实时定量RT-PCR检测各关键分子mRNA表达水平 与NC组比较,MS组CollagenⅠ/Ⅲ、TGF-β、ICAM-1、IL-6、TNF-α、IKKβ及NF-κB mRNA表达明显升高(P＜0.01);与MS组比较,HUDT组CollagenⅠ/Ⅲ、TGF-β、ICAM一1、IL-6、TNF-α、IKKβ及NF-κB
mRNA表达明显下降(P＜0.01～0.05)。 和 10.Western Blot检测各关键分子蛋白表达水平 与NC组比较,MS组大鼠心肌组织IκB蛋白降解增多(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组大鼠心肌组织IκB蛋白降解减少(P＜0.05)。 与NC组比较,MS组大鼠心肌组织总蛋白及核蛋白NF-κB P65水平均升高(P＜0.05);与MS组比较,HLJDT组大鼠心肌组织总蛋白及核蛋白NF-κB P65水平均降低(P＜0.05)。 与NC组比较,MS组大鼠心肌组织磷酸化JNK(pJNK)及丝氨酸磷酸化IRS-1(pIRS-1)蛋白水平明显升高(P＜0.01),Akt蛋白水平明显下降(P＜0.01)。与MS组比较,HLJDT组大鼠心肌组织pIRS-1蛋白水平明显降低(P＜0.05),Akt蛋白水平明显升高(P＜0.01),pJNK蛋白水平降低,但两组间无统计学意义(P＞0.05)。 与NC组及HLJDT组比较,MS组大鼠心肌组织非磷酸化JNK(JNK)及非磷酸化IRS-1(IRS-1)蛋白水平升高,但三组之间无统计学意义(P＞0.05)。 11.相关性分析结果 采用Pearson相关分析,结果显示血清IL-6及TNF-α水平分别与体重、动脉收缩压、空腹血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数及胶原表达呈正相关(P＜0.01);与高密度脂蛋白表达呈负相关(P＜0.05)。 结论 1.通过高糖、高盐及高脂饮食喂养Wistar大鼠16周,成功建立了与人MS相似的大鼠模型,为MS发病机制研究提供了可靠的研究平台。
2.MS大鼠具有心肌细胞凋亡增多、室壁增厚、左室舒张功能下降及心肌间质纤维化等特点,证实MS大鼠出现心肌重构。 3.黄连解毒汤对MS大鼠心肌重构具有明显的干预作用。 4.MS大鼠心肌组织存在炎症诱导的IKK及JNK激活,并因其激活而抑制正常胰岛素信号传导,引起心肌结构与功能受损。 5.黄连解毒汤可通过抑制炎症反应,减少IKK激活,进而改善IR,起到干预MS心肌重构的作用。 背景 代谢综合征(Metaboic Syndrome,MS)是以中心型肥胖、糖代谢异常、高血压、血脂紊乱等多种代谢紊乱或危险因素聚集一体的临床症候群。MS加速了2型糖尿病及心血管疾病的发生并使其导致的死亡率逐渐上升。近年来,随着人们生活水平的提高、饮食结构的改变以及不良的生活方式,代谢综合征发病率显著增长,据报道我国成人MS患病率为14%-18%。 MS中各组成成分都是心血管疾病发生的独立危险因素,合并的代谢异常组分越多,其对心血管疾病的协同危险作用越强,心血管疾病的发生率越高。MS患者发生冠心病及中风的危险性较正常人增加3倍,心血管死亡率也显著增加;而且,MS血管内皮功能障碍、动脉僵硬度增高以及血管内-中膜厚度增加,这些均为血管早期病变的指标,提示MS患者大血管结构和功能的改变可能是其心脑血管疾病发生发展的基础。因此,基于MS人群中心血管疾病的高风险性,深入研究MS患者血管重构的发生机制,有效减少心血管终点事件的发生至关重要。 Depsipeptide细胞系 随着对MS发病机制研究的进一步深入,炎症在以胰岛素抵抗(IR)为核心的MS中的作用越来越受到重视。许多研究证实MS及IR是一种慢性低水平的炎症状态。大量研究显示,MS的发生往往伴随着炎症因子水平的升高。许多大规模临床实验证实,炎性指标如CRP、TNF-α及IL-6等在MS患者血清中水平明显升高,提示CRP、TNF-α及IL-6等炎症因子在MS的发生发展中扮演了重要角色。 和 促炎症反应细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)等可激活p38MAPK。p38MAPKN路是1993年发现的一类新的MAPK通路,p38MAPK在各组织中广泛表达,一直作为炎症的信号传递者进行广泛的研究。目前很多研究发现p38MAPK信号传导通路与血管重构密切相关,并认为p38MAPK有可能成为血管重构的治疗靶点。
黄连解毒汤源于唐代王烹《外台秘要》,由黄连、黄柏、黄芩、栀子四味药组成,为清热解毒的代表方。研究已证实黄连解毒汤具有抗炎及改善IR的作用,进一步研究表明,黄连解毒汤降低心血管事件的发生率可能与其抗炎作用有关。 目前国内外研究中,对于MS大血管结构改变及其发生机制及干预研究的报道较少。本研究应用MS大鼠模型为研究对象,拟观察MS大鼠大血管结构和功能改变,探讨血管炎症反应对MS大血管重构的影响以及其可能机制,研究黄连解毒汤对MS大鼠血管炎症及大血管重构的干预效果,为有效逆转或延缓MS患者心血管损害提供重要的理论和实验依据。 目的 1.观察MS大鼠是否存在血管炎症反应及主动脉结构重构。 2.评价黄连解毒汤对MS大鼠血管重构的影响并探讨其可能的机制。 方法 雄性Wistar大鼠45只,随机分为两组:正常对照组(NC组,n=10),模型组(n=35)。NC组给予标准大鼠饲料及普通饮水喂养,模型组给予高糖、高脂及高盐饲料及20%高蔗糖水喂养(HF饮食)。HF饮食喂养16周后,将成模的21只大鼠随机分为代谢综合征组(MS组,n=10)及黄连解毒汤组(HLJDT组,n=11)。此后12周,MS组(n=10),继续给予HF饮食同时每天以生理盐水2ml灌胃;HLJDT组(黄连解毒汤组,n=11),继续给予HF饮食同时每天以黄连解毒汤1.04g/100g灌胃;NC组(n=10),每天以生理盐水2ml灌胃。 实验过程中,进行以下检测:(1)整个实验过程中,每2周称量体重及测尾静脉血压1次;(2)分别于造模前、喂养16周、实验末抽取静脉血测定空腹血糖、空腹胰岛素、血脂(甘油三酯、胆固醇,高、低密度脂蛋白),血清IL-6及TNF-α水平并计算胰岛素抵抗指数(IRI)。 实验结束时处死动物,留取血管标本,进行下列实验:(1)主动脉病理学检查;(2)免疫组织化学检测主动脉ICAM-1及VCAM-1;(3)实时定量RT-PCR法检测主动脉MMP-2、ICAM-1、VCAM-1、IL-6、TNF-αmRNA表达;(4)WesternBlot法检测主动脉磷酸化p38MAPK、磷酸化ATF-2及MMP-2蛋白表达。 结果 1.