01)；与TGF-β1刺激组相比,各药物处理组p-Smad3蛋白表达均显著降低(P<0.01)；氯沙坦组与QC小剂量组比较差异具有统计学意义(P<0.01)；各药物处理组α-SMA蛋白表达较TGF-β1刺激组均有不同程度下降,其中氯沙坦组下降最为显著(P<0.01),其次为QC大剂量组(P<0.01)；QC小剂量组和氯沙坦组比较有显著差异(P<0.01)；与TGF-β1刺激组相比,各药物处理组Ⅰ型前胶原蛋白表达均显著下降(P<0.01)；氯沙坦组Ⅰ型前胶原白表达低于QC小剂量组(P0.05);与TGF-β1刺激组相比,各药物处理组Smad7蛋白表达均显著提高(P<0.01)；其中氯沙坦组升高最为显著(P<0.01),其次为QC大剂量组(P<0.01)；大、中剂量组增殖与TGF-β1刺激组相比,有非常显著性差异(P<0.01),其中以大剂量组减弱最为显著(P<0.01),其次为中剂量组(P0.05)。 2.各实验组细胞Smad2、α-SMA、Ⅰ及Ⅲ型前胶原mRNA表达的比较 (1) Smad2 mRNA表达比较：与正常对照组相比,TGF-β1刺激组细胞的Smad2 mRNA表达显著升高(P<0.01),其次为中剂量组(P0.05)。 (2)α-SMA mRNA表达比较：与正常对照组相比,TGF-β1刺激组α-SMA
mRNA表达显著升高(P<0.05或P0.05)。 (3)Ⅰ型前胶原mRNA表达比较：与正常对照组相比,TGF-β1刺激组细胞Ⅰ型前胶原mRNA表达显著升高(P<0.01)；与TGF-β1刺激组相比,大剂量组和中剂量组Ⅰ型前胶原mRNA表达均显著下降(P0.05)。 (4)Ⅲ型前胶原mRNA表达比较：与正常对照组相比,TGF-β1刺激组细胞Ⅲ型前胶原mRNA表达表达显著升高(P<0.01)；与TGF-β1刺激组相比,大、中剂量组Ⅲ型前胶原mRNA表达均显著降低(P<0.05)；其中大剂量组下降最为显著(P<0.05),其次为中剂量组(P0.05)。 或者 3.各实验组细胞Smad2和(?)-Smad2蛋白表达的比较 3-Methyladenine数据表 (1) Smad2蛋白表达比较：与正常对照组相比,TGF-β1刺激组细胞Smad2蛋白表达明显升高(P<0.01)。与TGF-β1刺激组相比,大、中剂量组显著下降(P均0.05)。 (2) p-Smad2蛋白表达比较：与正常对照组相比,TGF-β1刺激组细胞p-Smad2蛋白表达显著升高(P<0.01)；与TGF-β1刺激组相比,大、中剂量组p-Smad2蛋白表达均显著下降(P<0.05或P0.05)。
结论 1.槲皮素能够显著抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞的增殖。 2.槲皮素抑制了TGF-β1诱导的成纤维细胞Smad2、p-Smad、α-SMA、Ⅰ/Ⅲ型前胶原mRNA和蛋白的高表达。 3.槲皮素能够通过TGF-β1/Smad2信号通路改善TGF-β1诱导的成纤维细胞的生物活性的改变。
组织或器官纤维化是许多疾病致残、致死的主要原因,严重威胁着人们的健康与生命。目前针对纤维化病变的治疗手段极为有限,处于研究中的抗纤维化化合物很多,但进入临床的十分稀少。作用于多(?)点的吡非尼酮(PFD)的上市标志着抗纤维化药物的研究取得了很大挂展。因此,作用于多靶点纤维化药物的研究成为抗纤维化药物研究的重要发展方向。 吡非尼酮作用于纤维化过程不同环节中的多个靶点,是目前唯一以纤维化适应症上市的药物,课题组前期筛选到了吡非尼酮的ne-better药氟非尼酮(AKF-PD),已经完成临床前研究。由于强的首过作用,它们的作用强度均不够理想。鉴于该类化合物具有很好的临床应用前景,以此为基础的进一步研究具有重要意义。 购买Silmitasertib 本课题在前期研究的基础上,以保持吡非尼酮多靶点作用特点,(?)进代谢快的缺点为目标,设计了一系列新结构的化合物,以其获得(?)学和药动学方面性质优良的先导化合物,为开发新型抗纤维化药物提供候选化合物。并通过部分化合物的药效学研究,探讨高活性、多靶点作用的化合物结构特征,为抗纤维化药物的设计提供有价值的信息,为了解纤维化疾病的病理机制进行有益探索。 本课题以吡非尼酮为先导化合物,设计合成了苯基吡啶酮类化合(?)和苄基吡啶酮两个系列共52个吡啶酮类化合物。完成了目标化合物的结构确证,采用MTT法检测了目标化合物对NIH3T3细胞增殖的抑制活性。结果表明：设计的化合物活性均高于阳性对照药物氟非尼酮,选取4个化合物进行了大鼠体内活性测试和动物急性毒性实验,其中化合物3r与2j显示了很好的成药性
本课题初步归纳了设计合成的两系列吡啶酮类化合物抗纤维化活性的构效关系。结果表明：吡啶酮5-三氟甲基取代后活性明显升高；-苄基取代活性优于1-苯基取代；1位苯基取代基通过氨烷基链连接杂环后活性显著上升；苄基系列中杂环与苯环以氨丙基链连接为好,(?)位取代活性较高；而苯基系列苯环与杂环以氨乙基链连接为佳。在苯环上为非杂环取代的化合物中,侧链长短与活性关系不明显。 本课题在前期工作的基础上系统地合成了两个系列的吡啶酮类化合物,评价了目标化合物的抗纤维化活性,得到了2个成药性较好的化合物；本课题首次研究了吡啶酮类似物的抗纤维化活性构效关系,为进一步研究具有更高抗纤维化活性的新型多靶点化合物提供了重要信息和打下一了坚实基础。
寻找胚胎干细胞以及胚胎干细胞分化得到的细胞系的特异性标志物一直是干细胞研究领域的热点问题。由于干细胞保持自我更新和分化的信号通路尚未完全阐明,体内分化过程无法在体外培养模型中重现,专一的针对胚胎干细胞及其分化细胞系标志物的缺乏,影响了干细胞及其分化细胞系在临床中的应用。 本研究通过培养并定向诱导猕猴胚胎干细胞,利用检测胚胎干细胞关键基因OCT4,Nanog,SOX2的表达情况以及碱性磷酸酶(AKP)的检测来鉴定胚胎干细胞的培养状态;并用悬浮培养和RA+B27诱导的方法来定向诱导猕猴胚胎干细胞使其向神经干细胞方向分化。利用免疫荧光检测和RT-PCR检测神经干细胞关键基因Nestin, SOX2, Mushashi-1的表达来鉴定神经干细胞。并通过用差异酶处理法获得相对比较纯的神经干细胞。 利用噬菌体展示库PH.