透射电镜检测线粒体超微结构改变,并进一步检测TM3细胞线粒体膜电位、ATP含量、ROS水平,线粒体生物合成相关蛋白水平、线粒体DNA拷贝数以及线粒体质量。以明确BPDE染毒对TM3细胞线粒体结构、功能以及生物合成的影响。使用PGC-1α激动剂ZLN005预处理TM3细胞,检测上述指标以明确线粒体生物合成在BPDE对细胞睾酮合成的影响中所起的作用。进一步通过激光共定位和AP26113浓度Western blot检测线粒体自噬通路相关蛋白的表达情况,分别采用自噬抑制剂3-MA和线粒体自噬诱导剂CCCP抑制或促进线粒体自噬水平,检测上述相关指标,以明确线粒体自噬在BPDE对细胞睾酮合成的影响中所发挥的作用。4.利用课题组前期开展的人群流行病学研究,分析既往数据和资料,初步探索人精子线粒体功能与精子顶体酶活性和DNA断裂指数之间的确认细节联系。在此基础上,使用CCCP体外处理人类精子,检测精子线粒体膜电位、顶体酶活性、顶体反应能力和DNA断裂指数,并检测精子内ROS水平和ATP含量,以进一步明确和验证精子线粒体功能和精液质量之间的关系。结果1.BPDE处理导致GC-2细胞ATP含量下降,并导致Cyt C释放增加以及caspase-9和caspase-3的激活。BPDE染毒造成LXH254DMSO溶解度GC-2细胞SIRT1活性降低(P<0.01),进而抑制PGC-1α去乙酰化,同时引起线粒体生物合成相关蛋白SIRT1、PGC-1α、NRF1表达水平降低,最终导致线粒体质量下降(P<0.05)。增加SIRT1表达可明显改善BPDE所致的上述线粒体生物合成的改变,并显著恢复线粒体膜电位、细胞ATP含量和Cox IV蛋白水平。上调SIRT1表达可降低胞浆Cyt C水平,并抑制caspase-9和caspase-3的活化。