0完成。与常数项比较,采用单样本t检验；两样本均数的比较采用两独立样本t检验。p<0.05)；RT-PCR结果显示,与sham组大鼠比较,肾性高血压大鼠AT1R的mRNA水平也是显著升高(P<0.05),显著的抑制血浆NE水平(P<0.05),只有脑室内注射losartan可以降低Ras-GTP的表达(P<0.05),而p38的抑制剂SB203580、caspase-3的抑制剂Z-DEVD-FMK不能提高Bcl-2的表达(P
研究背景

什么 动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)是冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease, CAD)的主要病理基础。也是心血管系统疾病中最常见的疾病,严重危害人类健康,而AS的发病机制至今尚未明确。随着动脉粥样硬化研究的不断深入,人们逐渐认识到炎症反应是AS发生、发展过程的的病理基础。抗炎治疗是防治AS相关疾病的重要策略之一。 内脏脂肪素(visfatin)是新发现的一种脂肪细胞因子,已有研究visfatin通过促炎症反应在AS的发生和发展中起重要作用。临床研究显示,冠心病患者血浆的visfatin的升高伴有白介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a)等炎症介质的升高。且研究发现2型糖尿病患者的血浆visfatin水平与血管内皮细胞功能成显著负相关,而众所周知血管内皮损伤是AS发生的始动环节之一,从起始环节干预AS的形成,保护血管内皮免受各种炎症因子的作用,是抗AS发生的关键。 丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)是一类存在于真核细胞中的丝/苏氨酸蛋白激酶。MAPK包括了3种主要的亚家族：SAPK/JNK(stress-activated protein kinases/c-Jun NH2-terminal kinases)、 ERKl/2(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)和p38分裂原激活蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)。其中P38MAPK和JNK通路主要对炎性细胞因子和多种类型的细胞应激信号进行传导,与细胞分化、细胞凋亡、应激反应密切相关。且已有研究已表明P38MAPK、JNK通路均参与了AS的病理过程。本研究旨在探讨Visfatin是否受P38MAPK、JNK信号分子的调节诱导HUVEC损伤从而参与AS炎症反应。 定心方(Dingxin Recipe, DXR)由丹参、三七、赤芍、瓜萎、茯苓、党参、灵芝、酸枣仁、苦参、黄连等组成,具有益气活血祛痰燥湿之功效,临床研究证明其对冠心病有良好的疗效,其对缺血及再灌注过程的炎症激活有显著的抑制作用同时降低缺血再灌注损伤大鼠JNK和P38MAPK蛋白的表达,增强ERK蛋白的表达来。本论文要探讨定心方是否受P38MAPK和JNK信号通路调控发挥保护由visfatin诱导损伤的HUVEC,从而起到抗AS的作用。

第一章visfatin对HUVEC增殖抑制及定心方含药血清的干预 目的： 不同浓度及时间visfatin对HUVEC增殖影响 不同浓度及时间DXR含药血清对HUVEC增殖影响 DXR含药血清对visfatin抑制的HUVEC的增殖影响 方法及分组： GSK1120212半抑制浓度 定心方含药血清的制备：60只雄性SD大鼠,体重200-250g,随机分为2组,每组30只,分别灌服定心方水煎剂和等体积生理盐水。定心方给药剂量为18.59g/kg/d,每日药量分两次灌胃,连续7d。末次给药前,禁食不禁水12h,末次给药2h后行10%水合氯醛(4ml/kg)麻醉,腹主动脉采血。血标本4℃静置4h,3500r/min离心10min,分离血清,0.22μ.m微孔滤膜过滤除菌,56℃灭活30mmin,每只大鼠血清单独分装,-80℃保存备用。

Visfatin浓度组：分别用0、50、100、200μg/Lvisfatin处理HUVEC24h。 Visfatin时间组：以100μg/L visfatin分别处理HUVEC0、6、12、24、48h。 DXR含药血清浓度组：将提出的含药血清分别稀释为0、0.25%、0.5%、1%、2%、5%、10%、20%DXR含药血清加入HUVEC作用24h。 并且 DXR含药血清时间组：用0.5%DXR含药血清分别作用0、6、12、24、48h。 DXR含药血清及相关的通路抑制剂预处理细胞分组：P38MAPK通路分组：①正常对照组；②Visfatin+SB203580:SB203580(终浓度为10μmol/L)预孵育细胞30min,加入终浓度为100μg/L Visfatin刺激24h；③Visfatin+DXR药物血清组：加入5%DXR药物血清预孵育1h,加入终浓度为100μg/L Visfatin刺激24h；④Visfatin组：加入终浓度为100μg/L Visfatin刺激24h；⑤Visfatin+空白血清组：加入5%空白血清预孵育1h,加入终浓度为100μg/L Visfatin刺激24h。 JNK通路分组：①对照组；②visfatin+DXR药物血清组：加入5%DXR药物血清预孵育1h,加入终浓度为100μg/L的Visfatin刺激24h；③Visfatin+空白血清组：加入5%空白血清预孵育1h,加入终浓度为100μg/L的Visfatin刺激24h；④visfatin组：加入visfatin100μg/L刺激24h；⑤visfatin+SP600125组：加入SP600125(终浓度为10μmol/L)预处理细胞30min,再给予visfatin100μg/L刺激24h。 MTT比色法测定HUVEC的增殖：将HUVEC接种于九十六孔板,按实验分组给予相应的处理因素后,每组设6个复孔。按MTT法具体操作步骤进行操作,在酶标仪490nm处测其OD值。 结果： 1.不同浓度及时间的Visfatin对HUVEC增殖的影响 与对照组比,50μg/Lvisfatin作用24h对HUVEC增殖无显著抑制作用,100、200μg/L visfatin作用24h抑制]HUVEC增殖具有显著性(P<0.05或P<0.01),经统计学处理组间差异无显著性。与对照组比,5%DXR含药血清作用6、12h对HUVEC的增殖无显著性影响；5%DXR含药血清作用24、48h均能显著性的增强细胞的增殖(P<0.01)；与visfatin组比,5%DXR含药血清、SB203580、SP600125作用24h可以增强由visfatin损伤的HUVEC增殖(P<0.05或P<0.01)；与visfatin组比,DXR药物血清、SB203580、SP600125均可显著性的抑制由visfatin诱导的IL-6和TNF-a表达(P<0.05或P<0.05或P<0.