01)。 结论：腺病毒介导的mda-7能在体外活体中高表达；Ad.mda-7和ADM治疗裸鼠肝癌具有协同作用，Ad.mda-7可显著增强化疗效果，明显降低化疗不良反应。
精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)三肽序列是多种细胞外基质(Extracellular HIF-1 cancer matrices,ECM)蛋白和血浆蛋白结构中保守的共有的基本成分,是广泛存在于细胞间识别系统的基本单位,许多病理学过程与不正常的ECM作用相关,因此含RGD的多肽或化合物有望成为治疗一些重要疾病的新制剂。同时,该类肽的粘附性也成为药物设计的一个新靶点。本论文研究内容主要包含两个部分: 一、酶法与化学法合成细胞粘附肽RGDS 目前,关于RGD的合成报道中酶法合成RGD的报道很少。我们首次采取酶法化学法相结合的方式合成了RGDS四肽。这种方法具有反应条件温和,合成产率高等优点,从而建立一条高效廉价的RGD(S)的合成路线。 二、RGDS对肿瘤细胞增殖及其凋亡的影响 本文研究了RGDS对人胃癌细胞系BGC-823的生长增殖及凋亡的影响。通过MTT试验检测细胞活力,发现RGDS能够抑制细胞的生长。进一步对细胞形态的观察了解到RGDS之所以能够抑制人胃癌细胞系BGC-823的生长是由于诱导细胞发生了凋亡,我们通过流式细胞仪检测;DNA电泳来进一步证实,并对RGDS的浓度关系进行了探讨。为探讨其诱导凋亡的分子机制,我们通过免疫组化方法显示了细胞内的抗凋亡蛋白Survivin在RGDS的作用下阳性率显著降低。
第一部分美满霉素抑制脂多糖诱导的小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶的表达
目的在离体细胞培养中，探讨美满霉素(Minocycline,MC)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2细胞一氧化氮(nitric oxide,NO)产生及诱导型一氧化氮合酶(Induced nitricoxide synthase,iNOS)表达的影响。方法将MC或LPS加入培养的BV-2细胞中，使用酶法测定培养上清中的NO的浓度，免疫组织化学方法观察BV-2细胞中iNOS蛋白的表达，逆转录聚合酶链式反应检测细胞iNOS mRNA表达。结果LPS(100ng／ml)组BV-2细胞培养上清中的NO含量显著升高(P＜0.05)，iNOS蛋白和mRNA的表达也显著升高(均P＜0.01)，高于空白对照组。MC(10μmol／L)预处理可明显抑制上述变化。MC+LPS组BV-2细胞培养上清中NO含量，细胞中iNOS蛋白、mRNA的表达较LPS组显著下降(均P＜0.01)，但仍显著高于空白对照组(均P＜0.05)。结论MC预处理可显著抑制LPS诱导的小胶质细胞iNOS的表达及NO产生。
第二部分美满霉素抑制脂多糖诱导的小胶质细胞肿瘤坏死因子-α的表达 目的在离体细胞培养中，探讨MC对LPS诱导的BV-2细胞肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)表达的影响。方法将MC或LPS加入培养的BV-2细胞中，使用酶联免疫吸附试验(Enzyme 没有 linked immunosorbent assay，ELISA)、免疫组织化学方法观察BV-2细胞中TNF-α蛋白的表达，逆转录聚合酶链式反应检测细胞TNF-αmRNA表达。结果LPS(100ng／ml)组BV-2细胞培养上清中的TNF-α含量显著升高(P＜0.01)、细胞中TNF-α蛋白和mRNA的表达也显著升高(均P＜0.01)，高于空白对照组。MC(10μmol／L)预处理可明显抑制上述变化。MC+LPS组BV-2细胞培养上清中TNF-α含量较LPS组显著下降(P＜0.01)，与空白对照组比较无差异(P＞0.05)。MC+LPS组BV-2细胞中TNF-α蛋白、mRNA的表达较LPS组显著下降(均P＜0.01)，但仍显著高于空白对照组(均P＜0.05)。结论MC预处理可显著抑制LPS诱导的小胶质细胞TNF-α的表达。 第三部分美满霉素下调P38MAPK的表达抑制脂多糖诱导的小胶质细胞的活化 目的在离体细胞培养中，探讨MC抑制LPS诱导的BV-2细胞活化与P38MAPK信号传导途径的关系。方法将MC或LPS加入培养的BV-2细胞中，利用Western免疫印迹法观察BV2细胞P38丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，P38MAPK)表达的变化。结果实验各组BV-2细胞P38MAPK总蛋白水平无变化；空白对照组、MC组几乎无磷酸化P38MAPK(P-PMAPK)蛋白的表达；LPS组P-PMAPK蛋白表达水平显著上调，与空白对照组有显著差异(P＜0.01)；MC+LPS组BV-2细胞中P-PMAPK蛋白表达水平较LPS组显著下降(P＜0.01)，但仍显著高于空白对照组(均P＜0.01)。结论MC可能通过下调P38MAPK信号途径的活性抑制LPS诱导的小胶质细胞的激活。 已经 第四部分美满霉素对MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的保护作用
目的在离体细胞培养中，探讨MC对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的帕金森病细胞凋亡模型的保护作用并探讨其机制。方法将MC或MPP~+加入培养的PC12细胞中，建立多巴胺神经元凋亡模型，四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞代谢活性，电泳法检测细胞凋亡，流式细胞术检测细胞凋亡率，逆转录聚合酶链式反应分别检测细胞Caspase-3 mRNA表达。结果MPP~+浓度为10μmol／L时，建立多巴胺神经元凋亡模型。MC100μmol／L预处理可明显升高MPP~+处理的PC12细胞的细胞活性。MC+MPP~+处理组细胞凋亡率显著低于MPP~+处理组(P＜0.01)，但仍明显高于空白对照组(P＜0.05)。MC+MPP~+组细胞Caspase-3 mRNA表达明显低于MPP~+组(P＜0.01)，仍明显高于空白对照组(P＜0.05)。结论MC对MPP~+诱导的细胞凋亡有一定的保护作用，MC可能通过下调Caspase-3 mRNA表达保护MPP~+诱导的细胞凋亡。
第一部分 血红素氧合酶和内源性一氧化碳在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的作用 目的:通过妊娠期高血压疾病孕妇胎盘组织中血红素氧合酶的表达和内源性CO含量测定,探讨血红素氧合酶/一氧化碳系统在妊娠期高血压疾病发病中的作用机制。 方法:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例妊娠期高血压疾病患者组(HDCP组)和15例正常晚孕妇女(对照组)胎盘组织中HO-1、HO-2mRNA的表达;HE染色观察胎盘绒毛及血管病变;免疫组化染色法检测胎盘组织中HO-1、HO-2的定位和表达,采用高清晰度彩色医学图文分析系统对其定量分析;分光光度法测定胎盘组织中HO的活性;Western blot检测胎盘组织中HO-1、HO-2蛋白质的表达;双波长定量测定法检测胎盘组织匀浆上清液碳氧血红蛋白(COHb)含量;硝酸还原酶法测定胎盘组织中NO代谢产物亚硝酸基/亚硝基(NO2-/NO3-)。 结果:(1)HE染色可见妊娠期高血压疾病组胎盘绒毛数目减少、排列紊乱、细小血管壁增厚和管壁纤维素样坏死发生率显著高于正常妊娠组(P<0.