通过体内、体外实验探索IL-35是否影响吉西他滨对胰腺癌细胞的化疗敏感性。3.通过DHE染色、JC-1染色分别检测吉西他滨刺激后不同IL-35表达水平的胰腺癌细胞活性氧类(Reactive oxygen species,ROS)水平及细胞膜电位水平,采用Western blot检测Caspase3、BAX、BCL-2等ROS相关凋亡信号通路激活情况。通过RON-01910OS清除实验及ROS诱导实验明确ROS在IL-35介导的化疗耐药中的作用。4.通过转录组测序筛选IL-35下游影响ROS代谢的靶标SOD2;Western blot及RT-PCR验证测序结果;采用Western blot、RT-PCR、CHIP及双荧光素酶实验明确IL-35调控SOD2的分子机制。进一步通过阻断试验确定SOD2在I可能L-35介导的化疗耐药中的作用。5.通过RT-PCR、Western-blot、ELISA检测等方法检测吉西他滨处理后胰腺癌细胞IL-35表达水平的变化。通过生物信息学分析筛选能够影响IL-35表达的信号通路,采用染色质免疫共沉淀以及双荧光素酶实验探索吉西他滨上调IL-35的分子机制。6.通过小鼠皮下成瘤模型初步探索IL-35中和BAY 73-4506体外抗体在胰腺癌化疗增敏中的作用。结果1.通过对接受吉西他滨单药化疗的92例胰腺癌组织标本及49例胰腺癌肝转移穿刺标本进行免疫组化染色发现,IL-35高表达患者的无复发生存期明显低于低表达患者(中位生存期375.0 vs 456.7天);同时,IL-35高表达患者吉西他滨的化疗效果较差。2.体外吉西他滨杀伤实验证实,过表达IL-35导致胰腺癌细胞对吉西他滨敏感性降低,而降表达IL-35导致胰腺癌对吉西他滨敏感性升高。