背景胰腺癌是恶性程度极高的恶性肿瘤之一,近年来虽然手术切除率和根治率有所提升,但5年生存率仍在8%左右。胰腺癌的免疫微环境以免疫抑制性T细胞聚集为特征,多种途径诱导的免疫逃逸是胰腺癌极早期即可发生淋巴结和远处转移的重要原因,因此预后极差。外泌体是直径50-150 nm的细胞外囊泡,作为一种细胞间通讯载体,通过抑制免疫应答及诱导免疫抑制性分子的方式参与免SBE-β-CD鐢熶骇鍟唡SBE-β-CD鐮旂┒璐拱疫调节。然而,胰腺癌来源的外泌体通过何种途径诱导免疫抑制性T细胞来介导免疫逃逸,具体机制尚未完全阐明。目的本研究旨在探索胰腺癌来源的外泌体对T细胞基因表达、免疫表型及免疫功能的影响,为阐明胰腺癌的免疫逃逸机理及探索精准免疫治疗提供理论依据。方法采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离纯化外周血T淋巴细胞并进行体外培养;采用超速离心法提取胰https://www.selleck.cn/products/brigatinib-ap26113.html腺癌细胞培养上清液中的外泌体,并使用电子显微镜、粒径分析及分子标记物Western Blot检测对提取的外泌体进行纯度鉴定;将提纯的胰腺癌细胞来源外泌体用于刺激体外培养的T淋巴细胞。使用CD63-td Tomato标记外泌体并用于刺激体外培养的T淋巴细胞,使用共聚焦显微镜追踪T淋巴细胞对外泌体的摄取情况。通过CyTOF方法检测对照组TGS 1101细胞(Control T cells,Ctrl-T)外泌体刺激T细胞(Exosomes stimulated T cells,Exo-T)免疫相关蛋白的表达及免疫表型的分布。使用流式细胞术及组织切片免疫荧光染色方法在胰腺癌患者外周血及手术切除肿瘤组织中检测T细胞PD-1蛋白的表达情况。通过转录组测序和基因集合富集分析方法检测Exo-T的基因表达及信号通路变化。采用ELISA、流式细胞术检测Exo-T的生物学功能改变。