5h即升高,3h达到高峰,6h后逐渐降低,损伤后3d降至正常水平；p38 MAPK的表达在损伤后1h开始升高,6h达到高峰,然后逐渐降低,损伤后5d降至正常水平；VCAM-1的表达在损伤后1h即升高,12h达到高峰,1d后逐渐降低,损伤后9d降至正常水平。结论：IL-1β、p38 HDAC 抑制剂 MAPK及VCAM-1在大鼠闭合性脑损伤早期即迅速升高,后期逐渐恢复正常,3者在损伤后表达的时序性变化特点基本一致,共同参与脑损伤的病理生理过程：3者作为联合指标,为推断闭合性脑损伤时间提供实验性依据。
目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人恶性胶质瘤U251细胞增殖、细胞周期与凋亡的作用,探讨其分子机制。 方法:采用MTT法检测DADS抑制恶性胶质瘤U251细胞增殖的IC50值;流式细胞术检测DADS对U251细胞周期分布及凋亡率的影响;Real Time PCR、Western blot和免疫细胞化学分别检测细胞周期与凋亡相关基因与蛋白的表达;光学显微镜观察凋亡形态学改变。 结果:DADS呈浓度依赖性抑制U251细胞增殖,15、30、45、60mg·L-1DADS对U251细胞增殖的抑制率分别为22.01%、38.82%、49.23%、55.27%,差异均有显著性意义(P<0.05)。免疫细胞化学结果显示,45mg·L~(-1)DADS处理48h后,Bcl-2表达较未处理细胞表达明显下调,平均光密度值从0.75±0.06下降至0.34±0.03(P<0.05);Bax表达增强,平均光密度值0.63±0.04高于对照组0.26±0.03(P<0.01);Bcl-2蛋白与β-actin平均灰度值比为0.47±0.05,与对照组(0.67±0.06)比,差异有统计学意义(P
分子伴侣是一类在进化上十分保守的蛋白,调节细胞的基因表达、DNA复制、信号传导、分化、凋亡等。Mortal
in,作为HSP70分子伴侣家族成员之一,具有多种功能包括应激反应、胞内运输、线粒体输入、调控细胞增殖和分化等。 Mortalin在多种肿瘤中高表达,与肿瘤的发生、发展有关,但其与卵巢癌的关系知之甚少。本实验以含183例卵巢癌组织的芯片为基础,经免疫组化检测Mortalin在卵巢癌中的表达情况。结果显示,Mortalin在卵巢癌中高表达,且其表达随着卵巢癌分期的增加而增加；Mortalin在浆液性卵巢癌中的表达明显高于其在粘液性卵巢癌中的表达。由于卵巢癌分化程度不一样,其对化疗药物的敏感性存在差异,分化程度越低,对化疗药物的敏感性越差；肿瘤分期越高,其细胞分化程度越低,对化疗药物的敏感性也越差；而且,浆液性卵巢癌相对于粘液性卵巢癌更易产生耐药性。基于以上基础,我们推测Mortalin的高表达和卵巢癌耐药间可能存在一定的关系,有待于进一步证实。
2MeOE2 实时定量PCR及免疫印迹检测顺铂敏感型卵巢癌细胞(A2780)和顺铂耐药型卵巢癌细胞(A2780/cis)中Mortalin的表达,结果表明A2780/cis细胞中Mortalin的mRNA和蛋白表达水平都明显高于A2780细胞。下调A2780/cis细胞中Mortalin表达能够增强细胞对顺铂的敏感性；克隆形成实验和侵袭实验进一步证实,下调A2780/cis细胞中Mortalin表达可以有效的降低细胞的增殖率及侵袭性；裸鼠试验说明,下调Mortalin在A2780/cis细胞的表达可以有效地抑制其在体内的生长。 抑癌基因p53,与Bax、Mortalin等形成复合体,促进肿瘤的发生、发展。在卵巢癌中,顺铂引起的细胞凋亡是p53依赖的,p53的异常会导致卵巢癌的耐药。免疫荧光结果显示,下调A2780/cis细胞中Mortalin的表达能够重新激活p53、增强p53的核转位,即Mortalin抑制了p53的活力及其核转位,参与了卵巢癌的耐药。 Selleck Proteasome 抑制剂 PI3K/AKT和MEK/ERK是两条主要的促存活通路,Akt和Erk1/2作为这两条通路中的效应分子,激活下游蛋白,发挥抗凋亡作用,促进肿瘤的发展、转移等。免疫印迹结果显示,下调A2780/cis细胞中Mortalin表达能够明显抑制Akt和Erk1/2的磷酸化；再加以顺铂处理时,Akt的磷酸化水平仍保持在极其低的水平,而Erk1/2的活力却被激活。下调Mortalin表达加以顺铂处理时,抑制了PI3K/AKT存活信号通路的同时增强了P38/MAPK凋亡信号通路。下调Mortalin表达的A2780/cis细胞的p38的活力明显强于A2780/cis细胞,增强了顺铂诱导的细胞凋亡。
综上所述,Mortalin的高表达参与卵巢癌的耐药,下调Mortalin表达可以有效的降低卵巢癌耐药细胞的增殖率、侵袭率,增加其对顺铂的敏感性,逆转卵巢癌的耐药性,这与下调Mortalin表达重新激活p53活性和增加p53核转位、降低Akt的磷酸化、增加Erk1/2和p38的磷酸化相关。鉴于以上研究基础,Mortalin可以作为治疗卵巢癌耐药的一个潜在靶点。
目的： 研究急性单核细胞白血病细胞系U-937分化前后MS4A7基因表达水平的变化情况。揭示其与白血病不同阶段的相关性。研究调控MS4A7基因表达的主要信号通路,揭示异常细胞信号转导引起白血病和MS4A7基因表达异常的相关性。构建含有MS4A7基因启动子的虫荧光素酶报告基因质粒,建立启动子区缺失片段的报告基因质粒,研究MS4A7基因启动子区的启动活性片段,以及调控MS4A7启动子区转录活性的转录因子。 方法： 1.50nmol/L佛波酯(PMA)刺激6孔板培养的U-937白血病细胞系,在诱导刺激的0、1、3、5d后收集总RNA,反转录为cDNA后实时荧光定量PCR检测细胞内MS4A7基因mRNA表达量的改变。 2.ERK抑制剂U0126、p38 MAPK抑制剂SB230580、JNK抑制剂SP600125分别预处理U-937细胞6h,第一组处理后加入PMA,第二组不加PMA,两组细胞均作用48h后收集总RNA,反转录为cDNA后实时荧光定量PCR测定两种处理后对MS4A7基因的mRNA表达水平的影响。 3.PCR扩增MS4A7基因启动子区片段(-1536bp-+164bp),通过双酶切反应将MS4A7基因启动子片段和虫荧光素酶载体pGL3-Basic定向连接,得到pGL3-MS4A7-Promoter1～5重组质粒。重组子序列经双酶切、测序鉴定得到确认。将pGL3-MS4A7-Promoter系列重组质粒转染入细胞白血病细胞系(HL-60、U-937)和非白血病细胞系(HeLa、KOV-3),通过检测细胞中虫荧光素酶的活性探究MS4A7启动子活性片段。 4.建立基于实时荧光定量PCR分析的染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation, ChIP)方法初步探讨转录因子ATF2和ELKl对MS4A7基因启动子的调控作用。 结果： 1.U-937在50nmol/L PMA刺激24h后MS4A7基因mRNA表达量升高(P<0.05),并随着刺激时间的延长和细胞的分化,表达进一步增强,3-5d表达量维持恒定(P0.