12±0.048，34.91±0.104，36.58±0.092与4.11±0.081；P＜0.05]；36h组凋亡率较24h组稍有增加，但差异无统计学意义，[34.91±0.104与36.58±0.092；P>0.05]。 2、缺氧引起PC12细胞凋亡率增加，[34.91±0.117与3.11±0.059；P<0.05]和存活率的显著降低[17.71±0.031与90.11±0.035；P<0.05]，显著降低缺氧引起的PC12细胞凋亡率的增加[34.91±0.021与21.72±0.081；P
目的： 肝纤维化的形成是机体对肝损伤的一种修复过程，其特征性改变是细胞外基质(extracellular matrix，ECM)在肝脏中过度沉积。肝纤维化的形成基础是肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)的活化，活化的HSC细胞合成大量的ECM、平滑肌肌动蛋白（α-smooth

muscle actin,α-SMA)等。越来越多的研究发现Wnt信号通路与肝纤维化的发生有着密切联系，尤其是Wnt经典信号通路，也称为Wnt/β-catenin信号通路。β-catenin（β-连环蛋白)是一种多功能的胞浆蛋白，也能介导Wnt信号传导，是Wnt经典信号通路的关键因子。糖原合成酶激酶(GSK-3β)在Wnt经典信号通路中可使β-catenin磷酸化并参与其随后的降解过程，从而保持经典Wnt通路的静止状态。而SB216763是GSK-3β的抑制剂，使胞浆中β-catenin大量累积并入核，从而激活Wnt经典信号通路。本实验应用GSK-3β抑制剂抑制其在体外培养的大鼠HSC细胞中的活性，通过测定β-catenin的水平以及Wnt靶基因mRNA的表达预探讨经典Wnt信号通路在大鼠HSC细胞中的作用机制。 还有 近年来中药复方制剂治疗肝纤维化的研究取得了很大进展，肝复康是本实验室经过多年实验总结的中药复方制剂。本实验通过培养肝星状细胞并使用SB216763及中药肝复康药物血清干预，预探讨肝复康通过Wnt经典信号通路抗肝纤维化的机制。 PD0325901 方法： 1.细胞培养： 大鼠HSC-T6细胞株用含10%胎牛血清和DMEM培养基，于37℃，5%CO2混合气体的孵箱中培养，细胞达到良好状态后，所有细胞用无血清的DMEM培养基饥饿24小时后分组加药。细胞随机分五组加药，SB216763工作浓度依次为5,10,20,30,40umol/L(uM)，培养12小时后用比色微量滴定唑法(Microtitre tetrazolium，MTT)检测加药后细胞增殖情况，分析数据并选定SB216763最佳工作浓度为10uM、20uM。

将细胞随机分为以下五组：对照组(DMEM中加10％正常血清)；SB21676310uM组；SB21676320uM组；肝复康组(10％肝复康药物血清)；SB21676320uM加肝复康组(SB21676320uM基础上用10％肝复康药物血清干预)。 2.MTT:检测加药后大鼠HSC细胞增殖情况。 3.Quant Reverse Transcriptase(RT)-polymerase chain reaction(PCR): 检测大鼠HSC细胞中GSK-3β，β-catenin，CollagenI、Ⅲ，α-SMA，Wnt1， Wnt3a， Wnt10b

mRNA的表达。 4.免疫蛋白印迹(Western-blot): 检测大鼠HSC细胞中β-catenin蛋白的表达。 5.实验结果均采用SPSS13.0统计软件分析。 结果： 1.MTT实验结果 SB21676310uM组与SB21676320uM组肝星状细胞均较对照组增殖明显，肝复康药物血清组较对照组增殖明显受到抑制，差异有统计学意义(P<0.05)；同时，肝复康药物血清加SB21676320uM组细胞增殖程度于SB216763组相比显著下降，差异有统计学意义(P<0.05)；SB21676320(uM)加肝复康药物血清组相对于SB21676320uM组β-catenin表达量同样下降，差异有统计学意义(P
背景和目的： Selleck 抑制剂 Library 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是老年人常见的一种慢性进行性神经退行性疾病。AD的主要病理学特征是脑内生成有神经毒性的p-样淀粉样蛋白(β-amyloid, Ap), Aβ通过一系列的复杂分子病理机制导致大脑神经元细胞变性、缺失,最终导致认知功能损害,即脑内异常沉积的A6是造成AD记忆认知损伤的始动因素,是诱发AD的中心环节。糖原合成酶激酶3β(Glycogen sunthase kinase-3p,GSK-3p)是普遍存在于真核细胞中的一种多功能丝氨酸/苏氨酸激酶,是糖原合成的关键调节酶,是为数不多的通过磷酸化而失活的蛋白激酶。GSK-3β参与机体多个细胞信号传导通路,是PI3K/Akt信号通路下游分子,其中GSK-3β过度激活时促进淀粉样前体蛋白降解产生Ap,促进神经细胞骨架蛋白tau蛋白的异常过度磷酸化,加重神经元的退行性变,干扰正常的突触可塑性,进而加速阿尔茨海默病样病理过程。研究GSK-3β的调节机制对于治疗AD至关重要,抑制GSK-3β活性的过度升高,已成为AD治疗药物的新靶点。 淫羊藿苷(icariin, ICA)是小檗科淫羊藿属植物中的一种黄酮类化合物,近年来,关于淫羊藿苷在中枢神经系统的药理作用及其机制的研究日益增多,研究发现淫羊藿苷具有抗痴呆抗衰老、抗抑郁、改善缺血性脑损伤等作用。本研究基于PI3K/Akt信号通路,探讨ICA对AD细胞模型存活率及GSK-3β表达的影响,揭示出AD的部分发病机制以及ICA的作用机制,为指导临床应用和开发新药提供理论和实验依据。 方法： 以Aβ25-35孵育PC12细胞制备的AD细胞模型为对象,分为5组,分别为正常对照组、Aβ组、Aβ+ICA组、Ap+LY组、Ap+LY+ICA组(LY为PI3K/Akt信号通路的经典抑制剂),MTT法检测各组细胞的存活率,Western-Blot法检测各组的Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3p的表达。 结果： (1)MTT法检测显示,与正常对照组比较,Aβ孵育后PC12细胞模型组的存活率明显下降,差异有显著性(P<0.01)；与Aβ组相比,加入ICA干预后细胞存活率明显增加,差异有显著性(P<0.01)；与ICA组相比,ICA+LY组细胞存活率明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与Aβ组相比,ICA组的p-Akt水平、P-GSK-3β水平明显增高,差异有统计学意义(P<0.