。旨在评价SENP1表达水平与非小细胞肺癌TNM病理分期、化疗敏感性和预后的关系,进而研究SENP1调节血管内皮生长因子(VEGF)表达的作用。 方法构建SENP1siRNA并转染至肺癌细胞系中。应用RT-PCR研究SENP1siRNA对VEGF mRNA表达的影响。在100例非小细胞肺癌患者中分析SENP1表达与TNM病理分期、化疗敏感性和预后的相关性。 结果非小细胞肺癌中VEGF mRNA水平高于正常肺组织。SENP1siRNA抑制肺癌细胞系中VEGF

mRNA表达。非小细胞肺癌中55%为SENP1高表达。SENP1蛋白过表达与肺癌中低分化相关(肺癌高、中、低分化中SENP1蛋白过表达的比例分别为3.6%,38.2%,和58.2%,P=0.046)。T分级越高,SENP1蛋白过表达的比例越高(T1,T2和T3的表达比例分别为10.9%,89.1%和0%；P=0.003)。SENP1蛋白过表达组的淋巴结转移率(76.4%)高于SENP1蛋白低表达组的淋巴结转移率(33.3%,P<0.001)。TNM分期越高,SENP1蛋白过表达的比例越高(Ⅰ期,Ⅱ期和Ⅲ期的表达比例分别为10.9%,61.8%和27.3%,P
研究背景

这个 ATM激酶抑制剂供应商 胃癌是一种常见的恶性肿瘤,在美国,其发病率及死亡率位列第14位,每年新增胃癌确诊病例数约为21000人,死亡数约为10000人。胃癌患者中,男性所占比例较大,约占60%左右。胃癌是一种老年性疾病,70岁左右的人群发病率最高。在美国社会的各个种族中,非洲裔、亚洲裔以及西班牙裔美国人的胃癌发病率要高于白种人的胃癌发病率。在世界范围内,胃癌是第四大恶性肿瘤,其死亡率位居第二位。胃癌在东亚和南美洲发病率较高,但是近些年来,其发病率在发达国家呈逐年上升趋势,约占世界范围内胃癌新增病例数和死亡数的三分之二。而在美国,胃癌的发病率却在逐渐下降。在发达国家阵营中,日本和韩国的胃癌发病率则最高。胃癌在日本是最常见的恶性肿瘤。正因为如此,日本政府于上世纪七十年代启动了胃癌筛选计划,得益于该计划的实施,胃癌在日本的发病率下降了50%。尽管胃癌在日本的发病率在下降,但是其大部分都是末端胃癌。胃癌发病的危险因素主要是环境因素和基因遗传因素。1994年,国际癌症研究机构明确提出幽门螺杆菌是一种致癌物。大量的科学研究也证实胃癌发病与幽门螺杆菌感染有关。目前认为,幽门螺杆菌感染导致胃癌形成的主要机制是感染导致胃粘膜产生慢性炎症,长期的感染导致胃炎,主要集中在胃体,并伴有胃粘膜的萎缩。在一些患者中,这一病变还可导致胃肠道粘膜发生化生、异型增生,直至最后发生肠型腺癌。研究表明,在胃肠道粘膜发生化生的过程中,大量的基因存在异常表达,最终可能导致胃肠道粘膜发生癌变,例如,环氧酶2、细胞周期素蛋白D2、p53在胃粘膜化生过程中过表达,微卫星不稳定性,p27的表达降低以及CDX1、CDX2等转录因子在胃粘膜化生过程中的异常表达。这些均表明胃肠道粘膜化生是胃癌发病过程中的一个重要的危险因素。但是并不是每一个发生肠化生的患者都会发展成胃癌。研究表明,宿主炎症反应在这一过程中发挥重要作用。有文献报道,白介素1表达升高的患者发生胃癌的风险较大。此外,高盐食物,特别是一些含有大量的硝酸盐的腌制或者熏制的食物,再加上水果、蔬菜的摄入量较低,经常有这一饮食习惯的人群的发生胃癌的几率将会大大增加。这一作用机制,目前主要是认为食物中含有的硝酸盐成分在细菌的作用下转换成亚硝基化合物,而水果及蔬菜中则富含抗坏血酸,抗坏血酸能有效清除亚硝酸基化合物及氧自由基。目前,胃癌的主要治疗方式是手术切除,然后辅以放化疗,尽管这一治疗方式仍然行之有效,但是对胃癌转移患者却疗效不佳。因此,寻找胃癌新型早期诊断和预后评估因子仍然是一项迫在眉睫的任务。

AZD5363临床实验 细胞外信号分子,如致癌基因或抑癌基因,是许多学者的研究热点。作为分子标记物,p53,钙黏蛋白E (E-cadherin)和HER-2往往提示胃癌患者预后差。值得我们注意的是,各种各样的蛋白酶类,包括基质金属蛋白酶类(MMPS)和丝氨酸蛋白酶类,因其是细胞外基质物质的降解产物,往往也在胃癌发生-发展过程中发挥重要作用。 丝氨酸蛋白酶抑制剂2(SERPINE2),别称前列腺微管连接蛋白1(PN-1),是丝氨酸蛋白家族中的一员,主要负责调节凝血酶、尿激酶、血纤维蛋白溶媒和胰蛋白酶的活性。在慢性阻塞性肺疾病和小叶性肺气肿中丝氨酸蛋白酶抑制剂2作为一个敏感因子首次被发现。最近的研究表明,丝氨酸蛋白酶抑制剂2与肿瘤形成密切相关。有文献报道,丝氨酸蛋白酶抑制剂2在乳腺癌、结肠癌、口腔鳞状细胞癌等多种恶性肿瘤中呈现异常表达。此外,丝氨酸蛋白酶抑制剂2在前列腺癌中同时也是一种抑癌基因,有降低肿瘤细胞增殖和血管形成的作用。而恰恰相反,另有文献报道,丝氨酸蛋白酶抑制剂2在睾丸癌的移植物模型中有促进淋巴结转移的作用,提示其可能同时也是一个致癌基因。但是,丝氨酸蛋白酶抑制剂2在胃癌中的表达、其与胃癌患者预后的关系以及其在胃癌细胞中的生物学功能仍然鲜有报道。 本实验通过应用实时定量免疫荧光聚合酶链式反应(real-time quantitativePCR.

05,**p<0.01),且呈剂量-效应关系(**p
本文简述了党参对人体内分泌系统、免疫系统、消化系统、循环系统、神经系统、运动系统、呼吸系统、生殖系统的现代药理研究进展,分析党参治疗脾肺虚弱、气短心悸、内热消渴的药理作用基础,发现党参对循环系统、消化系统、免疫系统的现代药理研究比较深入,已经达到细胞分子水平,部分研究甚至达到了基因水平,对党参的临床运用、药物开发、药食同源应用提供了坚实的基础,而对内分泌系统、生殖系统作用研究不深入,对泌尿系统、肌肉系统、皮肤系统等的研究少,需要国内外学者继续深入研究,期望有更大的创新出现。
HMGB-1是一种高度保守的DNA结合蛋白,与基因修复及转录调控密切相关。但HMGB-1生成细胞主动分泌和被动释放到细胞外的HMGB-1却是一种重要的晚期炎症递质,具有较强的致炎活性。研究显示:HMGB-1在炎症,特别是重症炎症及炎症的慢性化病理进程中起着重要作用;抑制HMGB-1的活性及分泌或下调其基因表达被用来研究降低炎症反应的瀑布效应;监测HMGB-1可为重症炎症的临床诊断、治疗和预后判断的新靶标。本文扼要综述了近年炎症递质HMGB-1与炎症的研究进展。
目的:探索CD200R在LPS诱导的小胶质细胞炎症模型中的作用以及是否有pho-p38MAPK及pho

JAK2-STAT通路的激活。方法:采用小胶质细胞进行研究,将细胞用CD200R抗体及LPS处理,ELISA检测TNF-α及IL-1β的分泌。Western blot检验p38MAPK、JAK2、pho-p38MAPK及pho-JAK2-STAT表达。为证实这两条通路是炎症的下游通路,分别应用两者的阻断剂处理细胞后再次检测炎症因子的分泌。结果:在小胶质细胞表面有CD200R的表达;应用CD200R的阻断性抗体后,TNF-α及IL-1β分泌均增多,较对照组及LPS组比较差异具有统计学意义(P<0.05),并且有pho-p38MAPK及pho-JAK2-STAT的激活;阻断剂SB203580及AG490均能抑制TNF-α及IL-1β的分泌。结论:pho-p38MAPK及pho-JAK2-STAT两条通路是LPS及CD200R抗体诱导的小胶质细胞炎症反应的下游通路。
2016年5月13-16日,安徽合肥专题1:精神分裂症与抑郁症T1-1急性及慢性应激诱导的小鼠中枢及外周神经递质谷氨酸、谷氨酰胺和γ-氨基丁酸的变化陈亚萍1,王闯2,程玉芳1,李亦文1,徐江平1(1.南方医科大学药学院神经药理与新药发现课题组,广东广州510515;2.宁波大学医学院,浙江宁波315211)摘要:目的通过测定急性应激造模和慢性应激造模小鼠的血浆和脑组织内谷氨酸、谷氨酰胺、γ-氨基丁酸3种神经递质的含量,比较抑郁症不同阶段脑组织和血浆中神经递质的变化。方法小鼠慢性应激造模8周,急性束缚应激3

时间 h,用悬尾实验检查造模效果后取脑组织和血浆,以高丝氨
自噬是真核生物细胞内一种高度保守的细胞程序,在肝脏的营养和能量代谢中起着重要作用。促进肝细胞自噬,可保护细胞应对外界不良刺激,但若自噬过度,可以引起肝细胞自噬性细胞死亡。肝星状细胞(HSC)是肝纤维化发生、发展过程中一种重要细胞,自噬可为其活化提供能量,但也可能导致其死亡。简述了自噬与肝细胞、HSC的关系;介绍了近年来丝裂原活化蛋白激酶通路与自噬的关系,提出了深入研究肝纤维化过程中自噬与调节通路间的关系,可为研发抗肝纤维化药物提供新靶标的观点。
神经系统退行性疾病是一类以大脑和脊髓中特定的神经元损伤及丢失为主要病理特征的疾病,目前认为,遗传及环境因素共同参与了神经系统退行性疾病的发生及发展过程。MAPKs通路是机体中重要的蛋白激酶偶联受体介导的信号转导通路,其在神经系统退行性疾病的发病机制中发挥着重要的作用。本文就不同的MAPKs信号转导通路在帕金森病、阿尔茨海默病等神经系统退行性疾病中的研究进展作以综述。
目的探讨不同剂量郁金提取物对神经病理性疼痛模型慢性压迫性神经损伤(chronic

这个 constriction injury,CCI)大鼠痛阈及脊髓早晚期因子P-P38表达的影响及调节作用,并讨论郁金提取物对神经病理性痛的影响机制。方法选择成年健康雄性SD大鼠36只,体重250~294 g,建立CCI大鼠模型,将SD大鼠随机分为:正常组,模型组,郁金提取物低、中、高剂量组,加巴喷汀组和溶媒组,每组4只,对各组大鼠进行热缩足潜伏期测定,用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠L_4~L_6脊髓的中早晚期因子P-P38表达。结果 1与正常组相比,造模后大鼠热缩足潜伏期(TWL)值显著下降(P<0.01)。2造模后大鼠L_4~L_6脊髓的中早晚期因子P-P38表达灰度值与内参的比值成上升趋势,均较正常组显著增加(P<0.01);与溶媒组相比,郁金提取物高剂量组和加巴喷汀组能显著降低L_4~L_6脊髓的中早晚期因子P-P38的表达(P<0.01)。结论高剂量郁金提取物可能通过降低神经病理性疼痛CCI模型大鼠脊髓的中早晚期因子P-P38的表达而发挥抑制神经病理性疼痛的产生和发展。
目的:研究红景天苷(Sal)通过激活PI3K/AKT/NRF2通路减轻大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠的神经细胞凋亡的作用及其机制。方法:健康成年雄性SD大鼠120只,采用线栓法建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,术后立即腹腔注射红景天苷(50mg/kg),分别连续给药1d、2d和7d,采用Longa评分法对大鼠神经功能损伤评分,Western 有 blot法检测大鼠缺血侧脑组织Bcl-xl、Bax、HO-1蛋白及NRF2核蛋白的表达。同时,采用侧脑室注射PI3K抑制剂(LY294002)30min后造模,红景天苷给药1d,检测AKT、p-AKT、Bcl-xl、Bax、HO-1蛋白NRF2核蛋白的表达。结果:与MCAO组比较,红景天苷分别给药1、2、7d后,MCAO+Sal组能够下调Bax,上调Bcl-xl蛋白的表达(P<0.05),促进NRF2的核转录水平,提高HO-1蛋白的表达(P<0.

93倍。另外,喹啉环上5位羟基取代优于羰基取代。 本课题的研究结果为进一步设计活性更好的新型抗纤维化化合物奠定了基础,为寻找新的纤维化药物提供理论基础,对促进抗纤维化药物的发展具有重要的科学价值。
目的癫痫是神经科常见的一组慢性、发作性疾病,其发病机制非常复杂。有研究者提出新的癫痫发病机制:血脑屏障(Blood-brain

barrier,BBB)损伤后,通透性增加,大量血清蛋白质进入脑细胞外间隙,广泛分布于星形胶质细胞上的转化生长因子β受体Ⅰ(Transforming growth factor-βreceptorⅠ,TβRⅠ)与血清蛋白质相互作用,调控星形胶质细胞的功能发生变化,最终诱使癫痫发生[1]。而TβRⅠ是否参与癫痫发病机制的还需要大量的实验数据来证明。本文通过研究红藻氨酸(kainic acid, KA)致大鼠颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)后多功能细胞因子TβRⅠ在额叶和海马组织的表达变化,探讨TβRⅠ与癫痫的关系,为进一步研究TβRⅠ是否参与颞叶癫痫的发病机制提供新的实验依据。 方法将60只雄性SD大鼠随机分为模型组(50只)和对照组(10只),模型组再依据KA致痫后动物处死时间分成6h、12h、1d、3d、1w共5个亚组,每组10只。模型组大鼠采用侧脑室注射1μg/μl的KA 1μl建立TLE动物模型,对照组大鼠用等体积生理盐水代替KA行侧脑室注射。采用行为学观察法筛选达到Racine分级标准Ⅲ-Ⅳ级的大鼠为TLE模型组,采用半定量RT-PCR法及Western Bloting技术检测KA致痫后6h、12h、1d、3d、1w组大鼠额叶及海马中TβRⅠmRNA及蛋白的表达变化,与对照组对比分析。

ERK inhibitor 以及 结果①半定量RT-PCR检测TβRⅠmRNA表达:与对照组相比,模型组致痫后TβRⅠmRNA在额叶及海马中表达明显增高;②Western bloting检测TβRⅠ蛋白表达:与对照组相比,模型组致痫后TβRⅠ蛋白在额叶及海马中表达均增高,与RT-PCR结果一致;③TβRⅠ蛋白水平在KA致痫后6h逐渐增加,3d达高峰,1w后逐渐降低;TβRⅠ蛋白表达与TβRⅠmRNA的变化趋势基本一致;④海马组织中TβRⅠmRNA及蛋白的表达比额叶更高;⑤左右额叶及海马组织中TβRⅠmRNA及蛋白表达无明显差异。 结论TβRⅠmRNA及蛋白在致痫大鼠额叶及海马组织中的表达显著增高,提示TβRⅠ参与了癫痫的发病机制。
目的:研究X-线照射对小鼠肺组织中Foxp3和TGF-β1表达的影响,分析Foxp3和TGF-β1的表达水平变化的意义,进一步探讨X-线照射对肺组织炎症和免疫微环境的影响及其临床意义。

方法:将8周龄雌性C57/BL6小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠接受12Gy 6MV-X线胸部照射,对照组小鼠不接受照射。在照射后的每个时间点(1、6、12、24、72h及2、4、8、24w),各组均处死3只小鼠。小鼠处死后右肺组织立刻置于-80℃冰箱保存,左肺组织4%多聚甲醛固定24h后制作石蜡标本。用RT-PCR法检测Foxp3和TGF-β1基因的表达情况;采用Western blot法检测Foxp3和RORγt蛋白的表达水平;Masson染色了解肺部纤维化情况,免疫组化技术检测经X-线照射后不同时间点肺组织内Foxp3表达的变化。 结果: 1.实验组小鼠经X-线照射后Foxp3 mRNA表达水平下降,其中以6h、24h、72h、2w、4w和8w较为明显。Foxp3蛋白表达水平也有不同程度的下降,与对照组相比,实验组在照射后6h、24h、72h、8w时降低较明显。免疫组化结果显示Foxp3主要定位于细胞核和细胞质中,分布于淋巴细胞中。实验组Foxp3表达下降,实验组免疫组化评分(3.48±1.05)与对照组(5.89±1.53)比较,有显著性差异(P<0.05)。实验组在照射后6h、24h和4w时Foxp3较对照组表达降低,差别有显著统计学意义(P<0.01),实验组在照射后1h、12h、24w与对照组相应时间点相比较,Foxp3表达降低,差别有统计学意义(P
MSN是TGF-β超家族成员,其主要功能为抑制肌肉的生长。迄今为止,绝大多数围绕MSN的研究都集中在它调控肌肉生长和发育的方向。MSN在骨骼肌中高表达,成熟后分泌进入血液,通过循环系统可以遍布全身;另外,MSN的受体在组织中广谱表达。因此,MSN很有可能参与调控肌肉体系之外的其它生物学事件。P6C细胞是从结肠癌病人肿瘤组织中提取的具有干细胞特性的细胞。它有很强的自我复制和形成肿瘤的能力,而且有很强的耐受肿瘤药物的能力。现在医学虽然发展迅速,但对癌症仍没有很有效的治疗办法。肿瘤干细胞是肿瘤存在和转移的关键,所以治疗肿瘤干细胞是治疗肿瘤的症结所在,我们的实验发现MSN能引起结肠癌干细胞的凋亡,这为抗肿瘤研究提供了一种新的策略,对肿瘤的治疗有很重要的意义。 无 目的 肿瘤干细胞是近几年来提出的新的观点,肿瘤干细胞的提出也为肿瘤的治疗提供了新的策略。我们用流式细胞仪,激光共聚焦显微镜,western等技术探讨了MSN引起P6C细胞的凋亡及其机制。 方法 1.

01),而p-p38水平也相应呈降低(p<0.05),同时c-myc蛋白阳性表达率也逐渐降低。结论:抑制p38MAPK的活性可能影响HSC的增殖,p38信号传导通路可能在调节HSC的增殖中起着重要的作用,其调节增殖的机制可能与影响c-myc基因的表达有关。
背景和目的:肝纤维化是由于细胞外基质在肝脏的过度沉积,是许多慢性肝病向肝硬化发展的中心环节。肝星状细胞(β)的激活是肝纤维化形成的核心环节,诱导活化的肝星状细胞凋亡可逆转肝纤维化的形成,是研究肝纤维治疗的重要方向之一。P38MAPK是MAPK家族的重要成员,参与多种细胞的活化、增殖及凋亡,目前P38MAPK信号通路在肝星状细胞中的作用机制研究报道较少。本实验通过P38MAPK特异性抑制剂SB203580作用乙醛刺激后的HSC-T6细胞株,观察SB203580对HSC-T6凋亡的影响;P-P38蛋白的变化和BCL-2蛋白表达的变化,初步探讨P38MAPK信号通路对HSC凋亡的影响及机制,为肝纤维化的临床治疗提供理论和实验依据。 Ipatasertib 方法:不同浓度SB203580作用于乙醛刺激的HSC-T6;MTT法检测细胞抑制率;ELISA酶联法检测细胞核小体水平;FCM法检测细胞凋亡率;Western

blot法检测P-P38蛋白变化;SABC法检测BCL-2蛋白表达水平。 结果:MTT法提示SB203580抑制乙醛刺激的HSC-6生长,且呈剂量依赖性(p
目的：小肠组织对射线极为敏感,核事故受照人员,白血病和腹腔局部放疗患者受到照射可引起对消化道特别是肠的损伤。电离辐射可导致小肠隐窝上皮细胞增殖抑制及部分细胞凋亡等异常改变,绒毛上皮的更新受阻,绒毛上皮结构的完整性遭到破坏,进而引起肠屏障功能障碍甚至引发菌血症和毒血症导致个体死亡。P38MAPK是重要的应激通路蛋白,在炎症中发挥着重要作用。本研究观察p38抑制剂SB203580对小鼠辐射致死效应和小肠损伤的保护作用。方法：小鼠辐射致死效应试验中C57BL/6小鼠按体重随机分为对照组,照射组和照射给药组,每组12只。对照组给予假照射,其它两组接受7.2Gy照射,照射前半小时腹腔注射SB203580(15mg/kg),以后隔天给药共5次。观察小鼠30天生存率。小肠损伤保护试验中小鼠随机分为对照组,照射组和照射给药组。对照组6只,其余各组8只。对照组为假照射,其它两组接受7.2Gy照射。给药组在照射前半小时腹腔注射SB203580(15mg/kg)。24小时后处死小鼠取小肠组织固定,脱水,并做石蜡切片。对切片进行HE染色,镜下计数每个隐窝内凋亡细胞数量,用免疫组化SP法检测caspase-3,

5-Fluoracil solubility dmso Ki67, P53, p-p38表达,镜下计数隐窝阳性表达数。结果：对照组小鼠30天全部存活,照射组第11天全部死亡,照射给药组小鼠30天生存率为40.0%。照射组和照射给药组死亡小鼠平均生存天数分别为7.5d和13.6d。与照射组相比,照射给药组小肠隐窝细胞p-p38表达下降34.63%,p53表达下降21.78%,凋亡数量下降33.00%(caspase-3免疫组化染色)和30.14%(HE染色),Ki67表达升高37.96%,均有非常显著差异(p
骨髓造血组织功能抑制是肿瘤放疗与化疗的常见的副作用,也是高剂量核辐射事故的首要死亡原因,临床上表现为急性和慢性骨髓抑制。急性骨髓抑制即刻出现严重的症状,导致辐射事故受害者与放疗患者的死亡,或者使肿瘤放疗病人的病情恶化。慢性骨髓抑制起病隐匿,病情迁延并且难以康复,而且,由于临床对急性骨髓抑制的治疗掩盖这种难以逆转的骨髓损伤。由于骨髓功能抑制难以治愈,急需对其发病机制进行研究,为骨髓功能抑制的有效治疗与预防提供依据。众多证据表明造血细胞凋亡引发急性骨髓抑制,而造血干细胞的衰老被认为是骨髓长期抑制的主要原因,多项研究表明电离辐射激活p38

MEK inhibitor药剂 MAPK诱导造血细胞凋亡和衰老。 本研究以P38 MAPK的特异性抑制剂SB203580为研究对象,研究其对全身照射小鼠造血细胞的辐射保护作用,并初步探讨其作用的机制。包括三部分实验：1)SB203580对造血祖细胞和造血干细胞保护作用的观察：小鼠随机分为对照组、照射组及SB203580给药组,以6.0 Gγ137Csγ射线全身均匀照射SB203580给药组和照射组的C57BL/6小鼠。收集并计数外周血红细胞、白细胞和血小板,以及单侧股骨骨髓有核细胞；骨髓细胞半固体培养法检测骨髓有核细胞增殖能力,卵石样造血集落形成实验检测造血干细胞增殖能力。2)SB203580的抗氧化作用：收集小鼠骨髓有核细胞,分组同上,照射组与SB203580给药组细胞进行1Gγ体外照射,照射之后孵育过夜,酶标仪检测细胞内活性氧水平。3)SB203580对造血干细胞样细胞p16 mRNA表达的影响：磁珠分离小鼠系标记阴性骨髓造血细胞,分为对照组、照射组、照射+放线菌素D组、照射+SB203580组、照射+SP600125组,细胞照射剂量为4Gγ。培养后去除悬浮细胞,消化贴壁细胞后重新贴壁取非贴壁细胞为干细胞样细胞,提取RNA, Real-time PCR检测p16与p21 mRNA的表达情况。 本研究观察到SB203580给药组外周血白细胞、血小板的数量分别比照射组高111.8%和157.7%(P<0.05),CAFC阳性细胞形成率较照射组高146.6%(P<0.01)。SB203580处理组体外受照骨髓有核细胞内活性氧较照射组低56.