划痕实验和Transwell实验显示转染miR-320d mimic后SW480和HCT116细胞迁移侵袭能力显著低于对照组(P<0.05)。TUSC3在结肠癌组织和细胞中高表达,并且TUSC3与结肠癌患者肿瘤临床分期、淋巴结转移、远处转移有关(P<0.05)。在EGFR高表达的结肠癌细胞中转染TUSC3,细胞增殖、侵袭能力显著上升。双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-320dSU5416分子量 mimic可显著降低TUSC3 3’UTR区荧光素酶活性,而miR-320d mimic不能降低结合位点突变的TUSC3 3’UTR区荧光素酶活性。在EGFR高表达SW480和HCT116细胞中转染miR-320d mimic能降低TUSC3的mRNA和蛋白表达水平,而转染miR-320d inhibitor能增加TUSC3的mRNA和蛋白表达水平。靶AMN-107体内标蛋白回复实验(Rescue实验)表明TUSC3能部分抵消miR-320d对EGFR高表达结肠癌细胞增殖侵袭的抑制作用。在EGFR高表达结肠癌细胞中转染miR-320d mimic增加了E-cadherin蛋白的表达水平,而降低了Vimentin蛋白的表达水平。在EGFR高表达结肠癌细胞中转染miR-320d inhibitor降低了E-cadherin临床试验蛋白的表达水平,而增加了Vimentin蛋白的表达水平。在EGFR高表达结肠癌细胞中过表达miR-320d使mTOR、PI3K和AKT磷酸化程度降低,而同时过表达TUSC3能增加mTOR、PI3K和AKT磷酸化程度。结论1.本研究提示miR-320d在EGFR高表达结肠癌组织和细胞系中低表达,miR-320d低表达水平与结肠肿瘤大小以及远处转移显著相关。2.过表达miR-320d能够抑制EGFR高表达结肠癌细胞的迁移、侵袭、增殖。