MG-63及U20S细胞分别培养于含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基及McCoy’s 5a Medium Modified培养基中,将MG-63及U20S细胞放于37℃,5%CO2的培养箱中培养。当细胞生长至90%融合时进行传代,根据实验需要给予相应的干预； 2.上述传代培养的细胞,应用CCK-8法检测BBR对MG-63、U2OS细胞增殖的影响；

Alectinib制造商 3.上述传代培养的细胞,应用流式细胞仪检测BBR对MG-63、U2OS细胞凋亡的影响； 4.上述传代培养的细胞,将p38MAPK及JNK的抑制剂SB203580及SP600125与MG-63、U2OS细胞及BBR共同孵育24 h后,应用流式细胞仪检测BBR对MG-63、U2OS细胞凋亡的影响； 5.上述传代培养的细胞,随机分为Control组,DMSO组,10ug/mlBBR组,50 ug/mlBBR组,100 ug/mlBBR组,每组设5复孔。分别将溶媒DMSO, 10ug/ml BBR,50 ug/mlBBR,100 ug/mlBBR加入相应的孔中,孵育24 h后按照caspase-3活性试剂盒说明书方法检测MG-63、U2OS细胞的caspase-3活性； 6.BBR干预MG-63、U20S细胞24 h后,收集细胞并提取细胞蛋白质,应用Western-blotting方法检测MG-63、U2OS细胞中Bcl-2、Bax (?)勺表达。 实验结果： 1.BBR呈时间与剂量依赖性抑制MG-63、U2OS细胞增殖。 2.BBR诱导MG-63、U2OS细胞发生凋亡,p38MAPK抑制剂SB203580与JNK抑制剂SP600125显著抑制BBR诱导的MG-63、U2OS细胞凋亡。结果显示,对照组,溶媒组,10 ug/mlBBR组,50 ug/mlBBR组,100 ug/mlBBR组MG-63细胞凋亡的比例分别为(3.570±0.661)%,(5.820±0.456)%,(7.930±0.511)%,(13.630±1.352)%和(22.187±1.962)%；对照组,溶媒组,10ug/mlBBR组,50 ug/mlBBR组,100ug/mlBBR组U20S细胞凋亡的比例分别为(4.083±1.301)%,(7.803±0.626)%,(10.630±0.534)%,(17.470±1.984)%和(27.660±2.088)%。三种BBR组细胞凋亡的比例与溶媒组的差异具有统计学意义(P
第一章氟非尼酮对肾小管上皮细胞炎症反应的影响及作用机制研究 研究背景：肾纤维化是各种慢性肾脏疾病进展至终末期肾病的共同通路和主要病理基础。无论何种病因导致的慢性肾脏疾病,随着慢性肾脏疾病的进展往往会导致广泛的组织纤维化、肾实质完全破坏和肾功能衰竭。因此,攻克肾脏纤维化一直是慢性肾衰竭防治中最为关键的科学问题。抗肾纤维化新药AKF-PD是本课题组设计的小分子化合物。目前已证实AKF-PD对肾纤维化实验动物模型有良好的抗纤维化疗效。但AKF-PD治疗肾间质纤维化的具体机制尚未完全阐明。目前的研究结果显示AKF-PD(?)(?)抑制(?)NADPH氧化酶的表达和减少活性氧的产生,抑制肾小管细胞凋亡、转分化及成纤维细胞的增殖,下调致纤维化细胞因子的表达,减少病变肾脏基质胶原合成。研究表明炎症反应是肾脏纤维化发病进程中的早期事件,对肾纤维化的发病具有重要作用。但AKF-PD对肾脏局部细胞炎症反应的影响及其作用机制尚不清楚。肾纤维化是个复杂的病理生理过程,需要多种细胞的参与及相互作用,包括肾固有细胞及募集的炎症细胞。肾脏受到多种致肾损伤因子作用后,一方面非致死受损的肾固有细胞本身发生活化、增殖,分泌大量炎症／趋化因子,加重肾损伤；另一方面致死性受损的肾固有细胞发生坏死、凋亡,细胞死亡后作为抗原激活临近炎症细胞,促进炎性细胞分泌炎症因子/趋化因子,扩大炎症反应,进一步加重肾损伤。

和 肾小管上皮细胞是兼有免疫调节作用且生物学功能十分活跃的细胞。作为肾固有细胞的主要组成部分,其在肾脏疾病局部微环境形成及调控中发挥重要作用。研究报道促炎因子TNF-a在肾间质纤维化中表达增加,增加的TNF-a可以加重炎症反应及肾损伤。 目的：观察AKF-PD对促炎因子TNF-a诱导HK-2细胞炎症因子及趋化因子表达的影响；进一步探讨AKF-PD对TNF-a诱导HK-2细胞MAPK及NF-κB信号通路的调节作用。 www.selleckchem.cn/products/MLN-2238.html 方法：将细胞分为空白对照组,TNF-α刺激组,TNF-a+AKF-PD组,TNF-a+DEX组,分别用2mM AKF-PD、1μMDEX预处理HK-2细胞1小时后,加入TNF-a (lOng/ml)继续培养24小时,收细胞上清,用ELISA方法观察AKF-PD对TNF-α刺激的HK-2细胞IL-6、IL-8及MCP-1的影响。 将细胞分为空白对照组,TNF-a刺激组,TNF-a+AKF-PD组,TNF-a+MAPKs抑制剂组,分别用2mM AKF-PD预处理HK-2细胞24小时,10pM MAPKs特异性抑制剂(PD98058、SB203580、SP600125)处理HK-2细胞1小时后,加入10ng/ml TNF-a继续培养15分钟,提细胞蛋白,用Western Blot方法检测AKF-PD对p-ERK1/2,p-p38和p-JNK表达的影响。 将细胞分为空白对照组,TNF-α刺激组,TNF-a+AKF-PD组,TNF-a+NF-κB抑制剂组,分别用2mM AKF-P D预处理HK-2细胞24小时,10μM NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082处理HK-2细胞1小时后,加入10ng/ml TNF-α继续培养60分钟,提细胞蛋白,用WesternBlot方法检测AKF-PD对细胞内p-IκBα表达的影响。 将细胞分为空白对照组,TNF-α刺激组,TNF-α+AKF-PD组,用2mM AKF-PD预处理HK-2细胞24小时后,加入10ng/ml TNF-α继续培养60分钟,提取细胞核蛋白,用Western Blot方法检测AKF-PD对细胞核内P65表达的影响。 将细胞分为空白对照组,TNF-α刺激组,TNF-α+AKF-PD组,TNF-α+DEX组,分别用2mM AKF-PD、1μM DEX预处理HK-2细胞24小时后,加入TNF-α (lOng/ml)继续培养60分钟,采用双荧光素酶报告分析系统检测AKF-PD对TNF-α刺激的HK-2细胞NF-κB报告基因转录活性的影响。 结果：TNF-α刺激HK-2细胞24小时后,细胞上清中IL-6、IL-8及MCP-1的分泌量明显高于正常组(p<0.05)；TNF-α刺激HK-2细胞15分钟后,p-p38的表达显著上升,AKF-PD和p-p38特异性抑制剂SB203580均能有效降低p38的磷酸化(p<0.

99μmol·L-1(95%CI 3.55~13.79μmol·L-1),7.25μmol·L-1(95%CI

4.77~1.02μmol·L-1)。两药联合应用对肺癌细胞的抑制作用增强(P<0.05),同时给药组抑制效果更显著(P<0.05),阻滞细胞于G1期。结论:蛋白激酶C抑制药enzastaurin与EGFR抑制药吉非替尼联用具有较好的协同作用,两药联合应用可能是出现吉非替尼耐药的非小细胞肺癌后续治疗的一个新选择。
肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率呈逐年上升趋势,在全世界癌症死亡中占第一位[1]。按照临床和组织病理学特征,肺癌分为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancers,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancers,SCLC);其中,NSCLC约占80%,SCLC约占20%[2]。目前,NSCLC的治疗仍以化疗为主,常用的化疗药物为含
腺癌已成为最常见的肺癌类型,肺腺癌无论在临床、影像、分子生物学及病理学方面都存在明显的异质性,过去的肺腺癌分类已无法适应目前的发展,迫切需要一种新的分类标准。2011年国际肺癌研究学会(IASLC)、美国胸科学会(ATS)、欧洲呼吸学会(ERS)联合多学科,结合近年肺腺癌各方面的最新进展,对肺腺癌做出了新的分类。新分类取消了细支气管肺泡癌(BAC)这一分类,新增了4个命名:原位腺癌(AIS)、微浸润腺癌(MIA)、鳞屑样生长为主的浸润性腺癌和浸润性黏液型腺癌。肺腺癌新分类凸现出组织学亚型与分子和临床特征的一些新的相关性,为临床诊疗及科学研究提出了新模式、新方向和新目标。
临床研究中的富集设计可以提高效率,节省临床试验的研发时间和资金投入,也会给受试者带来更多的益处。本文从药物研发和评价的角度,对目前国际倡导的临床试验富集设计进行阐述。同时对在中国现有的法规环境下,新药研发中应如何合理地运用富集设计进行了探讨,以期为相关研发人员提供参考。
目的观察国内儿童散发性神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)中间变性淋巴瘤激酶(anaplastic 时间 lymphoma kinase,ALK)的表达,探讨其在NB发生、发展中的作用。方法应用荧光原位杂交法(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测56例ALK蛋白异常表达的NB中ALK基因的表达。结果 FISH检测显示56例NB中ALK基因46例为正常,10例为异常,其中9例为ALK增多(16%),1例为扩增(1.8%)。结论 ALK基因是NB一个主要的易感基因,国内儿童ALK基因异常的发生率与国外文献报道相近,其有可能成为治疗NB的主要靶点之一。
基因组的改变会导致癌症的发生,这一切是通过癌症基因活化与继后细胞程序或信号转导通路的功能性改变所形成的。随着科技的不断发展,我们不仅仅能够对单一癌症基因序列的改变进行研究,还能够对一系列癌症基因或整个人类癌症基因组序列的改变进行探索。新型基因组改变的发现,提升了我们对癌病变的认知与了解,同时这一发现对人类癌症的诊断、分类与治疗有着一定的变革性作用。这篇综述对人类基因组的结构、人类基因组的检验方法、人类癌症基因组的变化、以及人类癌症基因组学的临床应用做了相应的介绍。
本文介绍了化疗及靶向治疗对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的不同疗效,靶向治疗的选择及化疗的选择。提出了多靶点联合、靶向与化疗联合及维持治疗等近年的热点问题,指出了病人可选择的不同的治疗方案。
肺癌在癌症相关死亡中是居于首位的恶性肿瘤。鳞癌是仅次于腺癌的非小细胞肺癌(non-small

通常 cell lung cancer,NSCLC)最常见的组织学类型。一些负责恶性肿瘤的发生和维持相关分子改变被称为驱动基因。近来研究证实肺鳞癌也具有与致癌作用及靶向药物疗效有关的独特分子特征。目前发现约40%肺鳞癌已经找到驱动基因,其中纤维母细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)起重要作用。本文将对肺鳞癌驱动基因进行综述。
肺癌是目前恶性肿瘤死亡的首要原因,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占肺癌病例的80%。近年来,对癌基因机制认识上的重大进展促进了以阻断异常信号通路和代谢过程为特征的分子靶向治疗的迅速发展,如以表皮生长因子受体(EGFR)和间变性淋巴瘤激酶(ALK)抑制剂为代表的分子靶向药物揭开了NSCLC治疗的新篇章。但由于患者耐药性的产生,寻找新的治疗靶点成为抗肿瘤药物研究的焦点。近期研究显示,众多癌基因的突变、扩增和重排与NSCLC的发生和预后相关。本文重点介绍NSCLC中多种癌基因改变,如HER2突变、BRAF突变、PIK3CA突变、FGFR1扩增、DDR2突变和ROS1重排,以及针对这些靶点抑制剂的研究进展,以期为NSCLC研究和治疗提供新的思路。
随着人类寿命的延长,恶性肿瘤已经成为人类痛苦和死亡的重要原因。预计在2020年,全球新发病例将达1500万(我国占1/5),死亡1000万(我国占1/4),现患病例3000万[1]。迅速增长的癌症病例已经成为世界各国健康医疗系统不堪承受之重。近10年来,伴随着药学和生命科学研究的飞速进展,恶性肿瘤细胞内的信号转导、细胞凋亡的诱导、血管生成以及细胞与胞外基质的相互作用等各种基本过程正渐被阐明。以一些与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号转导通路的关键酶(蛋白酪氨酸激酶、芳香化酶、拓朴异构酶Ⅰ等)
目的探讨肺癌化疗患者发生医院感染的病原学特点并对其耐药性进行分析,为临床诊断提供依据。方法对2010年7月-2013年7月肿瘤内科采取化疗治疗合并医院感染的肺癌患者140例临床资料进行回顾性分析,并对患者进行病原菌检测以及药敏试验采用纸片法扩散法进行统计,分析患者发生感染部位分布、感染病原菌种类及其构成比、不同病原菌对常用抗菌药物耐药性;采用SPSS18.0软件进行数据统计分析。结果医院共收治肺癌化疗患者2 ISRIB化学结构 071例,其中195例患者发生医院感染,感染率为9.

05)；MDC染色显示随rhG-CSF给药浓度增加,巨自噬空泡数量逐渐上调,呈剂量依赖性,显示随给药浓度增加,自噬活性也相应增强,差异具有统计学意义(p<0.05)；rhG-CSF组大鼠神经功能学评分较模型组有降低,差异有统计学意义(p<0.05)；治疗后较治疗前比较,大鼠的神经功能学评分有降低,差异有统计学意义(p
当今世界，核能在工业、国防、科技、医疗等领域的普及应用，它在造福人类的同时，也不可避免的给世界带来严重的核辐射危险，不仅对环境造成污染，更重要的是给人类的健康安全带来了严峻的挑战。我国核能技术飞速发展，不仅拥有核武器、核潜艇等国防力量，而且拥有大量的核电站。2011年日本福岛核电站因里氏9.0级地震而泄露在对日本造成巨大危害的同时也给我国带来了核恐慌。现代生物学技术不断前进，放射治疗是目前临床恶性肿瘤治疗的常用方法之一。但越来越多临床证据表明：电离辐射在杀伤肿瘤细胞的同时，不可避免的会造成对正常组织的损伤。尽管现代放疗技术和方法都有很大发展，这一副作用仍严重影响放疗在临床上的应用。

GDC-0941临床试验 放射性肺纤维化是胸部肿瘤患者放射治疗中常见的并发症，也是核与辐射突发事件中受大剂量照射伤员常见的病理损伤，是导致肿瘤病人放疗失败和急性放射病伤员病程后期的主要死因之一。国内外对放射性肺纤维化虽然进行了多年的研究，但辐射导致肺纤维化发生的机制尚不十分清楚，由于机制不清至今在临床上还未找到防治放射性肺纤维化良好的医学处置方法。因此，针对放射性肺纤维化发生过程中的某个关键环节作为靶点，以探讨电离辐射(ionizing radiation, IR)与肺纤维化的关系及其机制，为防治肺纤维化的研究提供新的思路和方案。 BYL719 花费 肺纤维化以肺泡上皮细胞受损以及成纤维细胞/肌成纤维细胞聚集为特征，并有胶原及其他细胞外基质沉积，最终影响正常肺组织修复过程及细胞外基质异常沉积而导致纤维化发生。由于肌成纤维细胞在这一病理过程中起重要作用，所以它的起源是肺纤维化研究的热点和关键点。研究表明，在损伤因素刺激下，上皮细胞可逐渐失去上皮特性并获得成纤维细胞等间质细胞特性，即发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）。在特发性肺纤维化的动物模型以及病人标本中，都发现EMT的存在。在某些因子参与和诱导下，与EMT相关性及特异性转录因子被活化，特异性细胞膜蛋白表达增强，细胞骨架蛋白发生重构，细胞外基质降解酶发生改变以及特异性微小RNA的变化等等细胞内分子水平的变化都可引发并维持EMT。电离辐射是诱导EMT的重要因素之一。已有研究显示microRNA-200c可以抑制EMT，而TBK1是miR-200c直接靶点。因此，探讨TBK1与IR,

EMT发生的相关性，以及TBK1作用的机制，将为明确放射性肺纤维化发生提供重要的实验依据。 本研究选取肺泡上皮细胞作为实验对象，通过EMT标志物等指标研究IR对EMT的影响，并围绕TBK1表达水平的变化，对TBK1进行干扰，进一步明确TBK1及其下游信号通路在IR诱导EMT中的作用。 研究内容： 1、辐射对肺泡上皮细胞上皮间质转化的影响：采用人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)和大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN)为研究对象，给予不同照射剂量，选取不同照射时间，观察在此条件下EMT标志物变化情况，建立辐射诱导EMT细胞模型； 2、干扰TBK1对辐射诱导肺泡上皮细胞上皮间质转化的影响：①脂质体转染siTBK1，明确干扰效果；②干扰TBK1后选择适当剂量及时间照射，观察EMT变化； 3、TBK1对辐射诱导肺泡上皮细胞上皮间质转化的作用机制探讨：①干扰TBK1，观察辐射诱导EMT细胞模型中EMT相关转录因子的变化；②TBK1作用可能相关信号通路探讨。

实验方法： 1、采用人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)和大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN)，对其进行2、4、6、8、10Gy60Co ABT-263体外 γ射线照射，通过Western Blot (WB)实验技术，检测EMT标志物，建立辐射诱导EMT细胞模型； 2、通过WB检测辐射对细胞TBK1表达水平的影响； 3、利用lipo2000脂质体转染法干扰细胞中TBK1的表达，用WB及Real-time-PCR检测转染效果； 4、干扰TBK1，通过WB，免疫荧光实验检测EMT标记物变化，评价TBK1对IR诱导EMT影响； 5、干扰TBK1，采用Real-time PCR和WB检测EMT相关转录因子的变化；以及过表达转录因子ZEB1对TBK1调节IR诱导EMT的效应； 6、干扰TBK1，采用Real-time PCR检测照射后细胞TGF-β表达变化；通过WB实验，观察TGF-β/Smad3通路是否参与TBK1的调节； 7、干扰TBK1，采用WB检测照射后细胞NF-κB通路表达变化，观察其是否参与TBK1的调节； 8、干扰TBK1，采用WB检测照射后细胞GSK-3β的表达变化，通过给予GSK-3β特异性抑制剂SB216763，观察GSK-3β在TBK1调节IR诱导EMT中的作用；联合过表达转录因子ZEB1，探讨TBK1和GSK-3β的关系。 9、统计方法：采用t检验；方差分析等， P＜0.

cnki.net/)及Pubmed数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)。中文检索词为”中药,骨髓间充质干细胞,成骨分化”。英文检索词为”chinese herb,mesenchymalstem cells,osteogenic differentiation”。文献检索语种限定为中文和英文,纳入中药单体、单味中药、中药复方等及其含药血清在体内或体外对人或动物骨髓间充质干细胞成骨分化作用的研究文献,排除重复研究。结果与结论:共纳入32篇文献,有关骨髓间充质干细胞研究背景的文献2篇;有关单味中药的文献5篇,其中补肾药4篇,补气药1篇;有关中药复方的文献10篇,其中补肾方6篇,补肾活血方4篇;有关中药有效组分的文献15篇。补肾、补气及活血类中药可以诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,但以补肾类中药为主,在一定程度上阐释了”肾主骨”理论的科学内涵,并为体外大量扩增骨髓间充质干细胞、促成骨分化及组织工程骨提供了更多的种子细胞来源。
背景:应力缺失是导致运动不足人员骨质疏松发生的主要原因。通络生骨胶囊具有促进骨生成的作用,其对应力缺失模型大鼠p38通路的影响未见报道。目的:观察应力缺失性骨质疏松大鼠p38的变化,以及通络生骨胶囊对其改善作用。方法:将SD大鼠随机分为4组,除正常组外以鼠尾悬吊法制备动物应力缺失模型,药物低、高剂量组从造模次日起每日灌胃给予0.6,1.2g/kg的通络生骨胶囊。造模21d,取腿骨,进行形态学观察;分离成骨细胞,Western

selleck化学 blot法测定p38蛋白含量。结果与结论:与正常组比较,模型组成骨细胞显著减少,骨小梁面积及其百分比、骨小梁厚度等显著降低,p38表达总量显著升高,但磷酸化p38与对照组无差异。高剂量的通络生骨胶囊可显著增加应力缺失大鼠成骨细胞个数,增大其骨小梁面积,促进磷酸化p38的表达;而低剂量的通络生骨胶囊则降低了磷酸化p38的表达。说明应力缺失可导致大鼠骨质疏松,高剂量的通络生骨胶囊可通过增强p38磷酸化水平预防应力缺失导致的骨质疏松。
目的为了增强顺铂对鼻咽癌细胞(CNE2)的细胞毒作用,为临床化疗提供理论依据。方法通过W estern-B lot检测辛夷对CNE2细胞内p38活性的影响,利用MTT检测辛夷对CNE2细胞生长的影响及辛夷对顺铂的细胞毒作用的影响。结果 W estern-B lot结果显示辛夷能够激活CNE2内p38,随辛夷浓度的增强,p38的磷酸化水平逐渐增高;MTT结果显示辛夷可以抑制CNE2细胞的生长,并且增强顺铂的细胞毒作用。结论辛夷能够激活CNE2细胞内p38,从而增强顺铂的细胞毒作用,为逆转顺铂耐药提供了新的方案。
目的:研究薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,以不同剂量的薯蓣皂苷进行干预。实验分为5组:空白对照组、缺氧/复氧组、薯蓣皂苷低、中、高剂量(10,20,40μmol/ml)干预组。MTT法检测心肌细胞存活率;TUNEL法检测心肌细胞凋亡百分率;Fluo-3负载激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内[Ca2+]i的变化;硝酸还原酶法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度。结果:与缺氧/复氧组比较,薯蓣皂苷各剂量干预组心肌细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低,心肌细胞[Ca2+]i荧光强度明显减弱,心肌细胞培养液中NO浓度降低。结论:薯蓣皂苷能有效抑制缺氧/复氧导致的乳鼠心肌细胞的凋亡,其可能与减轻细胞内钙超载,抑制受损心肌细胞NO升高,减轻过量NO的细胞毒性作用有关。
目的:观察反式白藜芦醇对自发性高血压大鼠心肌肥大及丝裂原活化蛋白激酶表达的影响。方法:21只SHR大鼠随机分为模型组、白藜芦醇高(45mg/kg)、低(15mg/kg)剂量组,另7只同龄WKY大鼠作为正常对照组。30天实验后,分别采用尾套法、称重与彩色多普勒超声法、定量PCR法检测各组大鼠血压、左心室肥大指标、以及心肌组织JNK

通常 Sorafenib mRNA和p38MAPK mRNA的表达。结果:反式白藜芦醇(45mg/kg)能显著降低SHR血压、左心室PWT、IVST及心肌肥厚指数,减少心肌组织中JNK、p38MAPKmRNA表达。结论:反式白藜芦醇能有效防治SHR大鼠心肌肥大,其作用与调控p38MAPK和JNK信号转导相关。
敏感性侵袭病原体侵入机体,生殖系编码模式识别受体识别病原体,由此启动先天免疫系统。Toll样受体家族(toll-like receptors,TLR)是在免疫系统特异性识别微生物病原体抗原中发挥重要调控作用的受体家族。TLR表达于许多的免疫和非免疫细胞,参与多种细胞迁移,与细胞的迁移性运动密切相关。活化TLR诱导产生一系列的炎症介质包括细胞因子、趋化因子等从而产生强有力的生物学效应。TLR最突出的生物学功能一方面促进细胞因子或趋化因子的合成与释放,引发炎症反应或细胞效应,另一方面是促进抗原递呈细胞的成熟,从而诱导机体的获得性免疫反应,因而是机体介导天然免疫转向获得性免疫的桥梁。
7.1Cardiac arrhythmias 2011055 Effects of combined amiodarone andantiarrhythmic peptide use on the cardiac gapjunctions and incidence of induced ventriculararrhythmias in healed myocardial infarction rabbitmodels.

05%透明质酸酶和0.2%Ⅱ型胶原酶)获得分散的大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC),常规接种,单层培养。对原代～第5代RGC进行生长动力学分析,并通过免疫细胞化学、阿尔新兰染色和Western blot检测原代～第5代RGC中Ⅱ型胶原、α-SMA和蛋白多糖的分布和表达。 结果:原代培养的生长板软骨细胞中95%以上的细胞Ⅱ型胶原阳性染色,细胞核周围和细胞膜周边都有Ⅱ型胶原的阳性染色,阳性染色的纤维包裹着细胞核,保持圆形的细胞强阳性染色。随着传代次数的增加,表达Ⅱ型胶原的细胞比例和表达量下降,第6代RGC中仅保持圆形的细胞仍呈阳性染色。原代培养的RGC表达大量的蛋白多糖,阿尔新兰阳性染色。第2,3代阿尔新兰染色减少,3代后阿尔新兰染色皆呈阴性。原代RGC中,α-SMA的表达很弱,随传代次数增加,α-SMA的表达量逐渐增高;Ⅱ型胶原的表达刚好和α-SMA相反,原代RGC表达最强,随着传代次数的增加,表达逐渐下降。

更多 结论:成功建立大鼠肋生长板软骨细胞的体外培养模型。单层培养的RGC在第4代后逐渐失去分化表型,α-SMA可以作为RGC去分化的一个新的标志物。
血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)是机体一类重要的细胞群体,在血管通透性屏障、免疫防御及炎症反应中起着极其重要的作用[1,2]。能够合成并分泌多种活性因子,其中IL-6、ICAM-1 较有代表性,而IL-6 则被认为是内皮炎症反应的最佳标志分子[2]。越来越多的研究表明,内皮细胞作为LPS 作用的靶细胞,在LPS 引起的脓毒症、脓毒性休克、多器官功能衰竭等病理过程中起着关键的作用,目前认为血管内皮功能障碍及凋亡不仅是心脑血管疾病发生的共同环节,而且是败血症、休克、创伤等应激情况下发生MODS 和ARDS 的重要原因。在ARDS

发生过程中,血管内皮细胞既是靶细胞也是效应细胞,它的损伤与激活是机体发生失控性炎症反应及高通透性肺水肿的根本环节[1]。糖皮质激素(glucocorticoid,GC)对ARDS 的抗炎作用必然会以血管内皮细胞作为一个主要靶点,但长期以来有关糖皮质激素治疗ARDS 的研究多以临床观察为主,而一些涉及到血管内皮的基础研究则主要探讨白细胞与血管内皮的粘附及对内皮的损伤,而涉及到糖皮质激素作用机制的研究则主要在受体水平进行。有关糖皮质激素治疗ARDS 时对血管内皮保护的机制,特别是受体前调节机制的研究目前尚未见报道。 本实验以内毒素脂多糖LPS(lipopolysaccharide,LPS)致伤体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC) , 然后观察糖皮质激素(Dexamethasone,Dex)对HUVEC JAK2 inhibitor drug 受伤前后不同时点表达IL-6、ICAM-1 等细胞因子的影响,及HUVEC 发生凋亡的情况,以确定其对血管内皮的炎性损伤是否具有保护作用。然后用RT-PCR 等方法观察人脐静脉内皮细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、盐皮质激素受体(mineralocorticoid receptor,MR)及糖皮质激素受体前调节的关键酶11β-羟基类固醇脱氢酶(11-βhydroxysteroid dehydrogenase, 11β-HSD)基因的表达变化,并观察11β-HSD 的经典抑制剂甘草次酸(glycyrrhizic acid,GA)在其中的作用。力图阐明糖皮质激素保护血管内皮炎性损伤的受体前调节机制,探讨其在ARDS

MS-275核磁共振 治疗中的意义。 主要研究结果和结论如下: 一、不同浓度LPS 刺激人脐静脉内皮细胞,在刺激3h 开始时即可使HUVEC
目的 观察角膜创伤愈合过程中,角膜上皮愈合情况及角膜纤维细胞活化增生情况;结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)及转化生长因子-β_1(Transforming Growth Factor-β_1,TGF-β_1)、Ⅰ型胶原和纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)的表达,TGF、CTGF对角膜创伤愈合的作用,并对二者之间的相互作用及与此有关的Smad信号传导通路做初步的研究。 方法 随即选择Albino纯种白兔35只,空白对照组:2兔4眼。单纯角膜创伤组:又分术后2小时、6小时、1天、3天、7天、14天、21天组,每组随即4眼。TGF抗体组:颞侧球结膜下注射15.5μgTGF抗体(经预实验选择得到的浓度)又分为3天、7天、14天、21天组,每组随即4眼。Smad_4抗体组:颞侧球结膜下注射20μgSmad4抗体;又分为3天、7天、14天、21天组,每组随即4眼。实验眼首先施一直径3毫米,包含0.05mm实质层的板层角膜切除术,TGF抗体组及Smad_4抗体组术眼球结膜下注射TGF-β_1抗体或smad4抗体。用免疫组化及mRNA原位杂交方法分别检测CTGF、TGF-β_1、FN蛋白术后2小时、6小时、1天、3天、7天、14天、21天的表达及Ⅰ型胶原、CTGFmRNA在术后6h、3天、7天、21天的表达;角膜上皮愈合情况及角膜纤维细胞活化增生情况。免疫组化所检蛋白、mRNA原位杂交所检mRNA表达强度用组织学评分∑pi表示,其中p代表阳性细胞数所占计数细胞百分比,I代表细胞染色强度。P和I均划分为0、1、2、3分。∑pi为阳性细胞数量和着色强度两项得分相加所得结果。每个角膜选3个切片进行免疫组化或原位杂交染色,每张切片随机选取3个视野(×400),共9个视野,分析结果进行
研究背景 血液流动对血管产生力的作用,这对于心血管系统稳态的维持有着重要的意义,这些力分为沿血流方向与血管平行的剪切力,垂直于血管壁的压应力和沿血管壁周向的拉应力。此外,它们也在心血管疾病,如动脉粥样硬化等的发生、发展过程中扮演着重要的角色。剪切力,作为血流动力的水平分量,不仅会影响内皮细胞的形态、迁移、分化和增殖,而且还通过调节内皮细胞不同基因的表达,在心血管系统的病理和生理过程中起重要作用。在内皮细胞,已发现多种受剪切力调节的基因,根据它们的生物学特性,大致可以分为血管活性物质、生长因子、粘附分子、趋化因子、凝血因子和原癌基因等。我们前期工作表明层流状态的低剪切力(4.

5厘米大小时)进行实验。挑选35只肿瘤负荷较相近小鼠随机分为空白对照组、常山酮组、放射治疗组、放射治疗联合常山酮组,放射治疗联合TGF-β抑制剂组,每组7只。对照组不做处理;常山酮组于接种后第6天至第15天予常山酮腹腔给药,每只鼠2ug/0.1ml/d;放射治疗组于接种后第8天、9天给予移植瘤6MV-X线照射,放射治疗剂量为10Gy×2;放射治疗联合常山酮组给药处理同常山酮组,放射治疗的时间及剂量同放射治疗组;放射治疗联合抑制剂组于接种后第6天至第15天予TGF-β抑制剂(SB431542终浓度1u M)腹腔给药,每只小鼠0.1ml/d,放射治疗处理同放射治疗组。自治疗开始每隔l天用游标卡尺测量瘤径。接种后第15天(照射结束后第6天)各组随机处死3只小鼠,取脾脏制备单细胞悬液后行FACS检测脾脏淋巴细胞中CD4+CD25+Fox P3+调节性T细胞Treg细胞含量;剥离小鼠肿瘤组织,一部分制备单细胞悬液行FACS检测肿瘤组织浸润淋巴细胞中Treg细胞含量,剩余部分福尔马林固定及冻存并通过免疫组织化学、Elisa、Western

Blot等技术研究不同处理组移植瘤TGF-β信号传导通路的变化;剩余小鼠观察移植瘤生长抑制情况,并计算生存期。结果:流式结果显示:空白对照组、常山酮组肿瘤浸润淋巴细胞中Treg含量无明显差异(P=0.989),放射治疗组肿瘤浸润淋巴细胞中Treg含量较对照组明显升高(P<0.001),联合应用常山酮或TGF-β抑制剂组肿瘤组织浸润淋巴细胞中Treg含量较放射治疗组明显下降(P值均0.05),放射治疗结束后第5天,放射治疗组、放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合TGF-β抑制剂组移植瘤体积开始小于对照组(P值分别为0.008、0.023、0.007),放射治疗组、放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合TGF-β抑制剂组肿瘤体积无统计学差异(P值均>0.5),放射治疗结束后第9天,放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合TGF-β抑制剂组肿瘤体积开始小于放射治疗组(P值分别为0.049、0.025),治疗后各时间点放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合TGF-β抑制剂组肿瘤体积均无明显差异(P值均>0.05)。空白对照组及常山酮组小鼠生存期无统计学差异(P=0.784),OS分别为28天和34天,放射治疗组、放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合TGF-β抑制剂组生存期均显著长于空白对照组(P值均<0.05)。结论:常山酮可以改善电离辐射所致的肿瘤免疫抑制状态并增强放射治疗疗效,其可能作用机制是通过抑制肿瘤细胞内TGF-β信号传导通路来实现的。
目的：研究烟草提取物(CSE)对体外培养的大鼠II型肺泡上皮细胞的影响并探究其中的潜在机制。方法：1.体外培养大鼠肺泡上皮RLE-6TN细胞株24

BYL719 PLX3397化学结构 h后,分别加入0.5%,1.0%和2.0%CSE共培养48 h, Hoechst染色法检测烟草提取物对细胞核变化的影响；流式细胞术检测细胞早期凋亡率；蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测转化生长因子(Transforming Growth Factor-betal,TGF-β1), smad2的表达量和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3裂解片段(Cleaved caspase-3)的活性。2.TGF-β1受体抑制剂(SB431542) 500 nmol·L-1作用RLE-6TN细胞株24h后,加入2.0%CSE共培养48 h。Western blot分别检测Smad2和Cleaved caspase-3的活性。 结果：1.经不同浓度的CSE(0.5%,1.0%,2.0%)作用RLE-6TN细胞48 h后,经Hoechst染色后,各CSE处理组均可见部分凋亡细胞,胞核发白、固缩、染色质边集等现象,对照组细胞核呈现均匀的淡蓝色荧光。随机视野内凋亡细胞百分数分别为：对照组(3.671±1.04)%,0.5%CSE处理组(16.606±6.645)%,1.0%CSE处理组(18.626±3.596)%以及2.0%CSE处理组(31.035±4.373)%,各CSE处理组凋亡细胞百分数较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。2.流式细胞术发现细胞早期凋亡率分别为：对照组(5.270±0.526)%,0.5%CSE处理组(22.563±1.048)%,1.0%CSE处理组(27.467±0.735)%以及2.0%CSE处理组(32.580±0.413)%,各CSE处理组细胞早期凋亡率与对照组比较,差异有统计学意义(PSmad2、磷酸化smad2

也许 (p-Smad2)蛋白表达量与Cleaved caspase-3活性较对照组明显增加,差异有统计学意义(P
目的：观察香烟烟雾提取物(Cigarette smoke extract, CSE)是否导致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Rat alveolar Type Ⅱ epithelial cell, RLE-6TN)细胞周期的改变以及在这其中转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)是否有发挥作用。方法：选用健康清洁级SD雄性大鼠8只(重量：180～220g),完全随机平均分配为对照组、烟熏组,每组4只,给予烟熏组大鼠暴露于香烟烟雾中每天6小时连续3天,于第4天处死动物后取肺组织,进行石蜡包埋切片后,HE染色观察结构改变,免疫组化法测定CyclinD1的表达情况。体外培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,除对照组外,其余各组分别予0.25%、0.5%、1%浓度的CSE刺激48 h。TGF-β1受体抑制剂(SB431542)预处理细胞6 h,实验设计为对照组、1%CSE组、SB431542组、1%CSE+SB431542组,CSE刺激48 h。各组细胞于37℃、5% CO2培养箱中培养48 h后收集细胞,分别采用流式细胞仪检测细胞周期,ELISA、Western blot法测定TGF-β1、CyclinD1蛋白的表达情况。结果：烟熏组大鼠肺组织发生形态学及病理学的改变,TGF-β1表达增加、CyclinD1表达抑制(与对照组比较)。CSE暴露干预细胞后,G1期细胞的比例呈浓度依赖性与时间依赖性的增高,同时TGF-β1表达增加、CyclinD1表达抑制(与空白对照组比较P<0.

005);此外,p-AKT的阳性和肿瘤侵润深度不同的食管癌患者之间比较,有统计学上显著差异性(p = 0.008),并且p-AKT的阳性表达与预后差密切相关(p 那个 = 0.001)。 结论:ESCC中Shh、Gli1阳性表达与淋巴结转移相关,而p-AKT阳性表达则与肿瘤侵润深度相关,Shh、Gli1和p-AKT的阳性表达均与较差的预后相联系。在ESCC治疗策略上联合抑制Shh和PI3K/AKT通路可能更加有效。
研究背景 前列腺癌在美国是男性最常见恶性肿瘤之一,肿瘤死亡率位居第二。近年来,我国前列腺癌的检出率已呈明显上升趋势。目前,晚期雄激素非依赖型前列腺癌(AIPC)的治疗仍是一个难题,尚无理想的治疗方法。因此,研究和探索新的治疗策略,具有十分重要的临床意义。 研究表明,Hedgehog(Hh)信号通路的激活与前列腺癌密切相关。人前列腺癌组织表达Hh配体及其下游靶基因Gli。Hh信号通路抑制剂cyclopamine(环杷明)能抑制前列腺癌肿瘤细胞增殖、改变其侵袭能力、抑制移植肿瘤的生长并引起消退。但cyclopamine因含量少,合成困难,副作用大,限制了其临床应用。最近研究发现维生素D也是一种Hh信号通路抑制剂,以很高的亲和力结合Smo,抑制Gli活性,且作用强于cyclopamine。

前列腺癌的多药耐药(MDR)是导致其化疗失败的主要原因,肿瘤细胞MDR的发生与细胞膜上过量表达的ABC转运蛋白有关,包括P-型糖蛋白(PGP)、多药耐药蛋白(MRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)等,它们可以将化疗药物泵出细胞外从而导致肿瘤细胞产生耐药性。研究表明,Hh通路抑制剂是一种有效的ABC转运蛋白抑制剂,特别是对PGP、BCRP具有很强的抑制作用。 然而,维生素D可引起高血钙的副作用影响了其在抗肿瘤领域的临床应用。EB1089是一种维生素D类似物,具有更强的调节肿瘤细胞生长、分化的作用,而对血钙的影响较小。本研究旨在探讨EB1089是否作为一种Hh通路抑制剂,通过Hh信号通路途径抑制雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞生长,逆转其MDR。 方法与结果 首先采用MTT法和流式细胞技术检测EB1089对DU145细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,并与cyclopamine作比较,同时在光镜和电镜下观察细胞形态学和超微结构变化。结果显示,EB1089可以抑制DU145细胞的增殖,差异有统计学意义,呈时间和剂量依赖关系,且抑制作用强于cyclopamine。1、10、50、100nmol/L

已经 EB1089作用DU145细胞48h后,G0/G1期细胞逐渐增多,而S期细胞逐渐减少,细胞凋亡率逐步增高。EB1089作用后,镜下可见DU145细胞典型的凋亡形态学改变：细胞体积缩小,细胞核固缩、裂解,核碎片及凋亡小体形成。 其次,分别用1、10、50、100nmol/L浓度的EB1089作用DU145细胞48h后,采用Real time-PCR和Western blot方法分别检测DU145细胞Glil、cyclinD1、BCL-2、Bax mRNA和蛋白的表达变化。结果显示,EB1089作用48h后,DU145细胞Glil、cyclinD1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达均下降,Bax mRNA和蛋白表达均上调,并呈剂量依赖关系。 最后,MTT法检测EB1089和多西紫杉醇二者合用对DU145细胞增殖的作用,以及EB1089对耐多西紫杉醇DU145细胞(DU145-DR)化学敏感性的影响；并采用Real time-PCR和Western blot方法分别检测EB1089作用后DU145-DR细胞PGP/MDR1、MRP、BCRP mRNA和蛋白的表达变化,结果显示,两药联合对DU145细胞增殖的抑制作用显著高于两药单独作用；DU145-DR细胞经EB1089作用后对多西紫杉醇的敏感性增加,逆转倍数为2.87,相对逆转效率为70.8%；EB1089作用后,DU145-DR细胞PGP/MDR1、BCRP的表达水平显著下调。 结论 EB1089可以抑制DU145细胞增殖,抑制作用于强于cyclopamine,EB1089可以阻滞DU145细胞于G1期,诱导DU145细胞凋亡,其作用机制可能是作为一种有效的Hh信号通路抑制剂,通过抑制Hh信号通路,下调Glil,进而调节cyclinD1、Bcl-2和Bax的表达来完成。EB selleck激酶抑制剂 1089可以提高耐多西紫杉醇DU145细胞的化学敏感性,有效逆转其耐药性,其逆转机制可能主要通过下调PGP/MDR1、BCRP的表达来实现,EB1089与多西紫杉醇合用抑制DU145细胞增殖呈协同效应。
目的合成vismodegib(GDC-0449)。方法以2-氯-5-硝基苯胺、2-氨基吡啶和2-氯-4-甲磺酰基苯甲酸为起始原料,通过重氮化反应、硝基还原反应、吡啶-苯环碳-碳negishi偶联反应以及酰胺化反应得到目标产物。结果合成了vismodegib并经核磁共振氢谱和质谱确证结构;偶联反应收率61.5%,高于文献报道收率(60%)。结论本文优化了vismodegib的合成路线,同时改进了反应条件、简化了后处理,收率较高。
据《2012年中国肿瘤登记年报》数据显示,我国肺癌发病率70.4/10万,死亡率45.57/10万,占恶性肿瘤发病率和死亡率的首位,且有逐年上升趋势。小细胞肺癌虽占肺癌15%~20%,但由于肺癌患者基数大,小细胞肺癌(SCLC)患者人群也相当庞大,发病率11~14/10万,相当于我国食管癌的年总发病率,严重危害我国人民的健康。近十年,伴随靶向药物的临床应用,晚期非小细胞肺癌
目的表皮生长因子受体(Epithelial

growth factor receptor,EGFR)是酪氨酸激酶EGFR家族的一员,它可以促进细胞的增殖与分化等。在多种实体肿瘤如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌、头颈部肿瘤、肾癌中存在EGFR基因的扩增或EGFR的高表达。靶向EGFR的小分子抑制剂目前在临床上应用广泛,但肿瘤耐药是其临床应用的主要障碍。Sonic hedgehog(SHH)信号通路主要调节了胚胎时期的细胞增殖、分化、组织发育及器官形成,其信号通路成员的突变或过表达往往会导致SHH信号通路的异常激活,从而导致肿瘤的发生及发展。本研究旨在对Sonic hedgehog信号通路…
h、Gli1、p-AKT和p-ERK的表达与临床病理特征及预后之间的关系。 方法:采用电话或信函随访的方式,了解食管癌患者术后生存的情况,使用统计学方法研究Shh、Gli1、p-AKT和p-ERK免疫组化表达在食管鳞癌中的分布特征,并和食管鳞癌临床特征诸如患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置、淋巴结转移、肿瘤侵润深度、癌分化程度、肿瘤TNM分期及术后生存期对比分析。 结果:Shh阳性表达在淋巴结转移阴性和淋巴结转移阳性的食管癌患者之间比较,有统计学上显著差异性(p = 0.027),且Shh的阳性表达与预后差密切相关(p = 0.017);Gli1阳性表达在淋巴结转移阴性和淋巴结转移阳性的食管癌患者之间比较,有统计学上显著差异性(p = 0.

吗啡通过阿片受体途径诱导小胶质细胞细胞因子表达RT-PCR的方法检测了小胶质细胞经吗啡(10μM)处理后TNFαIL-1β和IL-6 mRNA的表达,发现小胶质细胞中上述三种细胞因子表达明显增加,较未处理组有显著差异。纳洛酮可阻断吗啡的作用。 Androgen Receptor Antagonist小白鼠 结论 1.吗啡通过阿片受体途径激活并诱导小胶质细胞细胞因子的表达。 2.吗啡通过阿片受体途径诱导小胶质细胞凋亡,caspase-3途径介导了吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。 第二部分GSK3β信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用研究 目的 使用体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系探讨GSK3β信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用及其具体机制。

方法 1.体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系并进行吗啡处理 体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞分别分组如下：1.正常对照组、吗啡组(2,5,10,20 u M)；2.正常对照组、吗啡组(6h,12h,24h) 3.正常对照组、吗啡组(10μM)、纳洛酮组(10μM)、吗啡+纳洛酮组(纳洛酮提前吗啡1h加入使之预先与阿片类受体结合)；4.正常对照组、吗啡组、SB216763组(10μM)、吗啡+SB216763组(SB216763提前1h加入)。置细胞培养箱孵育。 2. Western Blotting 使用Western Blot方法检测小胶质细胞phosphor-Akt、phosphor-GSK3β、cleaved caspase-3、cleaved caspase-8、phosphor-p38、Bax、Bcl-2等蛋白水平变化。 3.细胞凋亡的检测 使用TUNEL染色法检测小胶质细胞凋亡。 4. RT-PCR 使用RT-PCR检测小胶质细胞Bax和Bcl-2 mRNA水平变化。 结果 1.吗啡通过阿片受体途径使小胶质细胞phosphor-Akt和phosphor-GSK3β蛋白水平降低 Western Blot结果显示,吗啡使小胶质细胞phosphor-Akt和phosphor-GSK3p蛋白水平明显降低,且表现为时间和剂量依赖性,纳洛酮可阻断吗啡的作用。 2.抑制GSK3β增加吗啡诱导的小胶质细胞凋亡 TUNEL方法检测细胞凋亡,发现特异性GSK3β抑制剂SB216763预处理显著增加了吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。Western Blot方法检测小胶质细胞cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平,发现SB216763预处理可以明显增加吗啡引起的caspase-3和caspase-8活化。 3.抑制GSK3β使吗啡处理引起的Bax/Bcl-2和phosphor-p38变化增加 Western Blot方法检测小胶质细胞Bax和Bcl-2蛋白水平变化,发现吗啡处理使小胶质细胞Bax水平升高,Bcl-2水平降低。而SB216763预处理增加了吗啡引起的Bax/Bcl-2变化。RT-PCR方法检测小胶质细胞中Bax和Bcl-2

mRNA表达变化,发现吗啡处理使小胶质细胞Bax mRNA水平升高,Bcl-2 mRNA水平降低,而SB216763预处理增加了吗啡引起的Bax/Bcl-2 mRNA变化,与蛋白变化一致。Western Blot方法检测小胶质细胞phosphor-p38水平,发现吗啡处理使小胶质细胞phosphor-p38水平升高,纳洛酮可阻断吗啡的作用。而SB216763预处理可显著增加吗啡引起的phosphor-p38升高。

结论 1.吗啡通过阿片受体途径使小胶质细胞phosphor-Akt和phosphor-GSK3β蛋白水平降低。 2.抑制GSK3β增加吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。 3.抑制GSK3β增加吗啡引起的Bax/Bcl-2水平变化。 已经 4. GSK3β对Bax和Bcl-2的表达调控发生在转录水平。 5.抑制GSK3β可增加吗啡处理引起的phosphor-p38水平升高。 第三部分P38 MAPK信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用研究 目的 使用体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系探讨p38 MAPK信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用及其具体机制。 方法 1.体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系并进行吗啡处理 体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞分别分组如下：1.正常对照组、吗啡组(10u M)、纳洛酮组(10μM)、吗啡+纳洛酮组(纳洛酮提前吗啡1h加入使之预先与阿片类受体结合)；2.正常对照组、吗啡组、SB203580组(10μM)、吗啡+SB203580组(SB203580提前1h加入)；置细胞培养箱孵育。 有 2. Western Blotting 使用Western Blot方法检测小胶质细胞phosphor-p38、cleaved caspase-3、cleaved caspase-8、Bax、Bcl-2等蛋白水平变化。 3.细胞凋亡检测 使用TUNEL染色法检测小胶质细胞凋亡。 4. RT-PCR 使用RT-PCR方法检测小胶质细胞Bax和Bcl-2 mRNA水平变化。 结果 1.吗啡处理使小胶质细胞phosphor-p38蛋白水平升高 Western Blot结果显示,吗啡使小胶质细胞phosphor-p38水平升高,而纳洛酮可阻断吗啡的作用。 2.抑制p38 MAPK减少吗啡诱导的小胶质细胞凋亡 TUNEL方法检测细胞凋亡,发现p38 MAPK特异性阻滞剂SB203580预处理明显减少了吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。Western Blot方法检测小胶质细胞中cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平,发现SB203580预处理可以明显减少吗啡引起的caspase-3和caspase-8活化。 3.抑制p38 MAPK减少吗啡处理引起的Bax/Bcl-2变化 Western Blot方法检测小胶质细胞中Bax和Bcl-2蛋白水平变化,发现吗啡处理使小胶质细胞Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低。而SB203580预处理减少了吗啡引起的Bax/Bcl-2蛋白变化。RT-PCR方法检测小胶质细胞中Bax和Bcl-2 mRNA表达变化,发现吗啡处理使小胶质细胞Bax mRNA水平升高,Bcl-2 mRNA水平降低。而SB203580预处理减少了吗啡引起的Bax/Bcl-2 mRNA变化,与蛋白变化趋势一样。 结论 1.吗啡通过阿片受体途径增加小胶质细胞phosphor-p38水平。 2.抑制p38减少吗啡诱导的小胶质细胞凋亡 3.抑制p38减少吗啡处理引起的Bax/Bcl-2变化。4.

01uM/L、0.1uM/L、1uM/L、10uM/L)作用于小鼠MC3T3-E1细胞,应用MTS法检测各组细胞存活率,筛选出对小鼠MC3T3-E1细胞有明显抑制且呈剂量依赖性的抑制剂。 2、选取其中S1021(Dasatinib)(靶点为SRC/ABL)、S1111(XL880(GSK1363089))(靶点为MET/VEGFR)两种抑制剂,分别以0.5uM/L作用于小鼠MC3T3-E1细胞,运用FACS法检测各周期(Sub-G1,G1, S, G2/M)细胞百分比,分析抑制剂对成骨细胞增殖周期的影响。 3、运用western blot检测抑制剂作用后MC3T3-E1细胞CCND1、P53、AKT、 P-AKT及BAX的表达。

结果1、通过MTS法共筛选出7种抑制剂,可以显著抑制小鼠MC3T3-E1细胞的增殖,且抑制效果呈剂量依赖关系。七种抑制剂为：S2703(GSK1838705A)、 S2743(PF-04691502)、S1021(Dasatinib)、S1064(Masitinib)、S1065(GDC-0941)、 S1111(XL880)、S1120(Everolimus)。 2、以0.5uM/L的抑制剂S1021(Dasatinib)、S1111(XL880)分别作用于小鼠MC3T3-E1细胞。与对照组比较,S1021组Sub-G1细胞比例显著增高(P=0.00)；S1111组Sub-G1期细胞比例显著升高(P=0.01),且两组药物间无显著差异(P=0.26)。 点击此处 3、与对照组比较,S1021可以抑制CCND1的表达,且可降低P-AKT的水平,对于P53及BAX的表达无明显影响。S1111可以抑制CCND1的表达,而对P-AKT、P53及BAX表达无明显影响。 结论：抑制SRC/ABL可以通过抑制AKT的磷酸化并下调CCND1抑制成骨细胞MC3T3-E1的增殖,抑制VEGFR/MET可以通过下调CCND1抑制成骨细胞增殖,说明SRC/ABL通过依赖AKT磷酸化的信号通路在成骨细胞增殖过程中起到关键作用。VEGFR/MET受体介导的信号通路在成骨细胞增殖中同样发挥重要作用,且其介导成骨细胞增殖过程不依赖于AKT的磷酸化。
大量研究表明,原癌基因RET和Hedgehog Y-27632数据表 (Hh)信号通路的异常表达均与发育和肿瘤的发生发展密切相关,但RET是否调控Hh通路却鲜有报道。基于以上疑问,本研究首先借助Hh靶基因Gli-1的双荧光素酶报告基因系统,发现内源表达RET的成神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y经RET蛋白激活物胶质细胞源性神经营养因子(Glial

cell-line derived neurotrophic factor, GDNF)处理,Gli-1报告基因的活性增加。进一步在293T细胞和SH-SY5Y细胞中共转RET过表达质粒和Gli-1报告基因质粒,发现在这两种细胞系中过表达RET均可增加Gli-1报告基因活性,证实RET参与调控Hh通路。过表达RET下游分子Akt的激活形式可增加Gli-1报告基因活性。而使用MK-2206抑制Akt活性或慢病毒敲降Akt后,激活RET并不能上调Gli-1的mRNA水平,证实RET通过Akt调控Hh通路。进一步,为研究Hh通路中的哪个分子是RET调控的靶点,我们利用Cyclopamine特异性抑制该通路的关键分子Smoothened (SMO)的活性,发现激活RET依然能增加Gli-1的mRNA水平,提示RET可能作用于膜受体SMO的下游。通过对SMO下游相关分子PKA、GSK3β、CK1的磷酸化水平检测,发现激活RET或Akt能降低GSK3β的磷酸化。因GSK3β负向调控Hh通路,抑制GSK3β则可激活Hh通路,且该作用不受MK-2206或RET敲降影响,提示RET/Akt可通过抑制GSK3P活性来激活Hh通路。最后,细胞增殖试验表明,RETshRNA.MK-2206以及Cyclopamine处理SH-SY5Y细胞,都能抑制该肿瘤细胞的增殖能力。综上所述,本研究初步证明RET可通过激活Akt,进而抑制GSK3β的磷酸化,最终激活Hh通路来影响肿瘤细胞的增殖水平。
本文比较了黄芩苷和黄芩苷铜对人肝癌细胞(HepG-2)裸鼠移植瘤生长的影响,并采用免疫印迹分析癌细胞凋亡相关蛋白的表达以研究黄芩苷铜对人肝癌细胞株HepG-2增殖、凋亡的影响,初步探讨其作用机制。构建HepG-2细胞裸鼠异种移植瘤模型,分析黄芩苷铜对人肝癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用。将裸鼠随机分为4组：对照组、50mg/kg黄芩苷组、50mg/kg黄芩苷铜组、100mg/kg黄芩苷铜组。各组每天肌肉注射给药相应剂量并测量绘制肿瘤的生长曲线,32天后处死动物,称重瘤块和计算抑瘤率以评价黄芩苷铜和黄芩苷处理对HepG-2细胞裸鼠异种移植瘤的影响。利用MTT法分析黄芩苷铜对于HepG-2细胞增殖的抑制作用。采用AO染色及荧光显微镜观察经黄芩苷铜作用后,人肝癌HepG-2细胞中凋亡肝癌细胞的形态学变化。利用流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡率。采用PI单染流式细胞仪分析细胞周期的分布,观察黄芩苷铜对HepG-2细胞的诱导凋亡作用；采用Western

没有 blot分析黄芩苷铜对PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白、caspase-3、Bax、p38、和Bcl-2蛋白表达的影响。肌肉注射黄芩苷和黄芩苷铜32天后,黄芩苷剂量为50mg/kg、黄芩苷铜剂量为50mg/kg和100mg/kg时,瘤块重量分别为0.69±0.11g,0.6±0.17g和0.40±0.07g均明显低于对照组(P
目的:通过观察Akt特异性抑制剂API-2和MK2206对小鼠1-细胞胚体外发育的影响及Akt特异性抑制剂对体外发育2-细胞胚内Akt主要活性形式p-Ser473-Akt定位与表达的改变,结合Akt特异性抑制剂API-2对小鼠合子基因组激活(Zygotic Gene Activation,ZGA)中四个标志基因和干细胞因子Oct4与Sox2的表达影响,为进一步探讨Akt在小鼠植入前胚发育ZGA中可能发挥的作用提供基础。方法:1.收集KM小鼠体内植入前胚(1-细胞胚至4-细胞胚),应用免疫荧光技术观察细胞内p-Ser473-Akt和总Akt(pan-Akt)的表达与定位情况。2.收集KM雌性小鼠与KM雄性小鼠交配所得的1-细胞胚,分别观察其在KSOM培养液、不同浓度的API-2和MK2206的KSOM培养液中体外发育的情况;3.收集KM小鼠1-细胞胚,分别置于KSOM和含API-2(2μM)和MK2206(30μM)的KSOM培养液中培养,获取体外发育的2-细胞胚,采用免疫荧光技术观察细胞内p-Ser473-Akt和pan-Akt的定位与表达情况;4.

sinensis(40 mg/L)+福辛普利(10-5mol/L)组,培养24 h后进行实验。MTT法检测不同浓度C.sinensis(0,5,10,20,40 mg/L)对NRK-52E作用24,48,72 h后的增殖情况,流式细胞仪Annexin V/PI双染检测凋亡率,比色法测定caspase-3酶活性。结果:C.sinensis(10~40 mg/L)在一定范围内可呈浓度依赖地促进培养的肾小管上皮细胞增殖(P0.05)。结论:C.sinensis对AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞凋亡具有一定抑制作用,可能与抑制NRK-52E中caspase-3的激活有关。
糖尿病是一种慢性、低度炎症性疾病。多种因素刺激下,环氧化酶COX-2在胰岛及多种组织中高水平表达。它通过与炎症因子和炎症介质,如一氧化氮、核因子-κB、前列腺素E等相互作用,对相应组织产生作用,从而促进了糖尿病并发症的发生和发展。对COX-2的研究可进一步揭示糖尿病并发症发生的分子机制,为预防和治疗糖尿病并发症提供新的思路。
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated

protein kinases,MAPKs)是广泛表达的丝氨酸/酪氨酸激酶,在哺乳动物细胞多种信号转导通路中起重要作用。MAPKs有3个主要家族:ERKs、JNKs和p38 MAPKs。近年来发现,p38信号通路是MAPK通路的一重要分支,它在炎症细胞、应激、凋亡、细胞周期和生长等多种生理和病理过程中起重要作用。随着研究的深入,p38 selleck好不好 MAPK可以作为神经元和胶质细胞中研究疼痛的靶标,很可能为疼痛性疾病的治疗提供一个良好的前景。
胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率均较高。胃癌的发生由遗传和环境等诸多因素相互作用所致,是一个多因素、多基因、多步骤参与的癌变过程,涉及大量相关基因的结构和表达异常,其中c-met、Bmi-1、HER-2/neu和基质金属蛋白酶(MMP)-9等的活化在胃癌的发生、发展中起重要作用。本文就近年胃癌相关基因及其在胃癌治疗中的研究进展作一综述,旨在帮助理解胃癌发生、发展的分子机制,并为其基因靶向治疗提供一定的理论依据。
目的观察高渗透压对兔髓核细胞活性的影响及JNK/SAPK(c-Jun Palbociclib N-terminal kinases/stress-activated protein kinases)和p38信号转导通路在此过程中的作用。方法根据不同渗透压及时间段处理髓核细胞将实验分为对照组、刺激组和阻断组后采用流式细胞仪检测各组髓核细胞凋亡情况,同时利用免疫荧光和Western

blot技术检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38mitogen-activated protein kinases,P-p38MAPK)、磷酸化JNK/SAPK激酶(phospho-JNK/SAPK,P-JNK/SAPK)的亚细胞定位及表达水平,观察其对髓核细胞凋亡的影响。结果高渗透压[600mOsm/kg H2O(mOsm)]可导致髓核细胞显著凋亡及P-p38 MAPK和P-JNK/SAPK蛋白表达水平改变。600mOsm时各刺激组凋亡细胞与对照组相比,差异均有显著统计学意义(P
目的:研究骨碎补总黄酮(TFDF)对高浓度葡萄糖作用下成骨细胞(OB)分化活性及对细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号蛋白的影响,为TFDF能否用来防治糖尿病性骨质疏松提供细胞分子学依据。方法:二次酶消化法分离培养新生SD大鼠颅骨OB及活性观察;MTT法检测TFDF对OB的细胞毒性,确定实验药物在培养基中的添加剂量;pNPP、ELISA、茜素红染色法分别检测不同浓度葡萄糖对OB碱性磷酸酶活性(ALP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、骨钙素(BGP)以及矿化能力的影响,并观察TFDF对高糖作用下OB分化活性的干预作用;Western-blot检测TFDF对高糖作用下OB

ERK1/2和p38蛋白磷酸化的情况。结果:原代分离培养新生SD大鼠OB,具有典型的OB分化特性;根据TFDF对OB的毒性试验,选择TFDF的浓度25、50、100 那个 mg/L为实验梯度浓度;葡萄糖(25、50 mmol/L)可以降低OB表达ALP、ColⅠ、BGP,降低其矿化能力;TFDF能剂量依赖性的提高高糖(25 mmol/L)作用下OB表达ALP、ColⅠ、BGP和矿化能力;TFDF(50 mg/L)能提高高糖(25 mmol/L)作用下p38和ERK1/2的蛋白磷酸化。结论:高糖可以降低OB分化和矿化能力,TFDF可提高高糖作用下OB的分化和矿化能力,其作用机理可能和提高p38和ERK1/2信号蛋白的磷酸化有关。
目的:探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对人食管腺癌SEG-1细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,u-PA)mRNA和蛋白表达的影响及p38MAPK信号转导通路在其中的作用.方法:以相同浓度的EGF(100g/L)按时间梯度刺激SEG-1细胞,应用Western blot法测定各时间点总p38MAPK蛋白、磷酸化p38MAPK蛋白、u-PA蛋白表达,并应用RT-PCR方法检测各时间点u-PAmRNA表达.用p38MAPK特异抑制剂SB203580预处理细胞后,观察上述指标变化.结果:EGF可明显增强SEG-1细胞(u-PA)mRNA和蛋白的表达,并可激活p38MAPK蛋白的磷酸化,具有时间依赖性.SB203580能明显抑制EGF诱导的p38MAPK蛋白的磷酸化,用其阻断p38MAPK信号转导通路后,EGF对u-PAmRNA和蛋白表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性.结论:EGF可通过p38MAPK信号转导通路诱导SEG-1细胞表达u-PA.