在细胞活性测定实验中,把人脐静脉内皮细胞株CRL-1730以每孔105个细胞的密度接种到24孔板中,孵育过夜至细胞贴壁融合。将细胞分组,然后分别加入HMGB1A-box (10μg/ml), sRAGE (20μg/ml), SB203580(10μM), PD98059(25μM), Bay117082(1μM或者它们的组合进行干预。24小时后,将细胞收集起来,用细胞计数仪计数不同干预组细胞总数的变化,用台盼蓝染色的方法计数活细胞数目的差异,并且用CCK-8的方法检测细胞活性的差异。

4.实验中,用SPSS17.0统计软件进行统计分析,实验数据用均数±标准误来表示。不同实验组之间的差异用单因素方差分析进行分析,两组数据之间的比较用t检验进行分析,P值
血清睾酮含量下降是人类和啮齿类动物雄性衰老的主要表现，并出现生殖功能、肌力、骨密度以及其他生理指标的下降。睾酮主要是在腺垂体分泌的黄体生成素（luteinizing hormone, LH）刺激下由睾丸间质细胞合成分泌的。尽管血清睾酮水平下降应与下丘脑-垂体轴功能改变有关，但是血清LH水平随年龄的增加并没有明显改变，故初级性腺成了研究焦点。对年轻和老年大鼠睾丸间质细胞计数表明损失的睾丸间质细胞并不能解释年龄有关的睾酮水平降低，因此睾丸间质细胞功能的变化与之关系更密切。 近年来，氧化应激一直备受关注。“自由基学说”认为衰老的细胞处于一种氧化和抗氧化失衡状态，无法清除体内多余的活性氧(reactiveoxygen species ROS)，导致细胞内大分子物质的氧化损伤，包括细胞膜脂类物质的过氧化、酶失活、蛋白质氧化和DNA损伤，同时衰老的机体也形成了一套氧化应激应答系统来应对自由基。抗氧化酶在保护细胞免受自由基损伤中扮演重要角色。核因子NF-E2相关因子(Nuclear http://www.selleck.cn/products/Abiraterone-Acetate-CB7630.html factorerythroid2-related factor2, Nrf2)可通过与抗氧化反应元件（antioxidantresponsive element, ARE)的相互作用来调节抗氧化酶的转录，是迄今为止发现的最为重要的内源性抗氧化应激通路。慢性炎症也是衰老器官生理功能下降的一个重要因素。NF-κB (Nuclear factor kappa beta, NF-κB)作为一个氧化还原状态敏感的转录因子蛋白家族成员之一，可调控促炎症因子的表达，包括：TNF-α、IL-1β、IL-2、iNOS、COX2等。在衰老过程中，NF-κB转录因子的激活和慢性炎症似乎成了一个普遍现象。 本研究旨在利用功能学、形态学和分子生物学等方法，从睾丸组织、间质细胞两个水平，以血清睾酮的年龄性下降为着眼点，探讨Nrf2抗氧化应激通路以及NF-κB慢性炎症通路在睾酮下降过程中的作用机制。研究分为以下三个部分：（1）在小鼠睾丸组织中，检测了Nrf2和NF-κB两条通路的年龄性变化。（2）分离培养原代衰老睾丸间质细胞，证实ROS→p38MAPK→COX2、NF-κB→COX2和Nrf2信号通路与睾酮下降是密切相关的。（3）确定生命不同阶段的适度运动在年龄性睾丸生理功能下降过程中的不同作用。第一部分SAMs小鼠睾丸组织氧化应激和炎症反应的加龄变化及Nrf2和NF-κB在此过程中的作用

还有 目的：雄性体内年龄性血睾酮水平下降，导致机体生理功能下降。但是睾酮下降的具体机制还不清楚。本研究中，我们探讨了SAMP8(senescence-accelerated

mouse8)和其对照SAMR1雄性小鼠血睾酮水平年龄性(2,4,8,10月龄)下降过程中，氧化应激和炎症反应的变化，并检测了Nrf2和NF-κB信号通路在此过程中的作用。 Bleomycin 方法： 1实验动物：选用2，4，8，10月龄的雄性SAMP8和SAMR1小鼠，由河北医科大学第一医院提供，每组6只。 2睾酮测定：RIA法测定血清睾酮水平，批内和批间差异系数分别为8.9%和13.6%。 3免疫组化和免疫组织荧光方法检测睾丸组织COX2、 Nrf2、NF-κB的表达变化。 4生化学检测MDA和蛋白羰基的水平以及抗氧化酶SOD、CAT和GPX活性变化。 5Luminex多重细胞因子轮廓分析技术检测促炎症因子TNF-α, IL-1β的水平变化。 6RT-PCR和Western blotting检测StAR、Nrf2、NF-κB、COX2、P450scc、 P-P38和P38蛋白和mRNA水平的表达变化。 7数据分析：用SPSS16.0统计软件进行统计学分析，所有数据以x±s表示。年龄和种属间资料应用双因素方差分析。其次，同一种属内不同月龄资料采用单因素方差分析；同一月龄不同种属间的资料应用T-检验分析，P<0.001)。较R1鼠相比，P8鼠4、8、10月龄IL-1β和TNF-α水平均升高(P<0.05)。同样应用NF-κB抑制剂Bay也能部分恢复衰老细胞的睾酮水平(p
目的：探讨MAPK家族P38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和c-Jun氨基端激酶(JNK)信号通道在TGF-β1诱导的人肺泡上皮细胞上皮-间质转分化(EMT)中的意义,以及沙利度胺对肺泡Ⅱ型上皮细胞的EMT的作用以及对MAPK家族成员JNK、P38MAPK的影响,从而进一步揭示肺纤维化的发病机制,阐明沙利度胺抗肺纤维化的机理,为肺纤维化的治疗寻找新的切入点。 方法： 第一部分A549细胞在含TGF-β1(3ng/ml)的培养基培养48小时,从而诱导A549细胞上皮间质细胞转分化(EMT); JNK特异抑制物(SP-600125)预处理1小时,P38MAPK特异抑制物(SB-203580)预处理1小时,然后在含3ng/ml TGF-β1培养基培养48小时；基因沉默组在shRNA转染成功后在含3ng/ml TGF-β1培养基培养48小时。磷酸化的p38MAPK、JNK蛋白和mRNA检测在TGF-β1处理30min后进行,细胞形态评估、细胞标志蛋白以及mRNA的检测在TGF-β1培养基培养48小时后进行。所有组做A549细胞形态评估,并通过免疫印迹法(western blotting)检测A549细胞磷酸化p38MAPK和JNK的蛋白,以及间质细胞表型蛋白包括结蛋白(desmin)、波形蛋白(vimentin)、α-肌动蛋白(a-SMA)和上皮细胞表型蛋白包括E-钙粘素(E-cadherin)、紧密连接蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)、水通道蛋白-5(aquaporin-5,AQP-5)的表达。基因沉默组还需通过实时荧光定量PCR方法检测A549细胞的P38MAPK和JNK的mRNA.