程序性坏死抑制剂抗芥子气损伤作用评价 程序性坏死是近年来发现的一种由死亡受体介导的caspases非依赖性细胞死亡模式，在凋亡被抑制的情况仍可介导细胞坏死，其在炎症性病变、缺血性心脑血管病、神经退行性疾病等多种疾病的发生发展及肿瘤细胞的耐药方面具有重要意义。DNA烷基化损伤可诱导细胞程序性坏死。而关于程序性坏死是否参与了芥子气诱导的细胞损伤目前尚无报道。本研究首次进行了程序性坏死抑制剂抗芥子气损伤作用的研究。 3.1程序性坏死抑制剂对染毒HaCaT细胞存活的影响 采用芥子气染毒HaCaT细胞模型，同时加入凋亡抑制剂z-VAD-fmk阻断细胞凋亡，观察程序性坏死抑制剂Nec-1对细胞存活的影响。结果表明，Nec-1、z-VAD-fmk单用时对芥子气所致HaCat细胞死亡具有明显保护作用，两者合用时对细胞的保护作用明显增强，细胞存活率接近100%。提示，程序性坏死参与芥子气诱导细胞死亡。 3.2程序性坏死抑制剂对芥子气染毒小鼠耳郭肿胀的影响 进一步，对程序性坏死抑制剂抗芥子气所致皮肤损伤的作用进行评价。结果表明，染毒前腹腔注射给予Nec-1（4mg/kg）和z-VAD-fmk（10mg/kg）对染毒耳肿胀均无明显影响。

4.免疫抑制剂抗芥子气损伤的药效评价 FTY720可通过降低外周血淋巴细胞数从而降低机体免疫反应，目前其治疗肾移植排斥反应已进入Ⅲ期临床研究阶段，对类风湿性关节炎模型的改善作用也已取得初步疗效。本研究采用小鼠芥子气耳郭皮肤染毒模型，考察了S1P抑制剂FTY720对芥子气染毒小鼠皮肤损伤的影响。结果表明，提前3天按1mg/kg/d连续灌胃给予FTY720对芥子气染毒小鼠耳郭肿胀无明显影响。 5.中药制剂抗芥子气损伤的药效评价 七叶皂苷钠具有抗炎抗渗出的作用，并可促进体内皮质醇类化合物的分泌。结果表明，七叶皂苷钠凝胶涂抹给药及腹腔注射给药（5mg/kg）对芥子气染毒小鼠耳郭肿胀均无明显影响。 三、抗炎药物与其他药物合用抗芥子气损伤的药效评价 芥子气损伤机制复杂，单一药物的疗效有限，因此，为提高治疗效果，需要针对不同的损伤机制采用联合用药和综合性治疗措施。聚(ADP-核糖)聚合酶（Poly(ADP-ribose)polymerase，PARP）是目前外军认为最有前景的抗芥子气损伤的治疗靶点。本课题进一步考察了抗炎药物与PARP抑制剂合用对抗芥子气损伤的保护作用。 high throughput screening selleck screening library 1.吲哚美辛与PRAP抑制剂合用对小鼠耳郭染毒模型的影响 染毒前给予非甾体抗炎药吲哚美辛（10mg/kg，po）和PARP抑制剂MUS003（200mg/kg，ip），考察两者合用对芥子气染毒皮肤损伤的影响。结果表明，低剂量芥子气染毒条件下，吲哚美辛组与两药合同组均可降低耳肿胀程度，抑制率分别为45.0%和19.1%。高剂量芥子气染毒条件下，MUS003、吲哚美辛及药物合用组均可降低耳肿胀程度，抑制率依次是21.8%、28.9%和32.4%。

2.奥伐尼与PRAP抑制剂合用对小鼠耳郭染毒模型的影响染毒前给予辣椒素受体激动剂奥伐尼（0.5mg/耳，涂抹）与PARP抑制剂MUS003（200mg/kg，ip），考察两者合用对芥子气染毒皮肤损伤的影响。结果表明，低剂量芥子气染毒条件下，奥伐尼组与药物合同组均可降低耳肿胀程度，抑制率分别为56.9%和72.2%，且两药抑制耳肿胀具有显著地交互作用。在高剂量芥子气染毒条件下，MUS003组与合用组均可降低耳肿胀程度，抑制率为6.5%和28.3%。 结论 1.非甾体抗炎药吲哚美辛对低（32mg/mL）、高（128mg/mL）染毒剂量所致皮肤损伤具有较好的保护作用。辣椒素受体激动剂奥伐尼对低剂量芥子气所致皮肤损伤保护作用明显，优于吲哚美辛； 2.非竞争性（变构型）p38抑制剂BIRB796对芥子气损伤的保护作用强于竞争性p38抑制剂SB203580，这可能与BIRB796同时抑制SM诱导的p38和JNK磷酸化，而SB203580抑制p38激酶同时代偿性地引起JNK激酶磷酸化程度升高有关； 和 3.首次发现程序性坏死抑制剂可保护芥子气诱导的表皮细胞死亡，提示这一坏死机制参与了芥子气诱导的细胞死亡； 4.基于抗炎药物的药物组合方案中，奥伐尼与PARP抑制剂MUS003合用对芥子气染毒小鼠皮肤损伤保护作用优于单用方案，可作为备选药物组合方案进行下一步研究。综上，本研究通过对基于炎症反应不同环节的多种类别的抗炎药物进行了抗芥子气损伤的药效评价，明确了各类药物对芥子气损伤的保护作用及其特点，并提出了基于抗炎药物的抗芥子气损伤组合用药方案，为基于炎性反应的抗芥子气新药研究提供了重要的理论依据和实验基础。
目的：观察黄芪甲苷和SB203580对镉致大鼠血睾屏障破坏及相关蛋白表达改变的保护效应，并初步探讨黄芪甲苷的保护机制。

方法：21只成年雄性SD大鼠随机分为7组：单纯镉组（0.1%氯化镉腹腔内注射，1mg/Kg·d），镉加黄芪甲苷组（镉剂量同上，同时注射黄芪甲苷，10mg/Kg·d），镉加SB203580组（镉剂量同上，同时注射SB203580，100μg/Kg·d），以上各组又分为连续处理五天和十天两个时间组，对照组腹腔内注射等量生理盐水。各实验和对照组动物均为3只。取睾丸做H-E染色、免疫组织化学染色、血睾屏障超微结构观察以及Western bloting检测p38MAPK磷酸化水平改变。 结果：H-E染色观察对照组支持细胞核染色较浅且不规则，镉组支持细胞内有空泡形成，镉加黄芪甲苷组与镉加SB203580组未见明显形态异常。免疫组织化学染色观察对照组波形蛋白阳性产物在支持细胞基室腔附近的胞质中表达，间隙连接蛋白43、闭锁小带-1蛋白、Claudin-11阳性产物在生精上皮靠近基底部表达。镉组波形蛋白、缝隙连接蛋白43、闭锁小带-1蛋白、Claudin-11阳性产物表达均显著降低（P＜0.05），镉加黄芪甲苷组与镉加SB203580组阳性产物表达虽低于对照组但明显高于镉组（P＜0.05）。超微结构观察对照组血睾屏障紧密连接形态完整，呈连续的电子密度较深致密线，镉组血睾屏障紧密连接及支持细胞均见不同程度破坏，镉加黄芪甲苷组与镉加SB203580组破坏程度较相应处理时间镉组为轻。Western bloting结果显示镉组P-p38MAPK水平明显增强（P＜0.05），镉加黄芪甲苷组与镉加SB203580组P-p38MAPK水平虽高于对照组，但较镉组明显减弱（P＜0.