2.去氢二异丁香酚抑制结肠癌细胞周期进程去氢二异丁香酚可显著抑制结肠癌细胞生长,而药物对细胞生长增殖的抑制作用往往体现在对其细胞周期进程的调控上。因此,我们利用流式细胞术对药物处理后的结肠癌细胞周期进行分析。结果发现与对照组相比,去氢二异丁香酚处理组结肠癌细胞周期被明显阻滞于G1/S期。即去氢二异丁香酚可能通过影响细胞从G1期向S期转换来抑制DNA的合AZD8931成,进而实现对结肠癌细胞周期进程的阻滞。通过蛋白质免疫印迹法对细胞周期G1/S检查点信号转导通路相关蛋白表达情况进行检测,结果显示细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂家族成员p21蛋白的表达显著上调,而CDK2、CDK4、Cyclin D1、Cyclin E1和Cyclin E2等周期相关蛋白的表达均显著下调。这表明去氢二异丁香酚可能也许通过下调G1/S期检查点相关蛋白的表达使细胞周期阻滞于G1/S期,进而抑制结肠癌细胞周期进程。同样通过流式细胞术和蛋白质免疫印迹法对经去氢二异丁香酚处理后的HCT 116和SW620细胞凋亡水平进行检测,却并未发现细胞发生凋亡。3.去氢二异丁香酚诱发自噬流阻断型自噬结肠癌细胞经去氢二异丁香酚处理后在镜下可以镜下可观测到中出现了Selleck许多空泡化结构,疑似自噬。转录组测序分析发现去氢二异丁香酚处理后的结肠癌细胞中,自噬信号通路关键基因显著富集且表达上调。随后利用免疫荧光技术检测细胞中自噬标志性蛋白LC3B的表达情况,发现去氢二异丁香酚处理组细胞中无论是内源性LC3B蛋白还是外源性GFP-LC3信号均明显增强,且在胞质中呈点状聚集定位于细胞器膜上。利用透射电镜对结肠癌亚细胞结构进行观察,发现去氢二异丁香酚处理组细胞中出现了明显的自噬小体。