3.四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖情况,并通过线性回归求得NA的半数有效浓度(EC50)。 4.蛋白免疫印迹法(western blot)、RT-PCR法测定加入激动药、拮抗药和信号分子抑制剂后,HSC-T6的活化指标:转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况;ECM半抑制浓度分泌指标:金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、I型胶原(ColΙ)的表达情况。 5.Western blot、RT-PCR法测定PKC-PI3K-AKT信号通路中信号分子PKC、PI3K的表达和AKT的磷酸化。 结果: 1. HSC-T6表达α1-AR的情况α1-AR多表达于HSC-TBVD-523体内6细胞膜上,且α1B-, α1D-AR表达较多,α1A-AR未检测到表达。 2. NA及特异性受体亚型拮抗药对HSC-T6增殖的影响NA浓度依赖性促HSC-T6增殖,EC50为277nmol/L,加入α1B-AR、α1D-AR拮抗药,细胞增殖均受到明显抑制,且α1B-AR对NA促HSC-T6查找更多增殖的抑制作用为非竞争性拮抗,α1D-AR的作用为竞争性拮抗。 3. NA、α1肾上腺素受体亚型拮抗药和多种信号通路信号分子抑制剂对HSC-T6激活和ECM分泌的影响NA促进HSC-T6的TGF-β1、α-SMA、TIMP-1和ColΙ表达;加入α1B-AR、α1D-AR拮抗药及Gα蛋白偶联的PKC-PI3K-AKT信号通路各信号分子抑制剂后,可显著下调它们的的表达。